【概要描(miao)述】大(da)鼠真皮成纖維(wei)細胞(bao)公(gong)司正在出售的產品(pin)：NCI-H2073非小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌(ai)大(da)鼠三(san)叉(cha)神(shen)經(jing)元(yuan)細胞(bao)大(da)鼠脊(ji)髓(sui)成纖維(wei)細胞(bao)大(da)鼠嗅(xiu)鞘細胞(bao)大(da)鼠嗅(xiu)球神經(jing)幹(gan)細胞(bao)大(da)鼠海(hai)馬(ma)神(shen)經(jing)幹(gan)細胞(bao)大(da)鼠杏仁核神經元(yuan)細胞(bao)大(da)鼠角(jiao)膜上(shang)皮細胞(bao)大(da)鼠角(jiao)膜基(ji)質(zhi)細胞(bao)大(da)鼠視網膜色(se)上(shang)皮細胞(bao)

本(ben)公司所(suo)有(you)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)學實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科學實(shi)驗(yan)外的使用！

大(da)鼠真皮成纖維(wei)分(fen)離自(zi)真皮組(zu)織(zhi)；真皮，位於表(biao)皮深層，向(xiang)下與皮下組(zu)織(zhi)相(xiang)連(lian)，真皮結締組(zu)織(zhi)的(de)膠(jiao)原(yuan)纖維(wei)和彈性纖維(wei)互相交織(zhi)在(zai)壹(yi)起(qi)，埋(mai)於基(ji)質(zhi)內(nei)。其(qi)內分(fen)布著各種(zhong)結締組(zu)織(zhi)細胞(bao)和(he)大(da)量的(de)膠(jiao)原(yuan)纖維(wei)彈性纖維(wei)，使皮膚既(ji)有彈(dan)性，又(you)有韌(ren)性(xing)。其(qi)由(you)兩層組(zu)成——乳(ru)頭層與網(wang)狀(zhuang)層。真皮的結構組(zu)成是(shi)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、彈性(xing)纖維(wei)以及基質(zhi)。成纖維(wei)細胞(bao)（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松結締組(zu)織(zhi)的(de)主(zhu)要(yao)細胞(bao)成分(fen)，由(you)胚胎時(shi)期(qi)的間充(chong)質(zhi)細胞(bao)分(fen)化而(er)來(lai)。成纖維(wei)細胞(bao)較(jiao)大(da)，輪廓(kuo)清(qing)楚，多(duo)為(wei)突(tu)起的(de)紡錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的(de)扁平(ping)狀(zhuang)結構，其(qi)細胞(bao)核(he)呈規(gui)則的(de)卵圓(yuan)形(xing)，核(he)仁大(da)而(er)明(ming)顯。成纖維(wei)細胞(bao)功(gong)能(neng)活動(dong)旺(wang)盛(sheng)，細胞(bao)質(zhi)嗜(shi)弱(ruo)堿(jian)性，具明(ming)顯的蛋(dan)白(bai)質(zhi)合(he)成和(he)分(fen)泌(mi)活動(dong)，在(zai)壹(yi)定(ding)條件下，它(ta)可以(yi)實(shi)現跟纖維(wei)細胞(bao)的(de)互(hu)相轉(zhuan)化；成纖維(wei)細胞(bao)對不(bu)同(tong)程度的(de)細胞(bao)變性(xing)、壞死(si)和(he)組(zu)織(zhi)缺(que)損的修復(fu)有著十分(fen)重要的(de)作(zuo)用。剛分(fen)離的(de)真皮成纖維(wei)細胞(bao)呈圓(yuan)形(xing)、折(zhe)光(guang)性(xing)良(liang)好，懸浮(fu)於培(pei)養基(ji)中。30min細胞(bao)貼(tie)壁，其(qi)中部分(fen)開始(shi)伸出偽足，表(biao)現為(wei)小(xiao)的突(tu)起；6h後(hou)細胞(bao)基(ji)本(ben)貼壁wan全(quan)，伸(shen)展(zhan)成梭(suo)形(xing)，胞(bao)核(he)清(qing)晰，分(fen)布較(jiao)均勻，散在(zai)生長(chang)，不聚(ju)集成團(tuan)；細胞(bao)生長(chang)迅(xun)速，5-7天(tian)即(ji)呈融(rong)合狀(zhuang)態(tai)，細胞(bao)排(pai)列(lie)緊(jin)密(mi)，有(you)的(de)交叉(cha)重疊生長(chang)，平(ping)坦(tan)、胞(bao)體較大(da)，細胞(bao)質(zhi)透(tou)明(ming)，細胞(bao)核(he)較(jiao)大(da)，呈橢(tuo)圓(yuan)形(xing)，顏(yan)色(se)淡(dan)。細胞(bao)融(rong)合(he)，並彼(bi)此連(lian)接(jie)成網(wang)狀(zhuang)；細胞(bao)呈突(tu)起的(de)紡錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的(de)扁平(ping)分(fen)布。真皮成纖維(wei)細胞(bao)在(zai)生理(li)條件下的(de)主要(yao)功(gong)能(neng)包括(kuo)：構(gou)造(zao)和(he)維(wei)持(chi)組(zu)織(zhi)的(de)正(zheng)常(chang)形(xing)態(tai)，合(he)成和(he)釋放(fang)細胞(bao)外基質(zhi)以(yi)及(ji)組(zu)織(zhi)損傷後及(ji)時(shi)大(da)量聚(ju)集修(xiu)復(fu)損傷組(zu)織(zhi)。
方法(fa)簡(jian)介：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)大(da)鼠真皮成纖維(wei)采用先中性dan白(bai)酶消化、後yi蛋(dan)白(bai)酶-膠(jiao)原(yuan)酶混合(he)消(xiao)化法結合差(cha)速貼(tie)壁法(fa)制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)大(da)鼠真皮成纖維(wei)經Vimentin免疫熒光(guang)鑒(jian)定，純度(du)可達(da)90%以上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌、酵母和真菌等。

培養基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液壹次(ci)

生長(chang)特性(xing) 貼壁

細胞(bao)形(xing)態(tai) 成纖維(wei)細胞(bao)樣

傳代(dai)特性(xing) 可傳5代(dai)左(zuo)右；3代(dai)以(yi)內(nei)狀(zhuang)態(tai)

消化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶(ping)、移液管、離(li)心管、手(shou)術器械(xie)等，並進行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或其他(ta)合適(shi)的消(xiao)毒(du)處理。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購買(mai)合(he)適(shi)的培(pei)養基(ji)、消化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗(kang)等試劑，確(que)保(bao)其無(wu)菌(jun)且在有效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合(he)適(shi)的動(dong)物並進行(xing)相應(ying)的(de)麻(ma)醉或處死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或從已(yi)有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣本(ben)庫中獲取組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在(zai)無(wu)菌(jun)條件下，迅(xun)速取(qu)出目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少對組(zu)織(zhi)的(de)損傷，並去除(chu)多(duo)余(yu)的脂肪(fang)、結締組(zu)織(zhi)等非目的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出的組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷的無(wu)菌(jun)PBS沖洗數次(ci)，以去除(chu)血(xue)液和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便後(hou)續消(xiao)化。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消化：將剪(jian)碎的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入含(han)有適(shi)量消(xiao)化酶的離(li)心管中，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或培養箱(xiang)中消化壹段時(shi)間(jian)。期間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管，使(shi)消(xiao)化更均(jun)勻。

2. 終止消(xiao)化：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分(fen)被(bei)消(xiao)化成單(dan)細胞(bao)懸液或小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基(ji)終止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與離(li)心：用細胞(bao)篩(shai)過(guo)濾細胞(bao)懸液，去除(chu)未(wei)消化的組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然後(hou)將濾(lv)液以適(shi)當的(de)轉速(su)離心，收集細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察：每天用倒(dao)置顯微鏡觀(guan)察細胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生長(chang)狀態(tai)、密(mi)度(du)等，記錄(lu)細胞(bao)的(de)變化情(qing)況，如(ru)發現細胞(bao)汙染(ran)或異(yi)常(chang)，及時(shi)采(cai)取相應措施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數與活力檢測(ce)：在需(xu)要時(shi)，可采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等方法(fa)對細胞(bao)進行(xing)計數和活力檢測(ce)，以了(le)解細胞(bao)的(de)生長(chang)情(qing)況和(he)健康狀態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與分(fen)離

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立即處理(li)，避免長時(shi)間(jian)暴露於室(shi)溫(wen)或非營養環境。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生理(li)鹽水沖洗組(zu)織(zhi)，去除(chu)血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消化酶選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化酶，避免(mian)過(guo)度消(xiao)化導致細胞(bao)損傷。

- 消化時(shi)間(jian)需嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯微鏡觀(guan)察細胞(bao)解(jie)離(li)狀態(tai)。

二、培(pei)養條件優(you)化

1. 培養基(ji)選擇

- 使用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或特定(ding)生長(chang)因子的培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁更換(huan)培養基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少細胞(bao)適(shi)應壓(ya)力。

2. 貼壁與傳代(dai)

- 原代(dai)細胞(bao)貼(tie)壁能(neng)力較弱(ruo)，可能(neng)需要包(bao)被(bei)培(pei)養皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會(hui)導致接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和分(fen)化。

三、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全程在超凈臺操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹次(ci)性耗(hao)材(cai)，避免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養基(ji)中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但長(chang)期(qi)使用(yong)可能(neng)影響細胞(bao)活性。

2. 支原(yuan)體檢測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測支原(yuan)體汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察

- 每天檢查細胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及(ji)培養基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更(geng)換(huan)培養基(ji)（通常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細胞(bao)變圓(yuan)、碎片(pian)增多(duo)）可能(neng)提示汙染(ran)或營養不(bu)足。

2. 傳代(dai)與凍存(cun)

- 原代(dai)細胞(bao)分(fen)裂次(ci)數有限（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍存(cun)早期代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍存(cun)液建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用凍存(cun)培養基(ji)），梯度降溫(wen)後液氮保(bao)存(cun)。