【概要描述(shu)】大(da)鼠(shu)膀(pang)胱成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)公司正在出售的產(chan)品：NCI-H1693非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)癌(ai)人角(jiao)膜內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)人舌表皮(pi)細(xi)胞(bao)人視(shi)網膜色(se)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)人脈絡(luo)膜成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)人視(shi)網膜muller細(xi)胞(bao)人視(shi)網膜微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)人牙齦幹(gan)細(xi)胞(bao)人牙齦上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)人口腔(qiang)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)

大(da)鼠(shu)膀(pang)胱成(cheng)纖(xian)維(wei)分(fen)離(li)自(zi)膀(pang)胱組織(zhi)；膀胱是壹個(ge)儲(chu)尿(niao)器(qi)官(guan)，在哺(bu)乳類動(dong)物(wu)，它(ta)是(shi)由平滑肌(ji)組成(cheng)的(de)壹個(ge)囊(nang)形(xing)結構(gou)，位於骨(gu)盆內(nei)，其後端(duan)開口與(yu)尿(niao)道(dao)相(xiang)通。膀(pang)胱與(yu)尿(niao)道(dao)的(de)交界處(chu)有(you)括(kuo)約(yue)肌(ji)，可以(yi)控制(zhi)尿(niao)液(ye)的(de)排(pai)出。膀胱壁(bi)由三(san)層組織(zhi)組成(cheng)，由內(nei)向(xiang)外(wai)為黏膜(mo)層、肌(ji)層和(he)外(wai)膜。肌(ji)層由平滑肌(ji)纖(xian)維(wei)構(gou)成(cheng)，稱(cheng)為逼尿(niao)肌(ji)，逼尿(niao)肌(ji)收縮(suo)，可使膀胱內(nei)壓升(sheng)高(gao)，壓迫(po)尿(niao)液(ye)由尿(niao)道(dao)排(pai)出(chu)。在膀胱與(yu)尿(niao)道(dao)交界處(chu)有(you)較(jiao)厚的環(huan)形(xing)肌(ji)，形(xing)成(cheng)尿(niao)道(dao)內(nei)括約(yue)肌(ji)。在括(kuo)約(yue)肌(ji)收縮(suo)能關閉尿(niao)道(dao)內(nei)口，防止尿(niao)液(ye)自(zi)膀(pang)胱漏出。膀胱壁(bi)分(fen)為三(san)層：即(ji)漿(jiang)膜(mo)層（蜂(feng)窩(wo)脂(zhi)肪(fang)組織(zhi)）、肌(ji)肉層（逼(bi)尿(niao)肌(ji)、膀胱三(san)角(jiao)區肌(ji)）和黏(nian)膜層（極(ji)薄(bo)的壹層移(yi)行(xing)上(shang)皮(pi)組織(zhi)）。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)（Fibroblast）是疏松結締組織(zhi)的主要細(xi)胞(bao)成(cheng)分(fen)，由胚(pei)胎(tai)時期(qi)的間充(chong)質(zhi)細(xi)胞(bao)分(fen)化(hua)而來(lai)。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)較(jiao)大(da)，輪(lun)廓清(qing)楚(chu)，多為突(tu)起的(de)紡(fang)錘(chui)形(xing)或星形(xing)的扁(bian)平狀結構(gou)，其細(xi)胞(bao)核呈(cheng)規則的卵圓形(xing)，核仁(ren)大(da)而明(ming)顯(xian)。成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)功(gong)能(neng)活(huo)動(dong)旺(wang)盛(sheng)，細(xi)胞(bao)質嗜(shi)弱堿(jian)性(xing)，具明(ming)顯(xian)的(de)蛋(dan)白質合(he)成(cheng)和(he)分(fen)泌(mi)活(huo)動(dong)，在(zai)壹定條(tiao)件下，它(ta)可(ke)以實現(xian)跟纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)的互(hu)相轉(zhuan)化(hua)；成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)對不(bu)同程度(du)的(de)細(xi)胞(bao)變(bian)性(xing)、壞(huai)死和(he)組織(zhi)缺損(sun)的修(xiu)復有(you)著(zhe)十(shi)分(fen)重(zhong)要的(de)作用(yong)。剛分(fen)離(li)的膀(pang)胱成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)呈圓(yuan)形(xing)、折光(guang)性(xing)良(liang)好(hao)，懸(xuan)浮於培(pei)養基中(zhong)。30min細(xi)胞(bao)貼壁(bi)，其中(zhong)部(bu)分(fen)開始伸出(chu)偽(wei)足，表現(xian)為小(xiao)的(de)突(tu)起；6h後(hou)細(xi)胞(bao)基本(ben)貼壁(bi)wan全，伸展(zhan)成(cheng)梭形(xing)，胞(bao)核清(qing)晰(xi)，分(fen)布(bu)較(jiao)均勻(yun)，散在生長(chang)，不聚集(ji)成(cheng)團(tuan)；細(xi)胞(bao)生長(chang)迅速，5-7天(tian)即呈(cheng)融合狀態，細(xi)胞(bao)排列緊密，有的(de)交叉重(zhong)疊(die)生(sheng)長(chang)，平坦、胞(bao)體較(jiao)大(da)，細(xi)胞(bao)質透(tou)明(ming)，細(xi)胞(bao)核較(jiao)大(da)，呈(cheng)橢圓(yuan)形(xing)，顏(yan)色(se)淡(dan)。細(xi)胞(bao)融合(he)，並彼此連(lian)接成(cheng)網狀；細(xi)胞(bao)呈突(tu)起的(de)紡(fang)錘(chui)形(xing)或星形(xing)的扁(bian)平分(fen)布(bu)。膀(pang)胱成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)分(fen)泌(mi)的(de)生(sheng)長(chang)因(yin)子是壹種(zhong)具有(you)多功(gong)能(neng)的(de)促有(you)絲(si)分(fen)裂(lie)原，研(yan)究已(yi)表明(ming)其參與(yu)惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu)的(de)形(xing)成(cheng)過(guo)程。近年來(lai)，堿(jian)性(xing)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)生長(chang)因(yin)子在膀胱癌(ai)發(fa)病過(guo)程中(zhong)的(de)作(zuo)用(yong)、與(yu)生物(wu)學(xue)行為之間的(de)關(guan)系(xi)以及(ji)治療上(shang)的應(ying)用(yong)已受到(dao)重(zhong)視(shi)。
方法簡介：

公司實驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)膀(pang)胱成(cheng)纖(xian)維(wei)采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白酶-膠原酶混(hun)合消化法結合(he)差速貼(tie)壁(bi)法制(zhi)備(bei)而來(lai)，細(xi)胞(bao)總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公司實驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)膀(pang)胱成(cheng)纖(xian)維(wei)經(jing)Vimentin免疫熒(ying)光鑒定，純度(du)可(ke)達(da)90%以上(shang)，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等。

本(ben)公司所有產(chan)品僅(jin)供科(ke)學(xue)實驗(yan)，不(bu)做其他科(ke)學(xue)實驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

培(pei)養基 含(han)FBS、生長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻率 每2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹次

生長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳代特(te)性(xing) 可傳5代左右；3代(dai)以內(nei)狀態

消化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養條(tiao)件 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實驗(yan)器(qi)材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的培(pei)養皿、培(pei)養瓶、移(yi)液管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術器(qi)械等，並進行(xing)高壓滅(mie)菌(jun)或其他合(he)適的(de)消毒(du)處(chu)理。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購買合適的培(pei)養基、消化酶（如(ru)、膠原酶等）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等試劑(ji)，確(que)保其無菌(jun)且在有效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或組織(zhi)來(lai)源準(zhun)備(bei)：根(gen)據實驗(yan)需求，選(xuan)擇合(he)適的動(dong)物(wu)並進行(xing)相應(ying)的(de)麻醉或處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需組織(zhi)；或從已(yi)有(you)的組織(zhi)樣本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取(qu)材與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材：在無(wu)菌(jun)條(tiao)件下，迅速取(qu)出(chu)目標組織(zhi)，盡量(liang)減少(shao)對組織(zhi)的損(sun)傷，並去除(chu)多余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組織(zhi)等非目的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織(zhi)用(yong)預冷的(de)無(wu)菌PBS沖洗(xi)數(shu)次，以(yi)去(qu)除(chu)血液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將剪(jian)碎(sui)的(de)組織(zhi)塊放入含(han)有(you)適(shi)量(liang)消化酶的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖床或培(pei)養箱中(zhong)消化壹段(duan)時間。期(qi)間可(ke)輕輕搖晃離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消化更均勻(yun)。

2. 終止消化：當組織(zhi)塊大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消化成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加入含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養基終止消化。

3. 過濾與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消化的組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後(hou)將濾液(ye)以(yi)適當(dang)的轉速離(li)心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與(yu)檢測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每(mei)天(tian)用(yong)倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀態、密度(du)等，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的變(bian)化(hua)情況，如(ru)發現(xian)細(xi)胞(bao)汙染(ran)或異(yi)常，及(ji)時采取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活力(li)檢(jian)測(ce)：在需要時，可采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色等方(fang)法(fa)對細(xi)胞(bao)進行(xing)計數(shu)和活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)，以了解(jie)細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情況和(he)健(jian)康狀態。

壹、取(qu)材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材後需立即處(chu)理，避免(mian)長(chang)時間暴(bao)露於室(shi)溫(wen)或非營(ying)養環境。

- 使用(yong)無菌 PBS 或生理鹽(yan)水沖洗(xi)組織(zhi)，去除(chu)血液(ye)、雜質。

2. 消化酶選(xuan)擇

- 根(gen)據組織(zhi)類型選(xuan)擇(ze)消化酶，避免(mian)過(guo)度(du)消化導(dao)致細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化時間需嚴(yan)格控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯微鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)解離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件優化(hua)

1. 培(pei)養基選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或特定生長(chang)因(yin)子的培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需添加胰島素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更換(huan)培(pei)養基品(pin)牌或批次(ci)，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能力(li)較(jiao)弱，可能(neng)需要包(bao)被培(pei)養皿（如(ru)膠原蛋(dan)白、多聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代時密度(du)建(jian)議(yi)控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會導(dao)致接觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分(fen)化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操作

- 全程在(zai)超凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性(xing)耗(hao)材，避免(mian)交叉汙染(ran)。

- 培(pei)養基中(zhong)可(ke)添(tian)加雙抗，但長(chang)期(qi)使用(yong)可能影響(xiang)細(xi)胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原體檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢測(ce)支(zhi)原體汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後需及(ji)時丟棄細(xi)胞(bao)。

四、狀態監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態、密度(du)及(ji)培(pei)養基顏(yan)色(se)，及(ji)時更換(huan)培(pei)養基（通常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹次）。

- 異(yi)常形(xing)態（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可(ke)能提示汙染(ran)或營(ying)養不足(zu)。

2. 傳代與(yu)凍存

- 原代細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次(ci)數(shu)有限（壹般 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍存早(zao)期(qi)代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存液(ye)建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專用(yong)凍存培(pei)養基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮保存。