【概要描(miao)述(shu)】大鼠(shu)尿(niao)道(dao)上(shang)皮(pi)細胞(bao)公司正在出(chu)售的產(chan)品(pin)：NCI-H1770非小細(xi)胞肺癌大鼠(shu)肺(fei)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)大鼠(shu)肺(fei)微(wei)血(xue)管周(zhou)細胞(bao)大鼠(shu)心(xin)肌細胞(bao)大鼠(shu)心(xin)房心(xin)肌細胞(bao)大鼠(shu)心(xin)室心(xin)肌細胞(bao)大鼠(shu)心(xin)肌成纖維(wei)細(xi)胞大鼠(shu)主動(dong)脈(mai)內(nei)皮(pi)細胞(bao)大鼠(shu)主動(dong)脈(mai)平滑肌細胞大鼠(shu)主動(dong)脈(mai)外膜成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞

本(ben)公(gong)司所(suo)有產(chan)品(pin)僅供(gong)科學實驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科學實驗(yan)外的使用(yong)！

大鼠(shu)尿(niao)道(dao)上(shang)皮(pi)分離(li)自尿道(dao)管組(zu)織(zhi)；尿(niao)道(dao)是(shi)從膀胱(guang)通向(xiang)體外的管道(dao)。尿(niao)道(dao)上(shang)皮(pi)細胞(bao)主要功能(neng)：①尿(niao)道(dao)上(shang)皮(pi)細胞(bao)排列在膀胱(guang)表面，它是(shi)由高(gao)可塑(su)性(xing)和(he)具(ju)有多(duo)種(zhong)功能(neng)特殊(shu)類(lei)型(xing)的(de)細胞組(zu)成(cheng)；②上(shang)皮(pi)細胞(bao)組(zu)成(cheng)膀胱(guang)的防(fang)禦(yu)系(xi)統(tong)與(yu)病(bing)原(yuan)體接(jie)觸，它們(men)具(ju)有多(duo)種(zhong)防(fang)禦(yu)機(ji)制(zhi)來(lai)阻(zu)止(zhi)病(bing)原(yuan)體粘著，保持(chi)泌(mi)尿(niao)器溶解物(wu)的不滲透性(xing)；③膀胱(guang)上皮(pi)細胞(bao)表達雌(ci)激(ji)素(su)α、β受(shou)體，上(shang)皮(pi)生(sheng)長因(yin)子(zi)受(shou)體和(he)纖維(wei)母細胞生(sheng)長因(yin)子(zi)受(shou)體，在損傷(shang)和(he)感(gan)染(ran)時，這些(xie)受(shou)體對(dui)膀胱(guang)上皮(pi)細胞(bao)起著重要作(zuo)用(yong)；④能(neng)釋放許多(duo)細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)、免疫(yi)系(xi)統(tong)介(jie)質。
方法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實驗(yan)室分離(li)的大鼠(shu)尿(niao)道(dao)上(shang)皮(pi)采用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)混合(he)消(xiao)化(hua)法結合(he)差(cha)速貼壁(bi)法，並(bing)通(tong)過上皮(pi)細胞(bao)專用(yong)培(pei)養基培養篩選(xuan)制(zhi)備而(er)來(lai)，細(xi)胞總(zong)量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實驗(yan)室分離(li)的大鼠(shu)尿(niao)道(dao)上(shang)皮(pi)經PCK免疫(yi)熒光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達90%以(yi)上，且(qie)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真菌(jun)等(deng)。

包(bao)被(bei)條(tiao)件(jian) 鼠(shu)尾(wei)膠(jiao)原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基 含FBS、生(sheng)長添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次(ci)

生(sheng)長特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 上(shang)皮(pi)細胞(bao)樣

傳(chuan)代特性(xing) 可傳(chuan)1-2代

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備：準備無菌的(de)培養皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離(li)心(xin)管、手術器械等(deng)，並進(jin)行高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其他(ta)合(he)適(shi)的消毒處理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配制(zhi)或(huo)購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的培養基、消化(hua)酶（如、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑，確(que)保其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在有效(xiao)期內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根據(ju)實驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇合(he)適(shi)的動(dong)物(wu)並進(jin)行相應(ying)的(de)麻(ma)醉或(huo)處死，獲(huo)取所(suo)需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與處理(li)

1. 取材(cai)：在無菌(jun)條(tiao)件(jian)下，迅速取出(chu)目標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並去除(chu)多(duo)余(yu)的脂(zhi)肪、結締組(zu)織(zhi)等(deng)非目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的組(zu)織(zhi)用(yong)預冷的(de)無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以(yi)去除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小塊，以便後續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織(zhi)塊放入含有適量(liang)消(xiao)化(hua)酶的離(li)心(xin)管中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖床或(huo)培養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)壹段時間(jian)。期間(jian)可輕輕搖晃(huang)離(li)心(xin)管，使消化(hua)更均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊大部分被(bei)消(xiao)化(hua)成單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)或(huo)小細(xi)胞團(tuan)時，加入含血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩過濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的組(zu)織(zhi)碎片(pian)，然後將(jiang)濾(lv)液(ye)以適(shi)當的(de)轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收集(ji)細胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀察(cha)與檢(jian)測

1. 日(ri)常觀察(cha)：每(mei)天(tian)用(yong)倒(dao)置顯微(wei)鏡觀察(cha)細胞的(de)形(xing)態、生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)、密(mi)度等(deng)，記錄細胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情況，如(ru)發(fa)現(xian)細胞汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及時采取相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞計數與活力(li)檢(jian)測：在需要時，可采用(yong)臺(tai)盼藍染(ran)色等(deng)方法對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行計(ji)數和(he)活力(li)檢(jian)測，以了(le)解(jie)細胞的生(sheng)長情(qing)況和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材(cai)與分離(li)

1. 快(kuai)速操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材(cai)後需立即(ji)處理(li)，避(bi)免長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或(huo)非營養環境。

- 使用(yong)無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消(xiao)化(hua)酶選(xuan)擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導致細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間(jian)需嚴格控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可通過(guo)顯微(wei)鏡觀察(cha)細胞解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件(jian)優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基選(xuan)擇

- 使用(yong)含血(xue)清(qing)或(huo)特定(ding)生(sheng)長因(yin)子(zi)的(de)培(pei)養基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞需(xu)添加胰島素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻繁(fan)更換(huan)培(pei)養基品牌或(huo)批次(ci)，減(jian)少(shao)細胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原(yuan)代細胞貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能需(xu)要包(bao)被(bei)培(pei)養皿(min)（如膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代時密(mi)度建(jian)議控制(zhi)在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會導致接觸抑制(zhi)和(he)分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基中(zhong)可添加雙(shuang)抗，但長期(qi)使用(yong)可能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期檢(jian)測支原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後需及時丟(diu)棄細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查細胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及(ji)培(pei)養基顏色，及(ji)時更換(huan)培(pei)養基（通常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎片(pian)增多(duo)）可能提(ti)示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代與凍(dong)存

- 原(yuan)代細胞分裂次(ci)數有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需及時凍(dong)存早(zao)期(qi)代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議使用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用(yong)凍(dong)存培養基），梯度降溫後液(ye)氮(dan)保存。