【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】大(da)鼠(shu)冠狀(zhuang)動脈平滑肌(ji)細胞(bao)公(gong)司(si)正在出(chu)售(shou)的產(chan)品：NCI-H1975非(fei)小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌(ai)大(da)鼠(shu)子宮內膜(mo)幹細胞(bao)大(da)鼠(shu)附(fu)睪上皮(pi)細胞(bao)大(da)鼠(shu)子宮微(wei)血管內皮(pi)細胞(bao)大(da)鼠(shu)乳(ru)腺(xian)導(dao)管上皮(pi)細胞(bao)大(da)鼠(shu)骨細胞(bao)大(da)鼠(shu)成(cheng)骨細胞(bao)大(da)鼠(shu)軟(ruan)骨(gu)細胞(bao)大(da)鼠(shu)滑膜(mo)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)大(da)鼠(shu)骨骼(ge)肌細胞(bao)

本(ben)公(gong)司(si)所有產(chan)品僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實驗，不做(zuo)其(qi)他科(ke)學實驗外的(de)使(shi)用！

大(da)鼠(shu)冠狀(zhuang)動脈平滑肌(ji)分(fen)離自(zi)冠狀(zhuang)動脈組(zu)織(zhi)；冠(guan)狀(zhuang)動脈是供(gong)給(gei)心(xin)臟(zang)血液(ye)的動脈，起(qi)於主(zhu)動脈根部，分左(zuo)右(you)兩支，行(xing)於心(xin)臟(zang)表面。采(cai)用Schlesinger等(deng)的(de)分類原(yuan)則，將(jiang)冠狀(zhuang)動脈的(de)分(fen)布分為三(san)型(xing)：右(you)優(you)勢型、均(jun)衡型、左(zuo)優(you)勢型。左右(you)冠狀(zhuang)動脈是升(sheng)主(zhu)動脈的(de)對(dui)分支(zhi)。左(zuo)冠(guan)狀(zhuang)動脈為壹短(duan)幹，發(fa)自(zi)左主(zhu)動脈竇(dou)，經(jing)肺動脈起(qi)始部和左(zuo)心耳(er)之間(jian)，沿(yan)冠狀(zhuang)溝向左前(qian)方(fang)行(xing)後(hou)，立即(ji)分(fen)為前(qian)室間支(zhi)和(he)旋支(zhi)。前(qian)室間支(zhi)沿(yan)前(qian)室間溝下行，旋支(zhi)繞過心(xin)尖切(qie)跡(ji)至心的(de)膈面與(yu)右(you)冠狀(zhuang)動脈的(de)後(hou)室間支(zhi)相(xiang)吻合。它是構成(cheng)冠狀(zhuang)動脈壁(bi)的(de)主(zhu)要(yao)細胞(bao)成(cheng)分，細胞(bao)膜(mo)上分(fen)布著多(duo)種離子通(tong)道(dao)，如電壓依(yi)賴性(xing)Na+通(tong)道(dao)、多種Ca2+通(tong)道(dao)和K+通(tong)道(dao)；它們參(can)與(yu)了靜(jing)息電位(wei)的維(wei)持(chi)與(yu)細胞(bao)膜(mo)電位(wei)的復(fu)極(ji)化(hua)、超(chao)極(ji)化(hua)，調(tiao)節(jie)血管平滑肌(ji)的(de)收縮(suo)及(ji)舒(shu)張(zhang)功(gong)能，此(ci)外動脈粥(zhou)樣硬化(hua)的(de)發展也(ye)涉(she)及(ji)冠(guan)狀(zhuang)動脈平滑肌(ji)細胞(bao)增(zeng)殖、炎(yan)癥及(ji)雕(diao)亡(wang)等(deng)。因(yin)此(ci)，原(yuan)代(dai)分(fen)離培(pei)養的冠狀(zhuang)動脈平滑肌(ji)細胞(bao)，對(dui)研究(jiu)生理和病理狀(zhuang)態下離子通(tong)道(dao)及(ji)血管張(zhang)力變(bian)化(hua)機制具(ju)有非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)的(de)作用。冠狀(zhuang)動脈平滑肌(ji)細胞(bao)原(yuan)代(dai)分(fen)離培(pei)養3天後(hou)，可見(jian)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)伸(shen)展(zhan)，細胞(bao)形(xing)態大小(xiao)不壹，呈(cheng)梭(suo)形(xing)、不(bu)規(gui)則(ze)形、三角形(xing)或(huo)扇(shan)形(xing)，核卵(luan)圓形、居中(zhong)；2周後(hou)細胞(bao)匯(hui)合，多數(shu)細胞(bao)伸(shen)展(zhan)呈(cheng)長(chang)梭(suo)形(xing)，胞(bao)漿豐(feng)富，有分(fen)枝(zhi)狀(zhuang)突起(qi)，細胞(bao)平行(xing)排(pai)列(lie)成(cheng)單層(ceng)或(huo)部分區域多(duo)層(ceng)重(zhong)疊生長(chang)，高低起(qi)伏；細胞(bao)密度低時(shi)，常交(jiao)織(zhi)成(cheng)網(wang)狀(zhuang)；密度高時(shi)，則(ze)排(pai)列(lie)為旋渦狀(zhuang)或(huo)柵欄狀(zhuang)。傳代(dai)後(hou)細胞(bao)生長(chang)較快(kuai)，4-6天(tian)即(ji)可(ke)匯(hui)合，並(bing)保持(chi)上述(shu)形(xing)態學特(te)征和生長(chang)特點(dian)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司(si)實驗室分離的大(da)鼠(shu)冠狀(zhuang)動脈平滑肌(ji)采(cai)用yi蛋(dan)白酶-膠原(yuan)酶聯合消化(hua)法(fa)結合差速(su)貼(tie)壁法制備而(er)來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實驗室分離的大(da)鼠(shu)冠狀(zhuang)動脈平滑肌(ji)經(jing)α-SMA免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒定，純(chun)度可達90%以(yi)上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵母和(he)真菌(jun)等(deng)。

培(pei)養基 含(han)FBS、生長(chang)添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹次

生長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態 成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特(te)性 可(ke)傳(chuan)5代(dai)左(zuo)右(you)；3代(dai)以(yi)內狀(zhuang)態

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養條件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實驗器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌(jun)的培(pei)養皿、培(pei)養瓶、移液(ye)管、離心管、手(shou)術(shu)器(qi)械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合適(shi)的(de)消毒(du)處理。

2. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備：配制或(huo)購(gou)買(mai)合適(shi)的(de)培(pei)養基、消化(hua)酶（如、膠原(yuan)酶等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確保其(qi)無菌(jun)且(qie)在有效(xiao)期內。

3. 實驗動物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根據(ju)實驗需求，選(xuan)擇合適(shi)的(de)動物並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的麻醉(zui)或(huo)處死(si)，獲取(qu)所需組(zu)織(zhi)；或(huo)從(cong)已有的(de)組織(zhi)樣本庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處理

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條件下，迅(xun)速取(qu)出目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對(dui)組織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余的脂(zhi)肪、結締組織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗：將(jiang)取出的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除血液(ye)和雜(za)質。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續消化(hua)。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消化(hua)酶的離心管中(zhong)，在37℃恒(heng)溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培(pei)養箱中(zhong)消化(hua)壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕輕搖晃離心管，使(shi)消化(hua)更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被(bei)消化(hua)成(cheng)單細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或(huo)小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時，加(jia)入含(han)血清的培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離心：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未消化(hua)的(de)組織(zhi)碎(sui)片，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢測

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天用倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)的(de)形(xing)態、生長(chang)狀(zhuang)態、密度等(deng)，記(ji)錄細胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情況(kuang)，如(ru)發現細胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異(yi)常，及(ji)時(shi)采(cai)取相應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活力檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采用臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數和活力檢(jian)測，以(yi)了解(jie)細胞(bao)的(de)生長(chang)情況(kuang)和(he)健康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需立即(ji)處理，避免長(chang)時間(jian)暴露於室溫(wen)或(huo)非(fei)營養環境。

- 使(shi)用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽(yan)水沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血液(ye)、雜質。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇

- 根據(ju)組(zu)織(zhi)類型(xing)選(xuan)擇消化(hua)酶，避免過度(du)消化(hua)導(dao)致細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)解(jie)離狀(zhuang)態。

二(er)、培(pei)養條件優(you)化

1. 培(pei)養基選(xuan)擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或(huo)特(te)定生長(chang)因(yin)子的培(pei)養基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁(fan)更換培(pei)養基品牌(pai)或(huo)批(pi)次，減少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力較弱(ruo)，可能需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養皿（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白、多聚賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度建(jian)議控(kong)制在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會(hui)導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制和分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使(shi)用壹次性耗材，避免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙抗，但長(chang)期使(shi)用可能影響(xiang)細胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定期(qi)檢測支原(yuan)體汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後(hou)需及(ji)時(shi)丟(diu)棄細胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天檢查(zha)細胞(bao)形(xing)態、密度及(ji)培(pei)養基顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換培(pei)養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液(ye)壹次）。

- 異(yi)常形態（如細胞(bao)變(bian)圓、碎(sui)片增(zeng)多）可能提示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營養不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分(fen)裂(lie)次數有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存早(zao)期代(dai)次細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議使(shi)用(yong) DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用凍(dong)存(cun)培(pei)養基），梯度降溫(wen)後(hou)液(ye)氮保存。