【概(gai)要(yao)描(miao)述】大(da)鼠肌源(yuan)性(xing)幹細(xi)胞公司正在(zai)出(chu)售的產品(pin)：JHH-4肝(gan)癌人臍(qi)動(dong)脈內皮細(xi)胞人臍(qi)靜脈平滑肌細(xi)胞人臍(qi)動(dong)脈平滑肌細(xi)胞人臍(qi)帶間充質(zhi)幹細(xi)胞人臍(qi)血DC細(xi)胞人臍(qi)血間充質(zhi)幹細(xi)胞人羊(yang)膜間充質(zhi)幹細(xi)胞人胎(tai)盤周細(xi)胞人胎(tai)盤絨(rong)毛膜間質(zhi)細(xi)胞

本(ben)公司所有產品(pin)僅供(gong)科學(xue)實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科學(xue)實(shi)驗外(wai)的使用！

大(da)鼠肌源(yuan)性(xing)幹分(fen)離自(zi)肌肉組(zu)織；肌源(yuan)性(xing)幹細(xi)胞（MDSCs）屬於成體(ti)多(duo)能幹細(xi)胞，具(ju)有多(duo)細(xi)胞系(xi)分(fen)化和自(zi)我更(geng)新(xin)能(neng)力。通過誘導刺激(ji)，MDSCs可(ke)以分(fen)化為脂(zhi)肪、骨(gu)骼(ge)、軟骨(gu)、平滑肌和神(shen)經細(xi)胞等(deng)多(duo)種(zhong)細(xi)胞和(he)組(zu)織類型(xing)；作(zuo)為基因治(zhi)療(liao)和組(zu)織工(gong)程的供(gong)體細(xi)胞，已(yi)成為(wei)治(zhi)療(liao)心(xin)肌梗死、Duchenne氏(shi)肌營養(yang)不(bu)良(liang)等(deng)疾病的研(yan)究(jiu)熱(re)點；近(jin)年來，肌源(yuan)性(xing)幹細(xi)胞在(zai)治(zhi)療(liao)尿失禁等(deng)方(fang)面(mian)的應用逐步得到重(zhong)視(shi)。需(xu)註意的是，肌源(yuan)性(xing)幹細(xi)胞主要存(cun)在(zai)於(yu)骨骼(ge)肌組(zu)織中(zhong)，只(zhi)是成熟(shu)組(zu)織的很(hen)少部分(fen)細(xi)胞；平時(shi)處於靜止狀態，在(zai)細(xi)胞應(ying)激(ji)和(he)組(zu)織缺(que)失(shi)時(shi)才(cai)會(hui)激(ji)活(huo)；並且隨(sui)著(zhe)年齡的增加，所含(han)細(xi)胞數(shu)量(liang)逐漸減少，而(er)目前臨床(chuang)疾病的治(zhi)療(liao)主要是(shi)針對(dui)成體(ti)進(jin)行(xing)。肌源(yuan)性(xing)幹細(xi)胞的體外(wai)擴(kuo)增對(dui)細(xi)胞移植和幹細(xi)胞介(jie)導(dao)的基因治(zhi)療(liao)至(zhi)關(guan)重(zhong)要(yao)。對(dui)肌源(yuan)性(xing)幹細(xi)胞的擴增研(yan)究(jiu)發現(xian)，EGF、FGF-2和(he)SCF可(ke)以通過減(jian)數(shu)分(fen)裂或促使不(bu)分(fen)裂細(xi)胞進(jin)入(ru)有(you)絲分(fen)裂周(zhou)期(qi)，從(cong)而(er)刺激(ji)細(xi)胞增生(sheng)。更(geng)重(zhong)要(yao)的是，細(xi)胞因子(zi)誘導的體外(wai)擴(kuo)增可(ke)以通過自(zi)我更(geng)新(xin)不(bu)刺激(ji)細(xi)胞分(fen)化，從(cong)而(er)保(bao)持幹細(xi)胞表(biao)型。
方法(fa)簡介(jie)：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離的大(da)鼠肌源(yuan)性(xing)幹采用膠(jiao)原(yuan)酶(mei)-中性dan白(bai)酶-yi蛋(dan)白(bai)酶聯(lian)合消(xiao)化法(fa)結合(he)密度(du)梯(ti)度(du)離心(xin)、差速貼壁法(fa)，最(zui)後(hou)通過肌源(yuan)性(xing)幹細(xi)胞專用培養基培(pei)養(yang)篩選(xuan)制(zhi)備而(er)來，細(xi)胞總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離的大(da)鼠肌源(yuan)性(xing)幹經Sca-1免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以上(shang)，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌(jun)、酵母(mu)和真(zhen)菌(jun)等。

包被(bei)條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yang)基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻率 每2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性 貼壁

細(xi)胞形(xing)態 梭(suo)形(xing)、多(duo)角形(xing)

傳代特性(xing) 可(ke)傳5代左右；3代以內狀態

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養條(tiao)件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的培養(yang)皿、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管、離(li)心(xin)管、手(shou)術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅菌(jun)或其(qi)他(ta)合適(shi)的消毒(du)處理。

2. 試劑準備：配制(zhi)或購買合適(shi)的培養(yang)基、消(xiao)化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛血清(qing)、雙抗(kang)等試(shi)劑，確保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或組(zu)織來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相應的麻醉(zui)或處死，獲取所需(xu)組(zu)織；或從(cong)已(yi)有的組(zu)織樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組(zu)織。

取材與(yu)處理

1. 取材：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速取出(chu)目標(biao)組(zu)織，盡量(liang)減(jian)少對(dui)組(zu)織的損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多余(yu)的脂(zhi)肪、結締組(zu)織等(deng)非(fei)目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗：將取出(chu)的組(zu)織用預冷的無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗數(shu)次，以去(qu)除血液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組(zu)織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小塊，以便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎的組(zu)織塊放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶的離心(xin)管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培養箱(xiang)中消(xiao)化壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖晃離心(xin)管，使(shi)消(xiao)化更(geng)均(jun)勻。

2. 終止消化：當組(zu)織塊大(da)部分(fen)被消(xiao)化成單(dan)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或小細(xi)胞團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血清(qing)的培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與(yu)離心(xin)：用細(xi)胞篩過濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的組(zu)織碎片，然(ran)後(hou)將濾(lv)液(ye)以適(shi)當的轉速離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀察與(yu)檢(jian)測

1. 日(ri)常觀察：每(mei)天(tian)用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細(xi)胞的形態、生(sheng)長(chang)狀態、密度(du)等，記(ji)錄細(xi)胞的變化情(qing)況(kuang)，如發現(xian)細(xi)胞汙染(ran)或異常(chang)，及時(shi)采取相應措施(shi)。
2. 細(xi)胞計(ji)數(shu)與(yu)活(huo)力檢(jian)測：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采用臺(tai)盼藍染(ran)色等方法(fa)對(dui)細(xi)胞進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力檢(jian)測，以了解(jie)細(xi)胞的生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和健(jian)康狀態。

壹(yi)、取材與(yu)分(fen)離

1. 快速操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織取材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露於(yu)室(shi)溫(wen)或非(fei)營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗組(zu)織，去(qu)除血液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織類型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化酶，避免(mian)過度(du)消化導致細(xi)胞損(sun)傷(shang)。

- 消化時(shi)間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細(xi)胞解(jie)離(li)狀態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件優化

1. 培養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清(qing)或特定生(sheng)長(chang)因子(zi)的培養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞需(xu)添(tian)加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻繁更(geng)換(huan)培(pei)養基品(pin)牌(pai)或批次，減(jian)少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳代

- 原(yuan)代細(xi)胞貼壁能(neng)力較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳代時(shi)密(mi)度(du)建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會導(dao)致接觸抑(yi)制(zhi)和(he)分(fen)化。

三、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程在(zai)超(chao)凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使用壹次性(xing)耗材，避免(mian)交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用可(ke)能(neng)影響細(xi)胞活(huo)性。

2. 支原體檢測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支原體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀態監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞形(xing)態、密度(du)及培(pei)養(yang)基顏(yan)色，及時(shi)更(geng)換(huan)培(pei)養基（通常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次(ci)）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎片增多）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或營養不(bu)足(zu)。

2. 傳代與凍存(cun)

- 原代細(xi)胞分(fen)裂次(ci)數有(you)限（壹般 5-10 代），需(xu)及時(shi)凍存(cun)早期(qi)代次細(xi)胞。

- 凍存(cun)液(ye)建議使用 DMSO+血清(qing)（或專用凍存(cun)培養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮保(bao)存(cun)。