【概要(yao)描(miao)述(shu)】兔抗(kang)大(da)鼠(shu)IgG免(mian)疫(yi)血清抗(kang)體,抗(kang)體種類,多種(zhong)試(shi)劑現貨供(gong)應!

兔抗(kang)大(da)鼠(shu)IgG免(mian)疫(yi)血清抗(kang)體*,兔抗(kang)大(da)鼠(shu)IgG免(mian)疫(yi)血清抗(kang)體用於免疫(yi)組(zu)化實(shi)驗，WB實(shi)驗，相應(ying)的(de)標記(ji)抗(kang)體有(you)HRP標(biao)記(ji)抗(kang)體，FITC標記(ji)，BIO等。

【貯存條件(jian)】： 貯存(cun)於-20℃. 本(ben)品應(ying)在低溫(wen)下(xia)保(bao)存(cun)，長時間(jian)在暴(bao)露(lu)在空氣(qi)中(zhong)，含(han)量(liang)會有(you)所(suo)降低。

規格：0.5ml

材料和方法

　　. 材料 人(ren)成(cheng)骨(gu)肉(rou)瘤(liu)MG63細(xi)胞為本(ben)實(shi)驗室(shi)保存(cun)。重組(zu)質(zhi)粒(li)MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以及recombinant cofilinHis6由王巖(yan)教(jiao)授(shou)惠贈(zeng)。脂質(zhi)體 2000( Invitrogen公司)。高糖(tang)DMEM培養基(ji)(美(mei)國(guo)Gibco 公(gong)司)，胎牛(niu)血清(Hyclone公司)，*和EDTA(Sigma 公司)。A2387，KN93，CaM，重組(zu)Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain，Calbiochem)。抗(kang)體：Myc (9E0;Roche)，HA (3F0;Roche)，Pcofilin，Cofilin(Santa Cruz)， CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.)，PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免疫共(gong)沈(chen)澱(dian)(Protein Gagarose)試(shi)劑盒(邁(mai)晨科(ke)技有(you)限(xian)公司)。

　　.2 蛋白(bai)印跡(ji)實驗 MG63細(xi)胞鋪於35 mmol/L培養皿(min)中(zhong)，待細(xi)胞密度(du)達(da)到(dao)60%～70%時，轉染(ran)MycSSHL，48 h後換(huan)無(wu)血清培養基(ji)培養3 h，分(fen)別加入(ru)濃度(du)為0.5，，2.5，5 μmol/L的(de)A2387孵育(yu)0 min後裂(lie)解(jie)細胞，離心(xin)取(qu)上清加入(ru)凝膠(jiao)加樣(yang)緩(huan)沖(chong)液(ye),沸(fei)水浴(yu)上加(jia)熱5 min，上樣(yang)、電(dian)泳、轉膜(mo)、雜(za)交(jiao)〔壹抗(kang)分別為Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯色。

　　.3 體外激酶(mei)測定(ding) MycSSHL(WT)及其(qi)突(tu)變(bian)體MycSSHL(2 SA)分別轉染(ran)至(zhi)MG63細胞，48 h後采用免(mian)疫共(gong)沈(chen)澱(dian)(Protein Gagarose)試(shi)劑盒的(de)方(fang)法及抗(kang)cmyc抗(kang)體，對(dui)照組(zu)為抗(kang)IgG抗(kang)體。回收(shou)MycSSHL，加入0.6 μg/ml重組(zu)活(huo)性CaMKⅡ(單獨(du)或(huo)同(tong)時加入(ru)抑制(zhi)劑(ji)KN93)以及00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 於 20 μl 激酶(mei)反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)中(zhong)，30℃反(fan)應(ying)40 min。反(fan)應(ying)產(chan)物(wu)進行(xing)SDSPAGE電(dian)泳、轉膜(mo)，應(ying)用(yong)放射自(zi)顯(xian)影技術檢測32P 標記(ji)的(de)SSHL水平。

　　.4 體外SSHL磷酸(suan)酶(mei)活(huo)性測(ce)定實(shi)驗 MycSSHL(WT)或(huo)MycSSHL (2 SA)轉(zhuan)染(ran)至(zhi)MG63細胞，48 h後，采用免(mian)疫共(gong)沈(chen)澱(dian)(Protein Gagarose)試(shi)劑盒的(de)方(fang)法及抗(kang)cmyc抗(kang)體，對(dui)照組(zu)為抗(kang)IgG抗(kang)體。回收(shou)MycSSHL，加入0.6 μg/ml CaMKⅡ(單獨(du)或(huo)同(tong)時加入(ru)抑制(zhi)劑(ji)KN93)，20 μg/ml CaM，以及 6.3 μg/ml cofilinHis6 於 20 μl 反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)(50 mol/L HEPES，pH 7.4，0. mol/L CaCl2，0.5 mol/L EDTA，3 mol/L MgCl2，00 mmol/L NaCl， mol/L dithiothreitol，0.5 mg/ml BSA， μg/ml leupeptin),中(zhong)30℃反(fan)應(ying)2 h。反(fan)應(ying)產(chan)物(wu)進行(xing)SDSPAGE電(dian)泳、轉膜(mo)、雜(za)交(jiao)(壹抗(kang)分別為Pcofilin，Cofilin， cmyc 抗(kang)體)、ECL顯色。

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兔抗(kang)人(ren)突(tu)觸素多(duo)克隆(long)抗(kang)體    Synaptophysin        小鼠環磷酸(suan)鳥(niao)苷(gan)cGMP抗(kang)體    0.5ml
48    鼠抗(kang)人(ren)突(tu)觸素單克(ke)隆(long)抗(kang)體    Synaptophysin(SY)      小鼠*ACsA抗(kang)體    0.5ml
482    兔抗(kang)人(ren)突(tu)觸素多(duo)克隆(long)抗(kang)體    Synaptophysin(SY)       小鼠*ACsA抗(kang)體    0.5ml
    小鼠還(hai)原(yuan)型GSH抗(kang)體     0.5ml
483    鼠抗(kang)人(ren)Tau蛋(dan)白(bai)單克(ke)隆(long)抗(kang)體    Tau Protein        小鼠紅細胞生(sheng)成素EPO抗(kang)體    0.5ml
484    鼠抗(kang)人(ren)omerase(Catalytic Unit)單克(ke)隆(long)抗(kang)體    omerase(Catalytic Unit)        小鼠橫(heng)紋(wen)肌(ji)輔肌動(dong)蛋(dan)白(bai)α sm Actinin-α抗(kang)體    0.5ml
485    鼠抗(kang)人(ren)肌(ji)腱蛋白(bai)單克(ke)隆(long)抗(kang)體    Tenascin(TN)       小鼠黑色素細(xi)胞抗(kang)體MC Ab抗(kang)體    0.5ml
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487    鼠抗(kang)人(ren)末(mo)端脫氧核苷(gan)酸(suan)轉移(yi)酶(mei)單克(ke)隆(long)抗(kang)體    Terminal Deoxynucleotidyl Transferase