【概要描(miao)述】大(da)鼠(shu)心肌細(xi)胞公(gong)司(si)正在(zai)出售的產品：NCI-H1792非(fei)小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌(ai)小(xiao)鼠(shu)胸(xiong)主(zhu)動(dong)脈平滑肌細(xi)胞大(da)鼠(shu)食管(guan)上皮細胞大鼠(shu)食管(guan)平滑肌細(xi)胞大(da)鼠(shu)食管(guan)成纖維(wei)細(xi)胞(bao)大鼠(shu)胃黏膜(mo)上皮細胞大鼠(shu)胃平滑肌細(xi)胞大(da)鼠(shu)胃成纖維(wei)細(xi)胞(bao)大鼠(shu)小(xiao)腸平滑肌細(xi)胞大(da)鼠(shu)小(xiao)腸隱窩上皮細胞

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產品僅(jin)供科學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其他科學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的使用(yong)！

大鼠(shu)心肌分離(li)自心臟組(zu)織(zhi)；心(xin)臟是脊(ji)椎動(dong)物身(shen)體(ti)中(zhong)最(zui)重要的(de)壹個器(qi)官，主(zhu)要功能(neng)是(shi)為(wei)血(xue)液流動(dong)提(ti)供(gong)壓(ya)力(li)，把血(xue)液運行(xing)至身(shen)體(ti)各(ge)個部分。心(xin)臟由(you)心肌構(gou)成，左心(xin)房、左心(xin)室(shi)、右心房、右心室(shi)四(si)個腔(qiang)組(zu)成(cheng)。左右心房之間(jian)和左右心室(shi)之間(jian)均由(you)間(jian)隔隔(ge)開(kai)，故(gu)互(hu)不(bu)相(xiang)通，心(xin)房與(yu)心(xin)室(shi)之間(jian)有(you)瓣(ban)膜(mo)（房室(shi)瓣(ban)），這(zhe)些瓣(ban)膜(mo)使血(xue)液只能(neng)由(you)心房流入(ru)心(xin)室，而(er)不(bu)能(neng)倒(dao)流。心(xin)臟的作用是推動(dong)血(xue)液流動(dong)，向器(qi)官、組(zu)織(zhi)提(ti)供(gong)充足的血(xue)流量(liang)，以(yi)供(gong)應(ying)氧和各(ge)種(zhong)營(ying)養(yang)物(wu)質，並帶(dai)走(zou)代謝(xie)的(de)終(zhong)產物（如(ru)二氧化(hua)碳、無(wu)機鹽(yan)、尿(niao)素(su)和尿(niao)酸(suan)等），使細(xi)胞維(wei)持正常的代(dai)謝(xie)和功能(neng)。心(xin)肌細(xi)胞呈(cheng)菱形、多邊(bian)形等不(bu)規(gui)則形狀；細(xi)胞培養2h後開始貼壁(bi)，呈(cheng)梭(suo)形；到(dao)12h左右，細胞(bao)開始伸出偽足，呈(cheng)菱形、多角(jiao)形；分離(li)培養48h以(yi)後，大部分伸出偽足、呈(cheng)巴(ba)掌狀，部分心(xin)肌細(xi)胞會(hui)出現搏動(dong)；心肌細(xi)胞為(wei)終(zhong)末(mo)分化(hua)細胞(bao)，在(zai)體(ti)外(wai)不(bu)增(zeng)殖(zhi)。體(ti)外(wai)培養的(de)心肌細(xi)胞可(ke)保持結構(gou)及(ji)功能(neng)上的某(mou)些特(te)點(dian)，並(bing)具有(you)自(zi)發性(xing)節律搏動(dong)，且心(xin)肌細(xi)胞的(de)培養具有(you)簡(jian)便、定量(liang)、重復(fu)性(xing)好(hao)以(yi)及(ji)不(bu)受(shou)神經(jing)體(ti)液因(yin)素的(de)影(ying)響等特(te)點(dian)。利(li)用培養的(de)心肌細(xi)胞在(zai)探(tan)索(suo)非(fei)血(xue)液動(dong)力(li)學(xue)因(yin)素所(suo)致(zhi)的心肌肥(fei)厚(hou)的調(tiao)節，研究(jiu)心肌細(xi)胞的(de)生物(wu)力(li)學(xue)、雕(diao)亡、受(shou)體(ti)下調(tiao)、缺血(xue)預處理、信(xin)號(hao)通(tong)路(lu)、對作用於心臟的新(xin)藥進(jin)行(xing)篩(shai)選並(bing)對其安(an)全性(xing)進(jin)行(xing)評(ping)價以(yi)及(ji)從(cong)培養的(de)心肌細(xi)胞中(zhong)提(ti)取(qu)有(you)價值(zhi)的生物(wu)因(yin)子等方(fang)面(mian)具有(you)廣(guang)闊(kuo)的應(ying)用前(qian)景(jing)，對(dui)於研究(jiu)其生理功能(neng)、藥物(wu)作用以及(ji)各(ge)種(zhong)致(zhi)病因(yin)素作用下的病理生理改(gai)變具重要意(yi)義。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的大鼠(shu)心肌采(cai)用膠(jiao)原酶-聯合(he)消化(hua)法(fa)結合(he)差速貼壁(bi)法(fa)，並(bing)用化(hua)學(xue)試(shi)劑抑(yi)制(zhi)法(fa)篩(shai)選制(zhi)備而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的大鼠(shu)心肌經(jing)α-Sarcometric actin免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒定，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以(yi)上，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等。

包(bao)被(bei)條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml）

培養基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率(lv) 每(mei)2-3天換液壹次(ci)

生長(chang)特(te)性(xing) 貼壁(bi)

細胞(bao)形態 梭(suo)形、多角(jiao)形

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 屬於終(zhong)末(mo)分化(hua)細胞(bao)；屬於不(bu)增(zeng)殖(zhi)細胞(bao)群(qun)

消化(hua)液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養條(tiao)件 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實驗(yan)器(qi)材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無菌(jun)的(de)培養皿(min)、培養瓶、移(yi)液管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術(shu)器(qi)械等，並進(jin)行高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或其他合適的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配制(zhi)或購買(mai)合適的(de)培養基(ji)、消化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等）、胎牛血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑，確保其無菌且(qie)在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗(yan)動(dong)物或組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需(xu)求，選擇(ze)合適的(de)動(dong)物並(bing)進行(xing)相(xiang)應(ying)的麻醉(zui)或處死，獲取所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或從(cong)已有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取組(zu)織(zhi)。

取材(cai)與(yu)處理

1. 取材(cai)：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速取出目標組(zu)織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少對組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷，並(bing)去(qu)除多余(yu)的(de)脂肪、結締(di)組(zu)織(zhi)等非(fei)目的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的組(zu)織(zhi)用(yong)預(yu)冷的(de)無菌(jun)PBS沖洗(xi)數(shu)次，以去(qu)除血(xue)液和雜質。

3. 剪切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便後續消化(hua)。

細胞(bao)分離(li)

1. 消化(hua)：將剪(jian)碎的組(zu)織(zhi)塊放(fang)入(ru)含(han)有(you)適量(liang)消(xiao)化(hua)酶的(de)離心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培養箱中(zhong)消化(hua)壹段(duan)時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管(guan)，使消(xiao)化(hua)更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊大部分被(bei)消化(hua)成單(dan)細(xi)胞懸液或小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加(jia)入含(han)血(xue)清的培養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除未消化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾液以適當的轉速離心(xin)，收集細胞沈澱(dian)。

細胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢(jian)測(ce)

1. 日常觀察(cha)：每(mei)天用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形態、生長(chang)狀態、密度(du)等，記錄(lu)細胞(bao)的變化(hua)情況，如(ru)發現(xian)細胞(bao)汙(wu)染或異(yi)常，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措施。
2. 細胞(bao)計數與(yu)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細胞(bao)進(jin)行(xing)計數和活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生長(chang)情況和健康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速操作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需(xu)立即處理，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露於室溫或非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或生理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液、雜質。

2. 消化(hua)酶選擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選擇(ze)消化(hua)酶，避(bi)免(mian)過度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消化(hua)時間(jian)需(xu)嚴格(ge)控(kong)制(zhi)（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀態。

二、培養條(tiao)件優(you)化(hua)

1. 培養基(ji)選擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血(xue)清或特(te)定(ding)生長(chang)因(yin)子的(de)培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xi)胞需(xu)添加胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻繁(fan)更換培養基(ji)品牌(pai)或批次，減(jian)少細胞(bao)適應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要包(bao)被(bei)培養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋白、多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分化(hua)。

三、汙(wu)染控(kong)制(zhi)

1. 無菌(jun)操作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操作，使用壹次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培養基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可(ke)能(neng)影(ying)響細胞活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞。

四(si)、狀態監(jian)控(kong)

1. 日常觀察(cha)

- 每(mei)天檢(jian)查細胞形態、密度(du)及(ji)培養基(ji)顏(yan)色，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養基(ji)（通常每(mei) 2-3 天換液壹次(ci)）。

- 異(yi)常形態（如細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙(wu)染或營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存

- 原代(dai)細胞(bao)分裂次數(shu)有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍存早期(qi)代次細(xi)胞。

- 凍存液建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用(yong)凍存培養基(ji)），梯(ti)度降溫後液氮保存。