【概(gai)要描(miao)述(shu)】大(da)鼠骺(hou)軟骨細(xi)胞公(gong)司正在出售(shou)的(de)產(chan)品：HuH-1肝(gan)癌(ai)人外(wai)周血單個(ge)核細胞人脾(pi)星(xing)狀細(xi)胞人脾(pi)外(wai)周血單個(ge)核細胞人脾(pi)成纖(xian)維細胞人脾(pi)小(xiao)梁(liang)平(ping)滑肌細(xi)胞(bao)人骨髓(sui)巨噬(shi)細胞(bao)人外(wai)周血間(jian)充(chong)質幹細胞人CIK細(xi)胞(bao)人脾(pi)臟(zang)單核(he)細胞(bao)

大(da)鼠骺(hou)軟骨分(fen)離(li)自(zi)骨骺(hou)生長板(ban)；骨骺(hou)生長板(ban)位(wei)於(yu)長骨兩(liang)端骨骺(hou)和骨幹之間(jian)的(de)軟骨組(zu)織，其(qi)中(zhong)的(de)骺(hou)軟骨細(xi)胞可分(fen)裂、成熟、肥大(da)，最終被(bei)骨組(zu)織所(suo)替(ti)換(huan)，對(dui)於(yu)長骨生長具(ju)有重要作用(yong)。幼稚(zhi)的骺(hou)軟骨細(xi)胞位(wei)於(yu)軟骨組(zu)織的(de)表(biao)層，單(dan)個(ge)分布(bu)、體(ti)積(ji)較(jiao)小、呈(cheng)橢(tuo)圓形，長軸(zhou)與(yu)軟骨表(biao)面平(ping)行(xing)，越向(xiang)深層的(de)骺(hou)軟骨細(xi)胞體(ti)積(ji)之間(jian)增大(da)呈(cheng)圓(yuan)形，細(xi)胞(bao)核(he)圓形或卵(luan)圓(yuan)形，染(ran)色(se)淺(qian)，細胞質弱嗜(shi)堿(jian)性(xing)，常(chang)見數(shu)量不(bu)壹的脂(zhi)滴(di)。成熟的骺(hou)軟骨細(xi)胞多(duo)2-8個成群(qun)分布(bu)於(yu)軟骨陷(xian)窩內(nei)，這(zhe)些(xie)骺(hou)軟骨細(xi)胞由同壹個母(mu)細(xi)胞(bao)分(fen)裂增殖(zhi)而成，稱(cheng)為同源(yuan)細胞(bao)群(qun)。電鏡下，骺(hou)軟骨細(xi)胞有突起和皺褶(zhe)，細(xi)胞(bao)質內(nei)有大(da)量的(de)粗面(mian)內(nei)質網和(he)發(fa)達的(de)高爾基復合(he)體(ti)及(ji)少(shao)量的(de)線粒(li)體。在組(zu)織(zhi)切片(pian)中(zhong)，骺(hou)軟骨細(xi)胞收(shou)縮(suo)為(wei)不規(gui)則(ze)形，在軟(ruan)骨囊(nang)和(he)細(xi)胞(bao)之間(jian)出現較(jiao)大(da)的腔隙。體外(wai)培養的(de)骺(hou)軟骨細(xi)胞對(dui)於(yu)研究(jiu)其生理(li)功(gong)能、藥(yao)物作用(yong)以及(ji)各種(zhong)致病因(yin)素(su)作用(yong)下的病理(li)生理(li)改(gai)變具重要意(yi)義(yi)。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠骺(hou)軟骨采用(yong)膠(jiao)原(yuan)酶-中(zhong)性(xing)dan白(bai)酶聯(lian)合(he)消化(hua)並軟(ruan)骨細(xi)胞專(zhuan)用(yong)培養基(ji)培養篩(shai)選(xuan)制(zhi)備而(er)來，細胞總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠骺(hou)軟骨經(jing)Ⅱ型(xing)膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可達(da)90%以上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細(xi)菌、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本(ben)公(gong)司所(suo)有產(chan)品僅(jin)供科(ke)學實驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他科(ke)學實驗外(wai)的使(shi)用(yong)！

培養基(ji) 含FBS、生長添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)3-4天(tian)換(huan)液(ye)壹次

生長特性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞形態 梭形、多(duo)角形

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 可傳(chuan)5代(dai)左右；3代(dai)以內(nei)狀態

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養條件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實驗器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培養皿、培養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離(li)心(xin)管、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並進(jin)行(xing)高壓(ya)滅菌或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)消毒(du)處理(li)。

2. 試劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合(he)適的(de)培養基(ji)、消化(hua)酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等(deng)）、胎牛血清、雙(shuang)抗等(deng)試劑，確(que)保(bao)其無(wu)菌且在有效期(qi)內(nei)。

3. 實驗動物(wu)或組(zu)織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合(he)適的(de)動物(wu)並(bing)進行(xing)相應(ying)的麻醉(zui)或處死，獲取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或從(cong)已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在無(wu)菌(jun)條件(jian)下，迅速(su)取(qu)出目標組織(zhi)，盡(jin)量減(jian)少(shao)對(dui)組織(zhi)的損傷，並去除(chu)多(duo)余的(de)脂(zhi)肪、結(jie)締(di)組織(zhi)等(deng)非目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出的組織(zhi)用(yong)預冷(leng)的無(wu)菌PBS沖(chong)洗數(shu)次，以去除(chu)血液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組織剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後續消化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消化(hua)：將剪碎(sui)的組織塊(kuai)放(fang)入含有適量(liang)消化(hua)酶的離(li)心(xin)管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫搖床或培養箱中(zhong)消化(hua)壹段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖晃離(li)心(xin)管，使(shi)消化(hua)更均(jun)勻(yun)。

2. 終止消化(hua)：當組織塊(kuai)大(da)部分(fen)被(bei)消化(hua)成單(dan)細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時，加(jia)入含血清的(de)培養基(ji)終止消化(hua)。

3. 過(guo)濾與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾細胞懸液(ye)，去除(chu)未消化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾液(ye)以適當的轉速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒(dao)置顯微(wei)鏡觀察(cha)細胞(bao)的形態、生長狀(zhuang)態、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的變化(hua)情況(kuang)，如發(fa)現(xian)細胞(bao)汙染或異(yi)常(chang)，及(ji)時采取(qu)相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計數(shu)與活(huo)力檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時，可采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染色(se)等(deng)方(fang)法對(dui)細胞(bao)進行(xing)計數(shu)和活(huo)力檢(jian)測，以了解細(xi)胞的(de)生長情況(kuang)和健(jian)康(kang)狀態。

壹、取(qu)材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操作

- 組織取(qu)材後需立即處理(li)，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或非(fei)營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或生理(li)鹽(yan)水(shui)沖洗組(zu)織，去除(chu)血液(ye)、雜質。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇

- 根(gen)據組織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇消化(hua)酶，避(bi)免(mian)過度(du)消化(hua)導致(zhi)細(xi)胞損傷。

- 消化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格控(kong)制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡觀察(cha)細胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態。

二、培養條件(jian)優化(hua)

1. 培養基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用(yong)含血清或特定生長因(yin)子的(de)培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞需添加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更(geng)換培養基(ji)品(pin)牌或批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細胞(bao)適應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較(jiao)弱，可能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度(du)建(jian)議控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會(hui)導致(zhi)接觸抑(yi)制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使(shi)用(yong)壹次性(xing)耗(hao)材，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養基(ji)中(zhong)可添加(jia)雙抗，但(dan)長期(qi)使(shi)用(yong)可能(neng)影響細胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後需及(ji)時丟棄細胞。

四、狀態監控(kong)

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形態、密(mi)度(du)及(ji)培養基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時更(geng)換培養基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)壹次）。

- 異(yi)常(chang)形態（如細(xi)胞(bao)變圓、碎(sui)片(pian)增多）可能(neng)提(ti)示汙(wu)染(ran)或營養不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分(fen)裂次數(shu)有限（壹般 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存(cun)培養基(ji)），梯(ti)度(du)降溫後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。