【概(gai)要描(miao)述】大(da)鼠(shu)結(jie)腸平滑肌細(xi)胞(bao)公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：LU99非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)癌(ai)兔(tu)視網(wang)膜(mo)色(se)上皮細(xi)胞(bao)兔(tu)晶(jing)狀(zhuang)體上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔(tu)結(jie)膜成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)兔(tu)結(jie)膜上皮(pi)細(xi)胞(bao)兔(tu)脈絡膜微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔(tu)脈絡膜成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)兔(tu)視網(wang)膜(mo)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)兔(tu)牙周膜(mo)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)兔(tu)牙周膜(mo)幹(gan)細(xi)胞(bao)

大(da)鼠(shu)結(jie)腸平滑肌分離(li)自(zi)結(jie)腸組織(zhi)；結(jie)腸在(zai)右髂窩內(nei)續(xu)於盲腸(chang)，在(zai)第3骶椎平面(mian)連接(jie)直(zhi)腸(chang)。結(jie)腸分升(sheng)結(jie)腸、橫結(jie)腸、降(jiang)結(jie)腸和乙狀(zhuang)結(jie)腸4部分，大(da)部分固(gu)定於腹後壁，結(jie)腸的排(pai)列(lie)酷(ku)似英文字母(mu)“M"，將小(xiao)腸包圍在(zai)內(nei)。結(jie)腸橫切(qie)面由內(nei)到(dao)外依次(ci)為(wei)：黏膜(mo)（上(shang)皮(pi)層(ceng)、固(gu)有層(ceng)、黏膜(mo)肌層(ceng)），黏膜(mo)下(xia)層(ceng)（疏松(song)結(jie)締組織(zhi)），肌層(ceng)（內環形、外縱(zong)行(xing)兩層(ceng)平滑肌），外膜（纖(xian)維(wei)膜(mo)或(huo)漿(jiang)膜）。結(jie)腸平滑肌細(xi)胞(bao)主(zhu)要分布(bu)於黏膜肌層(ceng)和肌層(ceng)的內(nei)環形、外縱(zong)行(xing)平滑肌；結(jie)腸運動少(shao)而(er)緩慢，對刺激(ji)的(de)反應也較(jiao)遲緩(huan)。結(jie)腸平滑肌在(zai)食(shi)物消(xiao)化與(yu)吸收、腸道(dao)運(yun)動和物質分泌(mi)、誘(you)發全(quan)身(shen)炎癥(zheng)反應以(yi)及細(xi)胞(bao)內(nei)信號轉(zhuan)導途(tu)徑等(deng)研究(jiu)中起著(zhe)重要的(de)作用(yong)。結(jie)腸平滑肌細(xi)胞(bao)原代分離(li)培養(yang)3天(tian)後，可見(jian)細(xi)胞(bao)貼壁伸(shen)展，細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)大(da)小(xiao)不壹，呈(cheng)梭(suo)形、不規則(ze)形(xing)、三角形(xing)或(huo)扇(shan)形，核卵圓形(xing)、居(ju)中(zhong)；2周後(hou)細(xi)胞(bao)匯(hui)合(he)，多數細(xi)胞(bao)伸(shen)展呈(cheng)長梭(suo)形，胞(bao)漿(jiang)豐富(fu)，有(you)分枝(zhi)狀(zhuang)突起，細(xi)胞(bao)平(ping)行(xing)排列(lie)成(cheng)單層(ceng)或(huo)部(bu)分區域多層(ceng)重疊(die)生長，高(gao)低(di)起伏；細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)低(di)時(shi)，常交(jiao)織(zhi)成(cheng)網狀(zhuang)；密度(du)高(gao)時(shi)，則排(pai)列(lie)為(wei)旋(xuan)渦狀(zhuang)或(huo)柵(zha)欄(lan)狀(zhuang)。傳代(dai)後(hou)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)較(jiao)快，4-6天(tian)即可匯(hui)合(he)，並(bing)保(bao)持(chi)上(shang)述形態學(xue)特征(zheng)和生(sheng)長特點(dian)。結(jie)腸平滑肌運動活性受(shou)到神(shen)經遞(di)質、胃腸激(ji)素(su)和(he)藥物等(deng)因素(su)的(de)調節。隨著(zhe)現代(dai)胃(wei)腸動力學研究(jiu)的進展，對胃腸運動的研究(jiu)已(yi)從器官(guan)、組織(zhi)水(shui)平(ping)發展到(dao)細(xi)胞(bao)、分子(zi)水(shui)平(ping)，要求(qiu)在(zai)胃(wei)腸(chang)道(dao)單(dan)個平滑肌細(xi)胞(bao)標(biao)本上(shang)來(lai)完(wan)成(cheng)各種(zhong)電生(sheng)理、藥理和分子(zi)生物學(xue)等實(shi)驗。體(ti)外培養(yang)細(xi)胞(bao)，由於影響因素(su)單(dan)壹，是(shi)研究(jiu)細(xi)胞(bao)功(gong)能以(yi)及相應(ying)的細(xi)胞(bao)信號轉(zhuan)導機(ji)制的(de)基礎。
方(fang)法(fa)簡介：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的大(da)鼠(shu)結(jie)腸平滑肌采用(yong)yi蛋白酶-膠原酶聯合消化法(fa)結(jie)合差速貼壁法(fa)制備而(er)來，細(xi)胞(bao)總量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測：

公(gong)司實(shi)驗室(shi)分離(li)的大(da)鼠(shu)結(jie)腸平滑肌經α-SMA免(mian)疫熒(ying)光鑒定，純度(du)可達(da)90%以(yi)上，且(qie)不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等。

本公(gong)司所(suo)有(you)產(chan)品僅供(gong)科學(xue)實(shi)驗，不做(zuo)其他(ta)科學(xue)實(shi)驗外的使用！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生長(chang)特性 貼壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳代(dai)特性 可傳(chuan)5代左(zuo)右；3代以(yi)內狀(zhuang)態

消化液(ye) 0.25%yi蛋白酶

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適的消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試劑準備：配(pei)制或(huo)購買(mai)合適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)、消化酶（如、膠原酶等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等試劑，確保其(qi)無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效期內。

3. 實(shi)驗動物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合適的動物並(bing)進(jin)行(xing)相應的麻醉(zui)或(huo)處(chu)死，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已(yi)有的(de)組織(zhi)樣本庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅(xun)速取(qu)出(chu)目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減少(shao)對組織(zhi)的(de)損(sun)傷，並(bing)去(qu)除(chu)多余的(de)脂肪(fang)、結(jie)締組織(zhi)等(deng)非目的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預冷的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以(yi)去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便後(hou)續(xu)消化。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消化：將(jiang)剪碎的(de)組(zu)織(zhi)塊放入(ru)含(han)有適量消化酶的離(li)心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床或(huo)培養(yang)箱(xiang)中消化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期間可輕(qing)輕(qing)搖晃離(li)心管(guan)，使消化更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組織(zhi)塊大(da)部分被消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入含血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液以(yi)適當(dang)的轉(zhuan)速離(li)心，收集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每天(tian)用倒置顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長狀(zhuang)態、密(mi)度(du)等(deng)，記錄細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情(qing)況，如發現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染或(huo)異常，及時(shi)采取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數與(yu)活力檢測：在(zai)需(xu)要時(shi)，可采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色(se)等方(fang)法(fa)對細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計數和(he)活力檢測，以(yi)了解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況和(he)健(jian)康狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快速操(cao)作

- 組織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立即處(chu)理，避免(mian)長時(shi)間暴(bao)露(lu)於室溫或(huo)非(fei)營養(yang)環境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消化酶選擇

- 根(gen)據組織(zhi)類(lei)型選擇(ze)消化酶，避免(mian)過度(du)消化導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通(tong)常 10-30 分鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培養(yang)基(ji)選擇

- 使用含血(xue)清(qing)或(huo)特定生長(chang)因子(zi)的培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加胰島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻繁(fan)更換(huan)培養(yang)基(ji)品牌或(huo)批(pi)次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應(ying)壓(ya)力。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁能力較(jiao)弱，可能需(xu)要包被培養(yang)皿(min)（如膠原蛋白、多聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密度(du)建議(yi)控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會(hui)導致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分化。

三、汙(wu)染控(kong)制

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈臺操(cao)作，使用壹次性耗材(cai)，避免(mian)交叉汙(wu)染。

- 培養(yang)基(ji)中可添(tian)加雙(shuang)抗，但長期使用可能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支原體檢測

- 定期檢測支原體汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及時(shi)丟棄細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每天(tian)檢查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更換(huan)培養(yang)基(ji)（通常每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常形(xing)態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多）可能提(ti)示汙(wu)染或(huo)營養(yang)不足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原代細(xi)胞(bao)分裂次數有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍存(cun)早(zao)期代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培養(yang)基(ji)），梯度降(jiang)溫後液(ye)氮保(bao)存(cun)。