【概(gai)要(yao)描述】大(da)鼠(shu)外(wai)周(zhou)血(xue)單個(ge)核細胞(bao)公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售的產(chan)品(pin)：MHCC97-H/LUC (STR)高轉移人(ren)肝(gan)癌細胞(bao)大(da)鼠(shu)三(san)叉(cha)神(shen)經元細(xi)胞(bao)大(da)鼠(shu)脊(ji)髓成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)大(da)鼠(shu)嗅(xiu)鞘(qiao)細(xi)胞大(da)鼠(shu)嗅(xiu)球(qiu)神(shen)經幹細胞(bao)大(da)鼠(shu)海(hai)馬神(shen)經幹細胞(bao)大(da)鼠(shu)杏(xing)仁(ren)核神(shen)經元細(xi)胞(bao)大(da)鼠(shu)角(jiao)膜(mo)上(shang)皮細胞大(da)鼠(shu)角(jiao)膜(mo)基(ji)質細胞大(da)鼠(shu)視(shi)網膜色(se)上(shang)皮(pi)細(xi)胞

大(da)鼠(shu)外(wai)周(zhou)血(xue)單個(ge)核分(fen)離(li)自(zi)外周(zhou)血(xue)；外周(zhou)血(xue)是除(chu)骨髓之(zhi)外(wai)的(de)血液(ye)，臨(lin)床(chuang)上(shang)常(chang)用(yong)壹(yi)些方法(fa)把骨髓中(zhong)的(de)造血幹(gan)細胞釋(shi)放(fang)到(dao)血液(ye)中(zhong)，再(zai)在(zai)從(cong)血液(ye)中(zhong)提(ti)取分(fen)離(li)得到(dao)造血幹(gan)細(xi)胞，我們把這樣(yang)得(de)到(dao)的幹細(xi)胞(bao)稱為外(wai)周(zhou)血(xue)幹細(xi)胞，在(zai)二(er)十壹世紀初(chu)人(ren)類(lei)開始(shi)的生(sheng)命(ming)方舟計劃中提(ti)出(chu)外周(zhou)血(xue)這壹(yi)新概(gai)念(nian)。外周(zhou)血(xue)單個(ge)核細胞(bao)（PBMC）即(ji)外(wai)周(zhou)血(xue)中具(ju)有單(dan)個(ge)核的細(xi)胞，包括淋(lin)巴(ba)細(xi)胞和單核細胞(bao)。目前(qian)，主(zhu)要的分(fen)離(li)方法(fa)是(shi)密度(du)梯度(du)離(li)心法(fa)，因(yin)為血(xue)液(ye)中(zhong)各有形(xing)成(cheng)分(fen)的(de)比重存在(zai)差(cha)異，因(yin)此(ci)得以(yi)分(fen)離(li)出(chu)不同(tong)的(de)細(xi)胞(bao)。
方法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司實(shi)驗室分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)外(wai)周(zhou)血(xue)單個(ge)核采用取(qu)外(wai)周(zhou)血(xue)、通(tong)過(guo)密度(du)梯度(du)離(li)心法(fa)制(zhi)備(bei)而來，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗室分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)外(wai)周(zhou)血(xue)單個(ge)核經過(guo)檢測(ce)，且(qie)不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細(xi)菌(jun)、酵母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本(ben)公(gong)司所(suo)有產(chan)品(pin)僅供科學實(shi)驗，不做其(qi)他科學實(shi)驗外的(de)使用(yong)！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率 每(mei)2-3天換液(ye)壹(yi)次

生長特(te)性(xing) 懸浮(fu)

細胞形(xing)態(tai) 圓(yuan)形(xing)

傳代(dai)特(te)性(xing) 不增殖(zhi)；不傳代(dai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實驗器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管、離(li)心(xin)管、手術器械(xie)等(deng)，並進(jin)行高壓滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合(he)適(shi)的(de)消毒處理。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑(ji)，確保(bao)其(qi)無菌(jun)且在(zai)有(you)效(xiao)期內。

3. 實驗動物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動物(wu)並進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或(huo)處死，獲(huo)取所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從(cong)已有的組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲取(qu)組(zu)織(zhi)。

取材與(yu)處理

1. 取材：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取出(chu)目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪(fang)、結(jie)締組(zu)織(zhi)等(deng)非目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取出(chu)的組織(zhi)用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次，以(yi)去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊，以(yi)便後(hou)續(xu)消化。

細胞分(fen)離(li)

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消化酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中消化壹(yi)段(duan)時間(jian)。期間可輕輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心管，使(shi)消化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當組(zu)織(zhi)塊大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細胞團(tuan)時，加(jia)入(ru)含血(xue)清的(de)培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾與離心(xin)：用細胞(bao)篩過(guo)濾細胞懸液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉速離心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細胞觀察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形(xing)態(tai)、生(sheng)長狀態、密度(du)等(deng)，記錄細胞的(de)變(bian)化情(qing)況，如(ru)發現(xian)細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異(yi)常(chang)，及時采取相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計數與(yu)活力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可采用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方法(fa)對細(xi)胞進(jin)行計數和(he)活力檢(jian)測(ce)，以(yi)了解細(xi)胞(bao)的生長情況和健(jian)康狀態。

壹、取材(cai)與分(fen)離(li)

1. 快速操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴(bao)露於(yu)室溫或(huo)非(fei)營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類(lei)型(xing)選擇(ze)消化酶(mei)，避(bi)免(mian)過(guo)度(du)消化導(dao)致細胞損(sun)傷(shang)。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)解離(li)狀態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清或(huo)特(te)定生長因(yin)子(zi)的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞需(xu)添加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻繁更(geng)換培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可能需(xu)要(yao)包被培養(yang)皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時密度(du)建(jian)議控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接觸(chu)抑(yi)制和(he)分(fen)化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制

1. 無菌(jun)操作(zuo)

- 全程在(zai)超(chao)凈臺操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交叉汙染。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可添加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長期使用可能影(ying)響細胞(bao)活性(xing)。

2. 支原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定期檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀態監控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細胞形(xing)態(tai)、密度(du)及培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時更(geng)換培養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可能提(ti)示(shi)汙(wu)染或(huo)營養(yang)不足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有(you)限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍(dong)存早期代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議使用 DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用凍(dong)存培養(yang)基(ji)），梯度(du)降溫(wen)後(hou)液(ye)氮(dan)保(bao)存。