【概要(yao)描述(shu)】大(da)鼠(shu)小(xiao)腸(chang)黏膜上皮細(xi)胞(bao)公司(si)正在(zai)出售的(de)產品(pin)：LU99A非小(xiao)細(xi)胞(bao)肺(fei)癌(ai)兔(tu)鞏(gong)膜上皮細(xi)胞(bao)兔牙齦(yin)成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)兔結(jie)膜囊(nang)成纖維(wei)細胞(bao)兔牙齦(yin)上皮細(xi)胞(bao)兔鞏(gong)膜成纖維(wei)細胞(bao)兔視(shi)網膜微血管周細胞(bao)兔鼻腔粘膜上皮細(xi)胞(bao)兔眼(yan)外肌成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)兔視(shi)網膜神經(jing)節細胞(bao)

本(ben)公司(si)所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供科學(xue)實驗，不做其他(ta)科學(xue)實驗外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

大(da)鼠(shu)小(xiao)腸(chang)黏膜上皮分(fen)離自小(xiao)腸(chang)組織；小(xiao)腸(chang)位(wei)於(yu)腹中，上端接幽(you)門(men)與胃(wei)相(xiang)通(tong)，下(xia)端通(tong)過(guo)闌(lan)門(men)與大腸(chang)相連，是(shi)食物(wu)消化吸收(shou)的(de)主要(yao)場(chang)所(suo)。小(xiao)腸(chang)盤曲(qu)於(yu)腹腔(qiang)內，上連胃(wei)幽(you)門(men)，下(xia)接盲腸(chang)，分(fen)為(wei)十(shi)二(er)指(zhi)腸(chang)、空腸(chang)和回腸(chang)三部(bu)分(fen)。小(xiao)腸(chang)內消化是(shi)至關重要(yao)的(de)，因為(wei)食(shi)物經過小(xiao)腸(chang)內胰(yi)液、膽汁(zhi)和小(xiao)腸(chang)液的(de)化學(xue)性消化及(ji)小(xiao)腸(chang)運動(dong)的(de)機械(xie)性消化後(hou)，基本(ben)上完(wan)成了消化過程(cheng)，同時營養(yang)物質被小(xiao)腸(chang)粘膜吸收(shou)了。小(xiao)腸(chang)管壁(bi)由粘(zhan)膜、粘膜下層(ceng)、肌層(ceng)和漿(jiang)膜構成(cheng)。其(qi)結(jie)構特點(dian)是(shi)管壁(bi)有(you)環形(xing)皺(zhou)襞(bi)，粘(zhan)膜有(you)許(xu)多(duo)絨(rong)毛，絨(rong)毛根部(bu)的(de)上皮下(xia)陷至(zhi)固有(you)層(ceng)，形(xing)成(cheng)管(guan)狀(zhuang)的(de)腸(chang)腺，其(qi)開口位(wei)於(yu)絨(rong)毛根部(bu)之(zhi)間。絨(rong)毛和腸(chang)腺與小(xiao)腸(chang)的(de)消化和吸收(shou)功能關系密(mi)切(qie)；構(gou)成(cheng)腸(chang)腺的(de)細胞(bao)有(you)柱(zhu)狀(zhuang)細胞(bao)、杯(bei)狀(zhuang)細胞(bao)、潘(pan)氏(shi)細(xi)胞(bao)和未(wei)分(fen)化細胞(bao)。柱(zhu)狀(zhuang)細胞(bao)和內分(fen)泌(mi)細胞(bao)與絨(rong)毛上皮相(xiang)似(si)，接近絨(rong)毛的(de)柱(zhu)狀(zhuang)細胞(bao)與吸收(shou)細胞(bao)相似(si)，絨(rong)毛深(shen)部(bu)的(de)柱(zhu)狀(zhuang)細胞(bao)微絨(rong)毛少而(er)短，不形(xing)成(cheng)紋(wen)狀(zhuang)緣。小(xiao)腸(chang)有(you)三種功能即消化、吸收(shou)和分(fen)泌(mi)及(ji)運動功能，其中以(yi)吸收(shou)和分(fen)泌(mi)功能(neng)為(wei)主。平滑肌細(xi)胞(bao)的(de)收縮(suo)是(shi)負責(ze)腸(chang)蠕動(dong)的(de)動力(li)，促(cu)使(shi)食物(wu)向下運動。腸(chang)黏膜上皮細(xi)胞(bao)是(shi)機體內外(wai)環境(jing)的(de)重要(yao)屏(ping)障(zhang)，持續暴露(lu)於大量抗(kang)原(yuan)中，也(ye)是(shi)機體面(mian)對病原(yuan)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)道防線(xian)。因(yin)此，腸(chang)黏膜上皮細(xi)胞(bao)除(chu)有(you)吸收(shou)、分(fen)泌(mi)和轉運等重要(yao)生(sheng)理(li)功(gong)能(neng)之(zhi)外(wai)，在(zai)黏膜先天(tian)性和獲得性免疫(yi)防(fang)禦機制(zhi)中也(ye)起(qi)著重要(yao)作用(yong)。腸(chang)黏膜上皮細(xi)胞(bao)作為(wei)首先接觸(chu)抗原(yuan)的(de)細胞(bao)，在(zai)黏膜免疫(yi)反應(ying)的(de)起始(shi)階(jie)段發揮(hui)關鍵(jian)作用(yong)，它決定(ding)黏膜免疫(yi)反應(ying)的(de)發生(sheng)、性質和強(qiang)度。
方法簡介：

公司(si)實驗室(shi)分(fen)離的(de)大鼠(shu)小(xiao)腸(chang)黏膜上皮采(cai)用(yong)先機械(xie)分(fen)離法、後(hou)膠原(yuan)酶(mei)消化法並(bing)通(tong)過(guo)上皮細(xi)胞(bao)專用(yong)培養(yang)基(ji)培養(yang)篩(shai)選制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗室(shi)分(fen)離的(de)大鼠(shu)小(xiao)腸(chang)黏膜上皮經(jing)Cytokeratin-18免疫(yi)熒光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可達90%以(yi)上，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵母和真菌等。

包(bao)被條件 鼠(shu)尾膠(jiao)原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液壹次(ci)

生(sheng)長特性 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 上皮細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特性 可傳1-2代(dai)

消化液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養(yang)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實驗器(qi)材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管、離心管(guan)、手術器械(xie)等(deng)，並(bing)進(jin)行高壓滅(mie)菌或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)消毒處理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購買合(he)適的(de)培養(yang)基(ji)、消化酶（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確保其無菌且在(zai)有(you)效期內。

3. 實驗動(dong)物(wu)或組織來(lai)源準(zhun)備(bei)：根(gen)據實驗需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適的(de)動物(wu)並(bing)進(jin)行相應(ying)的(de)麻醉或處(chu)死，獲(huo)取所(suo)需(xu)組(zu)織；或(huo)從已(yi)有(you)的(de)組織樣(yang)本(ben)庫(ku)中獲(huo)取組織。

取材與處理(li)

1. 取材：在(zai)無菌條件下，迅(xun)速(su)取出目(mu)標(biao)組(zu)織，盡(jin)量減(jian)少對組織的(de)損傷(shang)，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余(yu)的(de)脂肪、結(jie)締(di)組織等(deng)非目的(de)組織。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取出的(de)組織用(yong)預冷(leng)的(de)無菌PBS沖洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去除(chu)血液和雜(za)質。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離

1. 消化：將(jiang)剪碎的(de)組織塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適量消化酶的(de)離心管(guan)中，在(zai)37℃恒溫搖床或培養(yang)箱(xiang)中消化壹段時間。期間可輕輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管(guan)，使(shi)消化更均勻。

2. 終(zhong)止消化：當組織塊(kuai)大部(bu)分(fen)被(bei)消化成單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加入(ru)含(han)血清的(de)培養(yang)基(ji)終止(zhi)消化。

3. 過(guo)濾與離心：用(yong)細胞(bao)篩過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除(chu)未(wei)消化的(de)組織碎片，然後(hou)將(jiang)濾液以(yi)適當的(de)轉速(su)離心，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)：每天(tian)用(yong)倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長狀(zhuang)態、密(mi)度等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的(de)變化情況(kuang)，如(ru)發現細(xi)胞(bao)汙染或異常(chang)，及(ji)時采取相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計數(shu)與活力(li)檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可采用(yong)臺盼藍(lan)染色(se)等方法對細胞(bao)進行計數(shu)和活力(li)檢(jian)測(ce)，以(yi)了解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長情況(kuang)和健(jian)康狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材與分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組(zu)織取材後(hou)需(xu)立即處(chu)理(li)，避(bi)免長時間暴露(lu)於室溫或(huo)非營養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)組(zu)織，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質。

2. 消化酶選擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織類(lei)型(xing)選擇(ze)消化酶，避(bi)免過(guo)度消化導致細(xi)胞(bao)損傷。

- 消化時間需(xu)嚴(yan)格控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)解(jie)離狀(zhuang)態。

二(er)、培養(yang)條件優化

1. 培養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清或特定(ding)生(sheng)長因子(zi)的(de)培養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加胰島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁(fan)更換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少細(xi)胞(bao)適應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能需(xu)要(yao)包(bao)被培養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原(yuan)蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨酸）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建議(yi)控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導致接觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分(fen)化。

三、汙染控制(zhi)

1. 無菌操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺(tai)操作，使(shi)用(yong)壹次(ci)性耗材，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培養(yang)基(ji)中可添加雙抗，但(dan)長期使(shi)用(yong)可能影響細胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及(ji)時丟棄細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密(mi)度及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時更換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹次(ci)）。

- 異常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎片增(zeng)多(duo)）可能提(ti)示汙(wu)染或營養(yang)不足。

2. 傳代(dai)與凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂(lie)次(ci)數有(you)限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時凍存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍存(cun)液建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清（或專用(yong)凍存(cun)培養(yang)基(ji)），梯度降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存(cun)。