【概要描(miao)述(shu)】大(da)鼠脊(ji)髓成(cheng)纖(xian)維細胞公司正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：JHH-5肝(gan)癌(ai)人(ren)神經幹(gan)細胞人(ren)腦皮層神經元(yuan)細胞人(ren)小膠(jiao)質(zhi)細胞人(ren)雪(xue)旺(wang)細胞人(ren)神經膠(jiao)質(zhi)細胞人(ren)腦微血(xue)管平(ping)滑(hua)肌細胞人(ren)腦血(xue)管周(zhou)細胞大(da)鼠肺(fei)微(wei)血(xue)管內(nei)皮(pi)細胞大(da)鼠肺(fei)動(dong)脈(mai)內(nei)皮(pi)細胞

本公司(si)所有產品(pin)僅(jin)供科(ke)學實驗(yan)，不做其(qi)他科(ke)學實驗(yan)外(wai)的(de)使用！

大(da)鼠脊(ji)髓成(cheng)纖(xian)維分離(li)自(zi)脊髓組(zu)織(zhi)；脊(ji)髓是(shi)細細的(de)管束狀的(de)神經結(jie)構(gou)，位(wei)於脊柱的(de)椎(zhui)管內(nei)且被(bei)脊(ji)椎保護(hu)；是(shi)源(yuan)自腦的(de)中樞神經系(xi)統(tong)延(yan)伸部(bu)分(fen)。中樞神經系(xi)統(tong)的(de)細胞依靠復(fu)雜(za)的(de)聯(lian)系(xi)來(lai)處(chu)理傳(chuan)遞(di)信(xin)息。脊(ji)髓的(de)主(zhu)要(yao)功(gong)能是(shi)傳(chuan)送腦與外周(zhou)之(zhi)間(jian)的(de)神經信(xin)息。人(ren)和脊(ji)椎(zhui)動(dong)物中樞神經系(xi)統(tong)的(de)壹(yi)部(bu)分(fen)，在(zai)椎管裏(li)面，上端(duan)連(lian)接(jie)延(yan)髓，兩(liang)旁發出(chu)成對(dui)的(de)神經，分(fen)布到四(si)肢、體壁(bi)和內(nei)臟(zang)。脊(ji)髓的(de)內(nei)部(bu)有壹個H形(xing)（蝴蝶(die)型）灰(hui)質(zhi)區，主(zhu)要(yao)由(you)神經細胞構成；在(zai)灰質(zhi)區周(zhou)圍為白質(zhi)區，主(zhu)要(yao)由(you)有髓神經纖(xian)維組(zu)成(cheng)；脊(ji)髓是(shi)許(xu)多簡單(dan)反射的(de)中樞。脊髓兩(liang)旁發出(chu)許多(duo)成(cheng)對(dui)的(de)神經（稱(cheng)為脊(ji)神經）分(fen)布到全(quan)身皮(pi)膚、肌肉和內(nei)臟(zang)器(qi)官(guan)。脊髓是(shi)周(zhou)圍神經與腦之間(jian)的(de)通(tong)路(lu)，也是(shi)許(xu)多簡單(dan)反射活(huo)動(dong)的(de)低級(ji)中樞。按(an)脊神經的(de)出(chu)入可(ke)把(ba)脊(ji)髓也分為(wei)相(xiang)應(ying)的(de)31節(jie)，31對脊神經就(jiu)是(shi)由(you)不同的(de)脊(ji)椎發出(chu)的(de)。成(cheng)纖(xian)維細胞（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松結締組(zu)織(zhi)的(de)主(zhu)要(yao)細胞成分，由(you)胚(pei)胎時期的(de)間(jian)充(chong)質(zhi)細胞分化而來；成纖(xian)維細胞較大(da)，輪廓清楚，多為突起(qi)的(de)紡錘(chui)形(xing)或星(xing)形的(de)扁平(ping)狀(zhuang)結(jie)構，其(qi)細胞核呈(cheng)規(gui)則的(de)卵(luan)圓(yuan)形(xing)，核仁(ren)大(da)而明(ming)顯(xian)。成纖(xian)維細胞功能活(huo)動(dong)旺(wang)盛，細胞質(zhi)嗜弱(ruo)堿(jian)性(xing)，具(ju)明(ming)顯(xian)的(de)蛋(dan)白質(zhi)合成(cheng)和分(fen)泌活(huo)動(dong)，在(zai)壹定(ding)條(tiao)件下，它可以實現跟(gen)纖(xian)維細胞的(de)互相(xiang)轉(zhuan)化；成(cheng)纖(xian)維細胞對不同程度的(de)細胞變性(xing)、壞死(si)和組(zu)織(zhi)缺(que)損(sun)的(de)修(xiu)復(fu)有著十分(fen)重要的(de)作(zuo)用。剛(gang)分(fen)離的(de)脊(ji)髓成(cheng)纖(xian)維細胞呈圓形(xing)、折光性(xing)良(liang)好(hao)，懸浮於培養基中。30min細胞貼壁(bi)，其(qi)中部(bu)分(fen)開(kai)始(shi)伸出(chu)偽足，表現為小的(de)突(tu)起(qi)；6h後細胞基本貼壁(bi)wan全，伸展(zhan)成(cheng)梭形，胞核清(qing)晰(xi)，分布較均(jun)勻(yun)，散(san)在(zai)生(sheng)長(chang)，不聚集成(cheng)團；細胞生(sheng)長(chang)迅(xun)速(su)，5-7天(tian)即呈(cheng)融(rong)合狀態(tai)，細胞排列緊(jin)密，有的(de)交(jiao)叉重(zhong)疊生(sheng)長(chang)，平(ping)坦(tan)、胞體較大(da)，細胞質(zhi)透明(ming)，細胞核較大(da)，呈橢圓(yuan)形，顏(yan)色(se)淡。細胞融合，並(bing)彼(bi)此(ci)連(lian)接(jie)成(cheng)網(wang)狀；細胞呈突起(qi)的(de)紡錘(chui)形(xing)或星(xing)形的(de)扁平(ping)分(fen)布。脊髓成(cheng)纖(xian)維細胞在(zai)生(sheng)理條(tiao)件下的(de)主(zhu)要(yao)功(gong)能包(bao)括(kuo)：構造和維持組(zu)織(zhi)的(de)正(zheng)常(chang)形態(tai)；合(he)成(cheng)和釋(shi)放細胞外基質(zhi)；組(zu)織(zhi)損(sun)傷(shang)後及時大(da)量(liang)聚集(ji)修(xiu)復(fu)損(sun)傷(shang)組(zu)織(zhi)。
方(fang)法簡介：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠脊(ji)髓成(cheng)纖(xian)維采(cai)用yi蛋(dan)白酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)混(hun)合(he)酶消化後差速(su)貼(tie)壁(bi)制備而來，細胞總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司(si)實驗(yan)室分(fen)離(li)的(de)大(da)鼠脊(ji)髓成(cheng)纖(xian)維經Vimentin免疫(yi)熒光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真(zhen)菌等(deng)。

培養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹次(ci)

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞形態 成(cheng)纖(xian)維細胞樣(yang)

傳(chuan)代特性(xing) 可(ke)傳(chuan)5代左右(you)；3代以內(nei)狀(zhuang)態(tai)

消化液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養條件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實驗(yan)器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無菌的(de)培養皿、培養瓶、移(yi)液管、離(li)心管、手術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並進(jin)行高壓滅(mie)菌或其(qi)他合(he)適的(de)消毒(du)處(chu)理。

2. 試劑準(zhun)備：配制(zhi)或購(gou)買(mai)合適的(de)培養基、消化酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清、雙抗等(deng)試劑，確保其(qi)無菌且在(zai)有效期內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組(zu)織(zhi)來(lai)源準(zhun)備：根據(ju)實驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物並進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉或處(chu)死(si)，獲(huo)取所需組(zu)織(zhi)；或從已有的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫中獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌條件下，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多余的(de)脂(zhi)肪、結締組(zu)織(zhi)等(deng)非目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用預冷(leng)的(de)無菌PBS沖洗數次，以(yi)去除(chu)血(xue)液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的(de)小塊，以(yi)便後續消化。

細胞分離

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入含(han)有適量(liang)消化酶(mei)的(de)離(li)心管中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床或培養箱(xiang)中消化壹(yi)段時間(jian)。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖晃離心管，使消化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化成(cheng)單(dan)細胞懸液或小細胞團時，加入(ru)含(han)血(xue)清的(de)培養基終止消化。

3. 過濾(lv)與離心：用細胞篩過濾(lv)細胞懸液，去除(chu)未(wei)消化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心，收集(ji)細胞沈澱。

細胞觀(guan)察與檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每(mei)天(tian)用倒置顯微(wei)鏡觀(guan)察細胞的(de)形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀態(tai)、密度等(deng)，記錄細胞的(de)變化情(qing)況，如(ru)發現細胞汙染或異(yi)常(chang)，及時采(cai)取相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細胞計數與活(huo)力(li)檢測(ce)：在(zai)需要(yao)時，可采(cai)用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法對細胞進(jin)行計數(shu)和活(huo)力(li)檢測(ce)，以了(le)解(jie)細胞的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分離

1. 快(kuai)速(su)操作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後需立即處(chu)理，避(bi)免長(chang)時間(jian)暴露(lu)於室溫(wen)或非營養環境。

- 使用無菌 PBS 或生(sheng)理鹽水沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型選擇(ze)消化酶(mei)，避(bi)免過度(du)消化導(dao)致細胞損(sun)傷(shang)。

- 消化時(shi)間(jian)需(xu)嚴格(ge)控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細胞解離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養條件優化

1. 培養基選擇(ze)

- 使用含血(xue)清或特定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細胞需添(tian)加胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養基品(pin)牌或批(pi)次，減(jian)少(shao)細胞適應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳(chuan)代

- 原代細胞貼壁(bi)能力(li)較弱，可能需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養皿（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時密度建(jian)議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分(fen)化。

三、汙染控(kong)制

1. 無菌操作(zuo)

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使用壹次性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培養基中可添(tian)加雙抗，但長(chang)期使用可能影(ying)響細胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支原體汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後需及時丟棄細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢查細胞形態、密度及培養基顏(yan)色(se)，及時更(geng)換(huan)培養基（通常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如(ru)細胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示汙(wu)染(ran)或營(ying)養不足。

2. 傳(chuan)代與凍存

- 原代細胞分裂次(ci)數有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及時凍存早(zao)期代次細胞。

- 凍存液建議使用 DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍存培養基），梯度降溫後液氮保存。