【概(gai)要描述】大鼠腎(shen)皮(pi)質(zhi)上(shang)皮(pi)細胞(bao)公(gong)司正在出售的產(chan)品：NCI-H1651非(fei)小細胞(bao)肺(fei)癌(ai)人(ren)CIK細胞(bao)人(ren)脾臟單核(he)細胞(bao)人(ren)外(wai)周(zhou)血巨噬細胞(bao)人(ren)脾臟微血管(guan)內皮(pi)細胞(bao)人(ren)Treg細胞(bao)人(ren)骨(gu)髓肥大細胞(bao)人(ren)牙(ya)周(zhou)膜成(cheng)纖維細胞(bao)人(ren)牙(ya)周(zhou)膜幹(gan)細胞(bao)人(ren)牙(ya)髓幹細胞(bao)

本(ben)公司所有產(chan)品僅(jin)供科(ke)學(xue)實(shi)驗，不(bu)做其(qi)他科(ke)學(xue)實(shi)驗外(wai)的(de)使用(yong)！

大鼠腎(shen)皮(pi)質(zhi)上(shang)皮(pi)分離(li)自(zi)腎(shen)組(zu)織；腎(shen)臟(zang)是(shi)機體的(de)重(zhong)要器官，它(ta)的(de)基(ji)本(ben)功能是(shi)生成(cheng)尿(niao)液(ye)，借(jie)以清除(chu)體(ti)內(nei)代(dai)謝(xie)產(chan)物(wu)及(ji)某些(xie)廢(fei)物(wu)、毒(du)物(wu)，同(tong)時經(jing)重(zhong)吸收(shou)功能保(bao)留水份及(ji)其(qi)他有用(yong)物(wu)質(zhi)，如葡(pu)萄糖(tang)、蛋白質、氨基(ji)酸、鈉離(li)子、鉀離子、碳(tan)suan氫鈉等，以(yi)調(tiao)節水、電(dian)解(jie)質平衡及維護(hu)酸堿(jian)平衡。腎(shen)臟(zang)同(tong)時還有內分泌(mi)功能，生(sheng)成腎(shen)素(su)、促(cu)紅(hong)細胞(bao)生(sheng)成(cheng)素(su)、活性維生D3、前(qian)列腺(xian)素(su)、激(ji)肽(tai)等，又(you)為(wei)機體部分內(nei)分泌(mi)激(ji)素(su)的降解(jie)場所(suo)和(he)腎(shen)外(wai)激(ji)素(su)的靶器官(guan)。腎(shen)臟(zang)的(de)這(zhe)些(xie)功能，保(bao)證(zheng)了(le)機體內(nei)環(huan)境(jing)的(de)穩定(ding)，使新(xin)陳(chen)代謝(xie)得(de)以正(zheng)常進(jin)行(xing)。
方法(fa)簡(jian)介：

公司實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)大鼠腎(shen)皮(pi)質(zhi)上(shang)皮(pi)采(cai)用(yong)yi蛋白酶-膠(jiao)原(yuan)酶混合(he)消化法(fa)結合(he)差速(su)貼壁法(fa)，並通(tong)過上(shang)皮(pi)細胞(bao)專(zhuan)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)篩(shai)選(xuan)制備而(er)來，細胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測：

公司實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)大鼠腎(shen)皮(pi)質(zhi)上(shang)皮(pi)經(jing)PCK免疫(yi)熒光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可(ke)達(da)90%以上(shang)，且不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌(jun)等。

包被條件(jian) 鼠尾(wei)膠(jiao)原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培(pei)養(yang)基(ji) 含FBS、生長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻率(lv) 每2-3天(tian)換(huan)液壹次

生長(chang)特(te)性(xing) 貼壁

細胞(bao)形(xing)態 上(shang)皮(pi)細胞(bao)樣(yang)

傳代特性(xing) 可傳1-2代

消化液(ye) 0.25%yi蛋白酶

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材準備(bei)：準備(bei)無(wu)菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養(yang)瓶、移液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手(shou)術器械(xie)等，並進(jin)行(xing)高壓滅(mie)菌(jun)或其(qi)他合(he)適(shi)的消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配制或購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的培(pei)養(yang)基(ji)、消化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎(tai)牛血清、雙抗等試劑，確(que)保(bao)其(qi)無菌(jun)且在有效期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或組(zu)織來源準(zhun)備：根據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適(shi)的動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相應的麻醉或處死(si)，獲(huo)取(qu)所需(xu)組(zu)織；或從(cong)已(yi)有的組(zu)織樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在無菌(jun)條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出目標組(zu)織，盡(jin)量(liang)減(jian)少對(dui)組(zu)織的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除(chu)多(duo)余的脂(zhi)肪、結締(di)組(zu)織等非(fei)目的(de)組(zu)織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的(de)組(zu)織用(yong)預冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次，以去除(chu)血液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將組(zu)織剪成約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以便後續消化。

細胞(bao)分離(li)

1. 消化：將剪碎(sui)的(de)組(zu)織塊放入(ru)含有適(shi)量(liang)消化酶的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖床或培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間可輕輕搖晃離心(xin)管(guan)，使消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止消化：當(dang)組(zu)織塊大部分被(bei)消(xiao)化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小(xiao)細胞(bao)團時，加入(ru)含血清的培(pei)養(yang)基(ji)終止消化。

3. 過濾與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過濾細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組(zu)織碎(sui)片(pian)，然後將濾(lv)液(ye)以適(shi)當的(de)轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀察與(yu)檢測

1. 日常觀察：每(mei)天(tian)用(yong)倒(dao)置顯微鏡(jing)觀察細胞(bao)的(de)形(xing)態、生長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度等，記(ji)錄細胞(bao)的(de)變(bian)化情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細胞(bao)汙(wu)染或異(yi)常，及(ji)時(shi)采取(qu)相應措施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與(yu)活力(li)檢測：在需要時，可采(cai)用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染色等方(fang)法(fa)對(dui)細胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數和(he)活力(li)檢測，以了解細胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織取(qu)材後需立即(ji)處理(li)，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室(shi)溫(wen)或非(fei)營(ying)養環(huan)境(jing)。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶選擇(ze)

- 根據(ju)組(zu)織類型(xing)選擇消(xiao)化酶，避(bi)免(mian)過度消化導(dao)致細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時(shi)間(jian)需(xu)嚴格(ge)控(kong)制（通常 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通過顯微鏡(jing)觀察細胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二、培(pei)養(yang)條件(jian)優化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選擇

- 使用(yong)含(han)血清或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的培(pei)養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞(bao)需(xu)添(tian)加胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻繁(fan)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品牌(pai)或批(pi)次，減(jian)少細胞(bao)適(shi)應壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼(tie)壁能力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能(neng)需要包被培(pei)養(yang)皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋白、多聚(ju)賴氨酸）。

- 傳代時密(mi)度建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度匯合(he)會導(dao)致接觸(chu)抑制和(he)分化。

三、汙染控(kong)制

1. 無菌(jun)操作

- 全程在超凈(jing)臺(tai)操作，使用(yong)壹(yi)次性耗材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響細胞(bao)活性。

2. 支原(yuan)體(ti)檢測

- 定(ding)期(qi)檢測支原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及時丟棄(qi)細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日常觀察

- 每天(tian)檢查細胞(bao)形(xing)態、密(mi)度及培(pei)養(yang)基(ji)顏色，及時(shi)更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹次）。

- 異常形(xing)態（如細胞(bao)變(bian)圓、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示(shi)汙染或營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳代與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂(lie)次數有限（壹般 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍(dong)存早(zao)期代(dai)次細胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議(yi)使用(yong) DMSO+血清（或專(zhuan)用(yong)凍(dong)存培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫後液氮保(bao)存。