【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】大鼠骨骼肌(ji)細胞(bao)公(gong)司正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品：NCI-H2030非(fei)小細胞肺(fei)癌(ai)大鼠雪旺(wang)細胞(bao)大鼠星形膠質細(xi)胞(bao)大鼠小膠(jiao)質細(xi)胞(bao)大鼠少(shao)突(tu)膠質細(xi)胞(bao)大鼠神(shen)經(jing)膠質細(xi)胞(bao)大鼠腦動脈平滑肌細胞大鼠神(shen)經(jing)幹(gan)細胞(bao)大鼠腦血管成纖維細胞大鼠DRG神(shen)經(jing)元細(xi)胞(bao)

大鼠骨骼肌(ji)分(fen)離自(zi)四(si)肢肌肉組織；骨骼肌(ji)又稱(cheng)橫(heng)紋肌(ji)，肌(ji)肉中(zhong)的(de)壹種(zhong)，約(yue)占(zhan)全(quan)身(shen)重(zhong)量的(de)40%。骨骼肌(ji)纖維為長柱形的(de)多核細胞(bao)，肌膜(mo)的(de)外面有(you)基(ji)膜(mo)緊(jin)密(mi)貼(tie)附。屬於(yu)橫(heng)紋肌(ji)，橫(heng)紋肌(ji)還(hai)包(bao)括(kuo)心(xin)肌(ji)與(yu)內臟橫(heng)紋肌(ji)，其中骨骼肌(ji)主(zhu)要分(fen)布於(yu)四肢(zhi)。每塊(kuai)肌肉都(dou)是(shi)具有(you)壹(yi)定(ding)形態、結(jie)構和(he)功能的(de)器官，有豐富(fu)的(de)血管、淋(lin)巴分(fen)布，在(zai)軀(qu)體神(shen)經(jing)支配下收縮(suo)或舒(shu)張，進(jin)行(xing)隨(sui)意運(yun)動。肌肉可(ke)根(gen)據(ju)共形狀、大小(xiao)、位(wei)置(zhi)、起(qi)止(zhi)點(dian)、纖維方(fang)向(xiang)和(he)作用等命名。依(yi)形態命名的(de)如斜(xie)方(fang)肌(ji)、菱形肌、三(san)角肌(ji)、梨(li)狀肌(ji)等(deng)。骨骼肌(ji)細胞(bao)呈(cheng)纖維狀，不(bu)分(fen)支，有明顯(xian)橫(heng)紋，核很多，且都位於(yu)細胞(bao)膜(mo)下方(fang)。肌(ji)細(xi)胞(bao)內有(you)許多沿細胞(bao)長(chang)軸平行(xing)排(pai)列(lie)的(de)細絲狀肌(ji)原(yuan)纖維。每壹(yi)肌(ji)原(yuan)纖維都有相間(jian)排(pai)列(lie)的(de)明帶(dai)（Ⅰ帶(dai)）及(ji)暗帶(dai)（A帶）。明帶(dai)染色較(jiao)淺(qian)，而暗(an)帶染色較(jiao)深(shen)。暗帶(dai)中間(jian)有壹條較(jiao)明(ming)亮的(de)線(xian)稱(cheng)H線(xian)。H線(xian)的(de)中部(bu)有(you)壹(yi)M線(xian)。明(ming)帶中間，有(you)壹(yi)條(tiao)較(jiao)暗(an)的(de)線(xian)稱(cheng)為Z線(xian)。兩個Z線(xian)之(zhi)間(jian)的(de)區段(duan)，叫做(zuo)壹(yi)個肌(ji)節。骨骼肌(ji)細胞(bao)也稱(cheng)橫(heng)紋肌(ji)細(xi)胞(bao)，細胞呈(cheng)纖維狀，不(bu)分(fen)支，有明顯(xian)橫(heng)紋，核很多，且都位於(yu)細胞(bao)膜(mo)下方(fang)，細(xi)胞(bao)多呈梭(suo)行(xing)，具(ju)有(you)壹(yi)定(ding)的(de)方(fang)向(xiang)性(xing)。骨骼肌(ji)細胞(bao)原(yuan)代(dai)分(fen)離培(pei)養(yang)3天後(hou)，可(ke)見細(xi)胞(bao)貼(tie)壁伸(shen)展(zhan)，細胞(bao)形態大小(xiao)不(bu)壹，呈(cheng)梭(suo)形、不(bu)規則(ze)形、三(san)角形或扇(shan)形，核卵圓(yuan)形、居(ju)中(zhong)；2周(zhou)後(hou)細胞(bao)匯(hui)合(he)，多數(shu)細胞伸展呈(cheng)長梭(suo)形，胞漿(jiang)豐富(fu)，有(you)分(fen)枝(zhi)狀突(tu)起(qi)，細胞平行(xing)排(pai)列(lie)成(cheng)單層(ceng)或(huo)部分(fen)區(qu)域(yu)多層重(zhong)疊生長，高(gao)低(di)起伏；細(xi)胞(bao)密度(du)低(di)時，常交織成網狀；密(mi)度(du)高(gao)時，則排(pai)列(lie)為(wei)旋(xuan)渦狀或(huo)柵(zha)欄狀。傳代(dai)後(hou)細胞(bao)生長較(jiao)快(kuai)，4-6天即(ji)可(ke)匯(hui)合(he)，並(bing)保持(chi)上(shang)述形態學特(te)征和生長特(te)點(dian)。
方(fang)法簡介(jie)：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離的(de)大鼠骨骼肌(ji)采(cai)用膠原(yuan)酶消(xiao)化法制備而來(lai)，細胞(bao)總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢測(ce)：

公司實(shi)驗室(shi)分(fen)離的(de)大鼠骨骼肌(ji)經(jing)α-Sarcometric actin免(mian)疫(yi)熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可(ke)達90%以上(shang)，且不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

本公(gong)司所有(you)產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其他科學實(shi)驗外的(de)使用！

包(bao)被(bei)條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yang)基 含FBS、生長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹次(ci)

生長特(te)性(xing) 貼(tie)壁

細胞(bao)形態 成纖維細胞樣

傳代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳5代(dai)左右(you)；3代(dai)以內狀態

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養(yang)條件 氣相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實(shi)驗器(qi)材準備：準備無菌(jun)的(de)培養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶、移液(ye)管、離心(xin)管、手(shou)術器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其他合(he)適的(de)消(xiao)毒(du)處理。

2. 試(shi)劑準備：配制或(huo)購買(mai)合(he)適的(de)培養(yang)基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎牛血清、雙抗(kang)等試(shi)劑，確(que)保其無菌(jun)且在(zai)有(you)效期內。

3. 實(shi)驗動物或組織來源(yuan)準備：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選擇合(he)適的(de)動物並(bing)進行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或(huo)處死(si)，獲取(qu)所(suo)需(xu)組織；或從(cong)已(yi)有(you)的(de)組織樣本(ben)庫中(zhong)獲取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與(yu)處理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件下，迅速取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組織，盡量減少(shao)對組織的(de)損傷(shang)，並(bing)去除(chu)多余的(de)脂(zhi)肪、結(jie)締(di)組織等非(fei)目的(de)組織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組織用預冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去除(chu)血液和(he)雜質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以便後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消(xiao)化：將剪碎(sui)的(de)組織塊(kuai)放入(ru)含有適(shi)量消(xiao)化酶的(de)離心(xin)管中，在(zai)37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或培養(yang)箱中消(xiao)化壹段(duan)時間。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管，使消(xiao)化更均(jun)勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化：當(dang)組織塊(kuai)大部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化成單細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小細胞團(tuan)時，加(jia)入(ru)含血清的(de)培養(yang)基終止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心(xin)：用細胞(bao)篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組織碎片(pian)，然(ran)後(hou)將濾(lv)液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉速離心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)：每天(tian)用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞的(de)形態、生長狀態、密度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的(de)變化情況(kuang)，如發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染或異常，及(ji)時采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計數(shu)與(yu)活力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍染色等方(fang)法對細胞(bao)進行(xing)計數(shu)和活力檢(jian)測(ce)，以了(le)解細(xi)胞的(de)生長情況(kuang)和健康(kang)狀態。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分(fen)離

1. 快速操作

- 組織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理，避免(mian)長(chang)時間暴露於(yu)室(shi)溫或非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使用無菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽水(shui)沖洗(xi)組織，去除(chu)血液、雜質。

2. 消(xiao)化酶選擇

- 根(gen)據(ju)組織類型(xing)選擇消(xiao)化酶，避免(mian)過(guo)度(du)消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化時間需(xu)嚴(yan)格控制（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞解(jie)離狀態。

二、培(pei)養(yang)條件優(you)化

1. 培養(yang)基選擇

- 使用含血清或特(te)定(ding)生長因(yin)子(zi)的(de)培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁更換(huan)培(pei)養(yang)基品牌或批(pi)次(ci)，減少(shao)細(xi)胞適應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞貼(tie)壁能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白、多聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代(dai)時密度建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接觸抑制和分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染控制

1. 無菌(jun)操作

- 全程(cheng)在(zai)超凈(jing)臺(tai)操作，使(shi)用壹次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免(mian)交叉汙(wu)染。

- 培養(yang)基中可(ke)添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但長(chang)期(qi)使用可(ke)能影(ying)響細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測支原(yuan)體汙(wu)染（如 PCR 法），汙(wu)染後(hou)需(xu)及(ji)時丟棄細(xi)胞。

四、狀態監(jian)控

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每天(tian)檢(jian)查細胞(bao)形態、密度(du)及(ji)培養(yang)基顏色(se)，及時更換(huan)培(pei)養(yang)基（通常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次(ci)）。

- 異常(chang)形態（如細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可(ke)能提(ti)示(shi)汙(wu)染或營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存

- 原(yuan)代(dai)細胞分(fen)裂(lie)次(ci)數(shu)有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍存早期(qi)代(dai)次(ci)細(xi)胞。

- 凍存液建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血清（或專用凍存培養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫後(hou)液氮(dan)保(bao)存。