【概(gai)要描(miao)述】大(da)鼠腎(shen)成纖(xian)維細胞(bao)公司正(zheng)在(zai)出(chu)售的產品(pin)：NCI-H1755非小(xiao)細胞(bao)肺(fei)癌(ai)人神經幹(gan)細胞(bao)人腦皮層(ceng)神經(jing)元細(xi)胞(bao)人小膠質(zhi)細胞(bao)人雪旺(wang)細胞(bao)人腦微(wei)血管平滑(hua)肌細胞(bao)人腦血管周細胞(bao)大(da)鼠肺(fei)微(wei)血管內(nei)皮細(xi)胞(bao)大(da)鼠肺(fei)動脈(mai)內(nei)皮細(xi)胞(bao)大(da)鼠肺(fei)動脈(mai)平滑(hua)肌細胞(bao)

大(da)鼠腎(shen)成纖(xian)維分離(li)自(zi)腎(shen)組織；腎(shen)臟是(shi)機(ji)體的重要器(qi)官(guan)，它的基(ji)本(ben)功(gong)能是生(sheng)成尿(niao)液(ye)，借以清(qing)除體內(nei)代謝產(chan)物(wu)及(ji)某(mou)些廢(fei)物(wu)、毒(du)物(wu)，同(tong)時經重吸(xi)收功(gong)能保留水(shui)份及其他有(you)用(yong)物(wu)質(zhi)，如葡(pu)萄(tao)糖、蛋白(bai)質(zhi)、氨基(ji)酸(suan)、鈉離子(zi)、鉀離子(zi)、碳suan氫鈉等，以(yi)調節(jie)水(shui)、電(dian)解質(zhi)平衡(heng)及維護(hu)酸(suan)堿平衡(heng)。腎臟(zang)同時還(hai)有(you)內(nei)分泌(mi)功(gong)能，生成(cheng)腎素、促(cu)紅細胞(bao)生(sheng)成(cheng)素、活(huo)性維生D3、前(qian)列(lie)腺素、激(ji)肽(tai)等，又(you)為(wei)機(ji)體(ti)部(bu)分內(nei)分泌(mi)激(ji)素的降解場(chang)所和(he)腎(shen)外激素的靶(ba)器官(guan)。腎(shen)臟(zang)的這些功(gong)能，保證(zheng)了機(ji)體內(nei)環(huan)境的穩定，使(shi)新陳(chen)代謝得(de)以(yi)正(zheng)常進行(xing)。成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松(song)結締(di)組(zu)織的主要細胞(bao)成(cheng)分，由(you)胚(pei)胎(tai)時(shi)期的間充質(zhi)細胞(bao)分化(hua)而(er)來(lai)。成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)較(jiao)大(da)，輪廓清(qing)楚，多(duo)為(wei)突起的紡錘形或(huo)星形的扁(bian)平狀(zhuang)結構(gou)，其(qi)細(xi)胞(bao)核呈規則的卵(luan)圓形，核仁大(da)而(er)明(ming)顯(xian)。成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)功(gong)能活(huo)動旺(wang)盛，細(xi)胞(bao)質(zhi)嗜弱(ruo)堿性，具(ju)明(ming)顯(xian)的蛋白(bai)質(zhi)合成(cheng)和(he)分泌(mi)活(huo)動，在(zai)壹(yi)定條件(jian)下，它可(ke)以(yi)實現跟纖(xian)維細胞(bao)的互相轉化；成(cheng)纖(xian)維細胞(bao)對不同程(cheng)度(du)的細胞(bao)變(bian)性、壞死和組織缺損以及(ji)骨(gu)創傷(shang)的修復有(you)著十(shi)分重(zhong)要的作(zuo)用(yong)。腎成纖(xian)維細胞(bao)是(shi)腎(shen)臟(zang)結締組(zu)織中最重(zhong)要的細胞(bao)類(lei)型(xing)，在(zai)體(ti)外培養(yang)中，壹般(ban)大(da)致成梭形、多(duo)角(jiao)形或(huo)不規則形等，為(wei)貼(tie)壁(bi)生(sheng)長型細(xi)胞(bao)。剛分離(li)的腎成纖(xian)維細胞(bao)呈圓形、折(zhe)光(guang)性良好(hao)，懸浮於培養(yang)基(ji)中。30min細胞(bao)貼(tie)壁(bi)，其(qi)中部(bu)分開(kai)始(shi)伸出(chu)偽足，表(biao)現為(wei)小(xiao)的突起；6h後(hou)細胞(bao)基(ji)本(ben)貼(tie)壁(bi)wan全，伸(shen)展(zhan)成梭形，胞(bao)核清(qing)晰(xi)，分布(bu)較均(jun)勻，散在(zai)生(sheng)長，不聚集(ji)成(cheng)團(tuan)；細胞(bao)生(sheng)長迅速(su)，5-7天即(ji)呈融合(he)狀態(tai)，細(xi)胞(bao)排(pai)列(lie)緊(jin)密，有(you)的交叉(cha)重疊(die)生(sheng)長，平坦(tan)、胞(bao)體(ti)較(jiao)大(da)，細胞(bao)質(zhi)透(tou)明(ming)，細胞(bao)核較大(da)，呈橢圓(yuan)形，顏(yan)色淡。細胞(bao)融(rong)合(he)，並(bing)彼(bi)此(ci)連接成網(wang)狀(zhuang)；細(xi)胞(bao)呈突起的紡錘形或(huo)星形的扁(bian)平分布(bu)。其主要功(gong)能有(you)：①組成(cheng)過(guo)濾(lv)屏(ping)障內(nei)壁的重要部(bu)分；②在(zai)炎(yan)癥(zheng)和(he)致血栓物(wu)質(zhi)的刺激(ji)合(he)成(cheng)必要的生物(wu)活(huo)性分子(zi)；③受(shou)損後(hou)影(ying)響(xiang)系(xi)膜細(xi)胞(bao)和(he)上(shang)皮細胞(bao)，進(jin)而(er)影(ying)響(xiang)腎臟(zang)病變(bian)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司實驗室分離(li)的大(da)鼠腎(shen)成纖(xian)維采(cai)用(yong)yi蛋白(bai)酶-膠原(yuan)酶混(hun)合消(xiao)化(hua)法(fa)結合(he)差速(su)貼(tie)壁(bi)法(fa)制備而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測：

公司實驗室分離(li)的大(da)鼠腎(shen)成纖(xian)維經Vimentin免疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等。

本(ben)公司所(suo)有(you)產品(pin)僅供(gong)科(ke)學(xue)實驗，不做其(qi)他科學(xue)實驗外的使用(yong)！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生長添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次

生長特性 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形態(tai) 成纖(xian)維細胞(bao)樣(yang)

傳代特性 可(ke)傳5代左右(you)；3代以內(nei)狀態(tai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條件(jian) 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備工(gong)作(zuo)

1. 實驗器材準備：準備無(wu)菌的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離心(xin)管(guan)、手術(shu)器(qi)械等，並(bing)進行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌或(huo)其他合適(shi)的消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試劑(ji)準備：配(pei)制或(huo)購買合(he)適(shi)的培養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如、膠原(yuan)酶等）、胎(tai)牛(niu)血清(qing)、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保其無菌且在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實驗動物(wu)或(huo)組織來(lai)源準備：根據實驗需求，選(xuan)擇(ze)合適(shi)的動物(wu)並(bing)進行(xing)相(xiang)應(ying)的麻醉或(huo)處(chu)死，獲取所需(xu)組(zu)織；或(huo)從已(yi)有(you)的組織樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲取(qu)組織。

取材(cai)與處(chu)理

1. 取材(cai)：在(zai)無(wu)菌條件(jian)下，迅速(su)取出(chu)目(mu)標(biao)組織，盡(jin)量減(jian)少對組(zu)織的損傷(shang)，並(bing)去除(chu)多(duo)余的脂肪、結締(di)組(zu)織等非(fei)目(mu)的組織。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織用(yong)預(yu)冷的無菌PBS沖洗數(shu)次，以去除(chu)血液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織剪成約1 - 2mm³的小塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎(sui)的組織塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的離心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時間。期間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當組織塊(kuai)大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單細胞(bao)懸液或(huo)小細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入含血清(qing)的培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾(lv)與離(li)心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸液，去除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的組織碎(sui)片，然後(hou)將濾(lv)液(ye)以適(shi)當的轉速(su)離心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢測

1. 日常觀察(cha)：每天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密度(du)等，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變化情(qing)況，如(ru)發(fa)現(xian)細胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異常，及時(shi)采(cai)取(qu)相應(ying)措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與活(huo)力檢測：在(zai)需(xu)要時，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍染色等方(fang)法(fa)對細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數和(he)活(huo)力檢測，以(yi)了解細(xi)胞(bao)的生長情況(kuang)和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取(qu)材與分離(li)

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組織取(qu)材後(hou)需立即(ji)處(chu)理，避(bi)免長時間暴(bao)露(lu)於(yu)室溫(wen)或(huo)非營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗組(zu)織，去除(chu)血液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根據組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免過度消(xiao)化(hua)導(dao)致細胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間需嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)解離(li)狀態(tai)。

二(er)、培養(yang)條件(jian)優化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含血清(qing)或(huo)特定生(sheng)長因子(zi)的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素、EGF 等。

- 避免頻繁更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌或(huo)批次，減(jian)少細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代

- 原(yuan)代細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被培養(yang)皿(min)（如膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳代時密(mi)度(du)建議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合(he)會導(dao)致接觸(chu)抑制和(he)分化(hua)。

三、汙染控(kong)制

1. 無菌操作(zuo)

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性耗(hao)材(cai)，避(bi)免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測

- 定期(qi)檢測支(zhi)原(yuan)體汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需及(ji)時(shi)丟(diu)棄細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日常觀察(cha)

- 每天檢查細(xi)胞(bao)形態(tai)、密(mi)度(du)及培養(yang)基(ji)顏(yan)色，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常每 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙(wu)染或(huo)營養(yang)不足。

2. 傳代與凍(dong)存

- 原(yuan)代細胞(bao)分裂(lie)次數有(you)限（壹(yi)般 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍(dong)存早(zao)期代次細胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建議(yi)使用(yong) DMSO+血清(qing)（或(huo)專用(yong)凍(dong)存培養(yang)基(ji)），梯度降溫後(hou)液氮(dan)保存。