【概要(yao)描述(shu)】大鼠大隱靜(jing)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)公司(si)正在出售的產(chan)品：NCI-H1944非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)癌(ai)大鼠輸(shu)卵管平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)大鼠子(zi)宮內(nei)膜(mo)上(shang)皮細(xi)胞(bao)大鼠子(zi)宮平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)大鼠卵(luan)巢表(biao)面上(shang)皮細(xi)胞(bao)大鼠乳腺(xian)上(shang)皮細(xi)胞(bao)大鼠乳腺(xian)成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)大鼠卵(luan)巢內(nei)膜(mo)細(xi)胞(bao)大鼠子(zi)宮內(nei)膜(mo)間質(zhi)細(xi)胞(bao)大鼠睪(gao)丸(wan)間質(zhi)細(xi)胞(bao)

大鼠大隱靜(jing)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)分(fen)離自大隱靜(jing)脈(mai)；大隱靜(jing)脈(mai)起(qi)於(yu)足(zu)背靜(jing)脈(mai)弓(gong)內(nei)側(ce)端，經(jing)內(nei)踝(huai)前方，沿小(xiao)腿內(nei)側(ce)緣(yuan)伴(ban)隱(yin)神經(jing)上(shang)行(xing)，經(jing)股(gu)骨內(nei)側(ce)髁後方，進入大腿內(nei)側(ce)部(bu)，與股內(nei)側(ce)皮神經(jing)伴(ban)行(xing)，逐漸向前上，在恥骨結(jie)節外(wai)下方穿(chuan)隱(yin)靜(jing)脈(mai)裂(lie)孔，匯入股靜(jing)脈(mai)，其(qi)匯入點(dian)稱為(wei)隱(yin)股(gu)點(dian)。有5條(tiao)屬支：旋(xuan)髂淺(qian)靜(jing)脈(mai)、腹(fu)壁(bi)淺(qian)靜(jing)脈(mai)、外(wai)靜(jing)脈(mai)、股(gu)內(nei)側(ce)淺(qian)靜(jing)脈(mai)和股(gu)外側(ce)淺(qian)靜(jing)脈(mai)，它(ta)們(men)匯(hui)入大隱靜(jing)脈(mai)的形式多(duo)樣，相互(hu)間吻(wen)合豐(feng)富(fu)。大隱靜(jing)脈(mai)曲(qu)張(zhang)行(xing)高位結(jie)紮(zha)時，須分(fen)別結(jie)紮(zha)、切(qie)斷各(ge)屬支，以(yi)防復(fu)發(fa)。大隱靜(jing)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)主要(yao)功能：①血管平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)的生(sheng)長潛力是原發血管病發的重要(yao)異(yi)常(chang)因(yin)素；②參與血管壁(bi)的炎癥反(fan)應(ying)，並與血管疾病(bing)的進展(zhan)和穩(wen)定(ding)有(you)關。因(yin)此(ci)，研(yan)究大隱靜(jing)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)的代謝和信(xin)號通路是研(yan)究(jiu)大隱靜(jing)脈(mai)擴(kuo)張(zhang)等疾病(bing)的良(liang)好(hao)實(shi)驗(yan)材(cai)料。大隱靜(jing)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞(bao)原代分(fen)離培養3天後(hou)，可(ke)見細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)伸(shen)展，細(xi)胞(bao)形態(tai)大小(xiao)不壹(yi)，呈(cheng)梭形(xing)、不規(gui)則(ze)形(xing)、三(san)角(jiao)形或(huo)扇形(xing)，核卵圓(yuan)形、居中；2周後細(xi)胞(bao)匯合，多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)伸展(zhan)呈長(chang)梭形(xing)，胞(bao)漿(jiang)豐富(fu)，有分(fen)枝(zhi)狀突起(qi)，細(xi)胞(bao)平行(xing)排(pai)列(lie)成(cheng)單(dan)層(ceng)或部分(fen)區(qu)域(yu)多層重疊生(sheng)長，高低起伏(fu)；細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)低時，常(chang)交織(zhi)成(cheng)網(wang)狀；密(mi)度(du)高時，則(ze)排(pai)列(lie)為旋(xuan)渦狀或(huo)柵欄(lan)狀(zhuang)。傳(chuan)代後細(xi)胞(bao)生(sheng)長較(jiao)快，4-6天(tian)即可(ke)匯(hui)合，並(bing)保持(chi)上(shang)述(shu)形(xing)態(tai)學(xue)特征和生(sheng)長特點(dian)。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的大鼠大隱靜(jing)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)聯(lian)合消(xiao)化法結(jie)合差(cha)速貼(tie)壁(bi)法制(zhi)備(bei)而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的大鼠大隱靜(jing)脈(mai)平(ping)滑肌(ji)經(jing)α-SMA免疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達90%以上，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌(jun)、酵母(mu)和真菌(jun)等。

本公(gong)司(si)所有(you)產(chan)品僅供科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他科學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的使用！

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液壹次(ci)

生(sheng)長特性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形態(tai) 成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特性 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左(zuo)右(you)；3代以(yi)內(nei)狀(zhuang)態(tai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養(yang)條(tiao)件 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶、移(yi)液管、離心(xin)管、手術器(qi)械等，並進行(xing)高壓滅(mie)菌(jun)或其(qi)他合適(shi)的消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或購買(mai)合適(shi)的培養基(ji)、消(xiao)化酶(mei)（如(ru)、膠原酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗(kang)等試劑，確保其(qi)無菌(jun)且在有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或(huo)組織來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據實驗(yan)需求，選擇(ze)合適(shi)的動(dong)物並(bing)進行(xing)相應(ying)的麻醉或(huo)處(chu)死，獲(huo)取(qu)所需組織；或從已(yi)有(you)的組織樣本庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅速取出目標(biao)組織，盡量減少(shao)對組織的損傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余(yu)的脂肪(fang)、結(jie)締(di)組織等非目的組織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出的組織用預(yu)冷的無菌(jun)PBS沖洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便後續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組織塊放入含(han)有適(shi)量消(xiao)化酶(mei)的離心(xin)管中，在37℃恒溫搖(yao)床或培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化壹(yi)段(duan)時間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管，使消(xiao)化更(geng)均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組織塊大部分(fen)被(bei)消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入含(han)血清的培養基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。

3. 過(guo)濾與離心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的組織碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液以適(shi)當(dang)的轉速離心(xin)，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用倒置(zhi)顯微鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形態、生(sheng)長狀態、密(mi)度(du)等，記錄細(xi)胞(bao)的變化情(qing)況(kuang)，如(ru)發現細(xi)胞(bao)汙染或(huo)異(yi)常(chang)，及時采(cai)取(qu)相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與活力檢測(ce)：在需要時，可(ke)采(cai)用臺盼藍(lan)染色(se)等方法對細(xi)胞(bao)進行(xing)計數(shu)和活力檢測(ce)，以了解(jie)細(xi)胞(bao)的生(sheng)長情況(kuang)和健(jian)康狀(zhuang)態。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速操作(zuo)

- 組織取材(cai)後需立即處(chu)理(li)，避(bi)免長時間暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫或非營養環境(jing)。

- 使用無菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組織，去(qu)除血(xue)液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據組織類型選擇(ze)消(xiao)化酶(mei)，避(bi)免過度(du)消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化時間需嚴格控制（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件優化(hua)

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使用含(han)血清或特定(ding)生(sheng)長因(yin)子(zi)的培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞(bao)需添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免頻繁更換培(pei)養基品牌或(huo)批(pi)次(ci)，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代(dai)

- 原代細(xi)胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能需要包(bao)被培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋白、多聚賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度(du)建議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過度匯合會(hui)導致(zhi)接觸抑制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染控(kong)制

1. 無菌(jun)操作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超凈臺操作(zuo)，使用壹(yi)次(ci)性耗材(cai)，避免交叉(cha)汙染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用可(ke)能影響細(xi)胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支原體汙染（如(ru) PCR 法），汙染後(hou)需及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天檢查(zha)細(xi)胞(bao)形態(tai)、密(mi)度(du)及培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時更(geng)換培(pei)養基（通常(chang)每(mei) 2-3 天換液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提(ti)示汙染或(huo)營養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍存

- 原代細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次數(shu)有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及時凍存早期(qi)代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建議(yi)使用 DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍存培養(yang)基），梯(ti)度(du)降溫後液氮(dan)保(bao)存。

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