【概要描述(shu)】大鼠(shu)輸(shu)尿(niao)管上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)公司(si)正在(zai)出售(shou)的產品(pin)：NCI-H1781非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)癌大(da)鼠(shu)腹腔(qiang)主動脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)大(da)鼠腹腔主(zhu)動脈(mai)外(wai)膜成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)大(da)鼠股動脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)大(da)鼠股動脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)大(da)鼠心肌幹(gan)細(xi)胞(bao)大(da)鼠主動脈(mai)弓平滑肌(ji)細(xi)胞(bao)大(da)鼠主動脈(mai)弓內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)大(da)鼠心臟(zang)微血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)大(da)鼠頸動脈(mai)成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)

本公司(si)所有(you)產品(pin)僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做其他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的使(shi)用！

大(da)鼠(shu)輸(shu)尿(niao)管上(shang)皮(pi)分(fen)離自輸(shu)尿(niao)管組織；輸(shu)尿(niao)管上(shang)接(jie)腎(shen)盂(yu)，下(xia)連膀(pang)胱(guang)，是(shi)壹對(dui)細(xi)長(chang)的(de)管道，呈扁圓柱狀，位於(yu)腹(fu)膜(mo)後(hou)，為(wei)壹肌肉粘膜(mo)所(suo)組成(cheng)管狀結構(gou)，沿(yan)腰大肌內(nei)側的前(qian)方(fang)垂直下(xia)降(jiang)進入骨盆(pen)。輸(shu)尿(niao)管有(you)三(san)個狹窄部：壹個在腎(shen)盂(yu)與(yu)輸(shu)尿(niao)管移(yi)行(xing)處（輸(shu)尿(niao)管起始處）；壹個在越過小骨盆(pen)入口處；最後(hou)壹個在進入膀(pang)胱(guang)壁(bi)的(de)內(nei)部。這些狹(xia)窄是結石、及(ji)壞(huai)死(si)組織容(rong)易(yi)停留(liu)的(de)部位(wei)。輸(shu)尿(niao)管——膀(pang)胱(guang)連接(jie)處有(you)壹種特(te)殊結構(gou)，即(ji)瓦耳代(dai)爾(er)鞘(qiao)，它能(neng)有(you)效(xiao)地(di)防(fang)止膀(pang)胱(guang)內(nei)尿液(ye)返流到輸(shu)尿(niao)管。臨床(chuang)上(shang)將輸(shu)尿(niao)管分(fen)為上(shang)、中、下(xia)三(san)段，也可稱(cheng)為(wei)腹段、盆(pen)段(duan)、膀(pang)胱(guang)段(duan)。其中，腹(fu)段(duan)自腎(shen)盂(yu)輸(shu)尿(niao)管交(jiao)界(jie)處(chu)，到跨越(yue)髂動脈(mai)處(chu)；盆(pen)段(duan)，自髂動脈(mai)到膀(pang)胱(guang)壁(bi)；膀(pang)胱(guang)段(duan)，自膀(pang)胱(guang)壁(bi)內(nei)斜行(xing)至膀(pang)胱(guang)粘(zhan)膜(mo)、輸(shu)尿(niao)管開口(kou)。輸(shu)尿(niao)管管壁(bi)分(fen)為4層(ceng)，黏(nian)膜(mo)層(ceng)、固有(you)層(ceng)、肌(ji)層(ceng)、外(wai)膜。黏(nian)膜層(ceng)表面(mian)為移(yi)行(xing)上(shang)皮(pi)，約(yue)有(you)4-5層(ceng)細(xi)胞(bao)；固有(you)層(ceng)由(you)細(xi)密的(de)結締(di)組織構(gou)成(cheng)，內(nei)含(han)膠(jiao)原纖(xian)維和少量彈(dan)性纖(xian)維；輸(shu)尿(niao)管肌層(ceng)主(zhu)要由(you)內(nei)縱和外(wai)環兩(liang)層(ceng)平滑肌(ji)組成(cheng)；外(wai)膜為(wei)疏(shu)松結締(di)組織，營養血管由(you)外(wai)膜進(jin)入輸(shu)尿(niao)管。其中，輸(shu)尿(niao)管上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)主(zhu)要分(fen)布(bu)於(yu)黏(nian)膜(mo)層(ceng)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)大鼠輸(shu)尿(niao)管上(shang)皮(pi)采用(yong)先(xian)中性dan白(bai)酶消(xiao)化(hua)、然後(hou)機械(xie)分(fen)離法(fa)使(shi)輸(shu)尿(niao)管分(fen)層(ceng)、最後(hou)膠(jiao)原(yuan)酶消(xiao)化(hua)，並通過上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)專用(yong)培(pei)養基(ji)培養篩(shai)選(xuan)制(zhi)備而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢測(ce)：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)大鼠輸(shu)尿(niao)管上(shang)皮(pi)經PCK免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度可達90%以(yi)上(shang)，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵母(mu)和真菌等(deng)。

包(bao)被(bei)條(tiao)件 鼠(shu)尾(wei)膠(jiao)原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液(ye)壹次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性 可傳1-2代(dai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培(pei)養條件(jian) 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材(cai)準備：準(zhun)備無(wu)菌的培(pei)養皿、培養瓶、移(yi)液(ye)管、離心(xin)管、手術器械(xie)等(deng)，並進行(xing)高壓滅菌(jun)或(huo)其他(ta)合(he)適(shi)的(de)消毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試劑準備：配制(zhi)或(huo)購(gou)買(mai)合適(shi)的(de)培養基(ji)、消化(hua)酶（如、膠原酶等(deng)）、胎(tai)牛血清、雙抗等(deng)試劑，確保其無菌(jun)且在(zai)有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物(wu)或(huo)組織來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根據實驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動物(wu)並進行(xing)相應(ying)的(de)麻(ma)醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取所(suo)需(xu)組織；或從已(yi)有(you)的(de)組織樣本庫中獲(huo)取組織。

取材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在無(wu)菌(jun)條件下(xia)，迅(xun)速取出(chu)目標(biao)組織，盡量(liang)減(jian)少對(dui)組織的損傷(shang)，並去(qu)除多(duo)余(yu)的脂(zhi)肪、結締(di)組織等(deng)非目(mu)的(de)組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的組織用預冷的無菌(jun)PBS沖洗數次，以(yi)去(qu)除血液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將組織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪碎(sui)的組織塊放(fang)入含(han)有(you)適(shi)量(liang)消化酶的(de)離(li)心管中，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)壹段時間。期(qi)間可輕輕搖晃(huang)離心管，使(shi)消化(hua)更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消化：當組織塊大部分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入含(han)血(xue)清的培養基(ji)終止消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除未消化的組織碎(sui)片，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉速離心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形態、生長(chang)狀態、密度等(deng)，記錄細(xi)胞(bao)的(de)變化情況，如發現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染或異(yi)常，及(ji)時采取相應(ying)措施。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活(huo)力檢測(ce)：在(zai)需(xu)要時，可采用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等(deng)方法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計數和活(huo)力檢測(ce)，以(yi)了解細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)情況和健康(kang)狀態。

壹、取材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速操作

- 組織取材(cai)後(hou)需(xu)立即(ji)處理(li)，避免(mian)長(chang)時間暴(bao)露於(yu)室(shi)溫(wen)或非營養環境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽水(shui)沖洗(xi)組織，去(qu)除血液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根據組織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免(mian)過度消化導致細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間需(xu)嚴格控(kong)制(zhi)（通常 10-30 分(fen)鐘），可通過顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態。

二、培(pei)養條件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清或特(te)定生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添加(jia)胰島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)品牌(pai)或(huo)批次，減(jian)少細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要包(bao)被(bei)培養皿（如膠原蛋白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建議控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯合會(hui)導致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分(fen)化。

三(san)、汙(wu)染控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全程在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作，使(shi)用壹次性耗(hao)材(cai)，避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培(pei)養基(ji)中可添加(jia)雙抗，但長(chang)期(qi)使(shi)用可能(neng)影(ying)響細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測(ce)

- 定期(qi)檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙染後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態監控

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態、密度及培養基(ji)顏色(se)，及時更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)（通常每(mei) 2-3 天(tian)換液(ye)壹次）。

- 異(yi)常形(xing)態（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎(sui)片增多(duo)）可能(neng)提示汙(wu)染或營(ying)養不足。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂次數有(you)限(xian)（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍(dong)存(cun)早期(qi)代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液建議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培養基(ji)），梯度降溫後(hou)液(ye)氮保存(cun)。