【概(gai)要描述(shu)】鼠抗單克(ke)隆抗體(ti) Luteinizing Hormone(LH) Western Blot)是將蛋白(bai)質(zhi)轉(zhuan)移到(dao)膜上(shang)，然(ran)後(hou)利用(yong)抗(kang)體(ti)進行檢測(ce)。

鼠抗單克(ke)隆抗體(ti) Luteinizing Hormone（LH）  Western Blot技術(shu):

495 鼠抗人(ren)促(cu)甲(jia)狀(zhuang)腺素(su)單克(ke)隆抗體(ti) Thyroid Stimulating Hormone （TSH）
LOP496 鼠抗人(ren)金屬(shu)蛋白(bai)酶(mei)組織(zhi)抑制(zhi)因(yin)子單克(ke)隆抗體(ti) TIMP-
LOP497 鼠抗人(ren)金屬(shu)蛋白(bai)酶(mei)組織(zhi)抑制(zhi)因(yin)子2單克(ke)隆抗體(ti) TIMP-2
LOP498 鼠抗人(ren)拓(tuo)撲(pu)異構(gou)酶(mei)Ⅱα單克(ke)隆抗體(ti) Topoisomerase II α
LOP499 鼠抗人(ren)TRA cP單克(ke)隆抗體(ti) TRAcP
LOP500 鼠抗人(ren)轉(zhuan)化生(sheng)長(chang)因(yin)子α單克(ke)隆抗體(ti) Transforming Growth Factor α
LOP50 兔(tu)抗人轉(zhuan)化生(sheng)長(chang)因(yin)子β多克隆抗體(ti) Transforming Growth Factor β
LOP502 兔(tu)抗人轉(zhuan)化生(sheng)長(chang)因(yin)子β2多克隆抗體(ti) Transforming Growth Factor β2

鼠抗單克(ke)隆抗體(ti) Luteinizing Hormone（LH）LOP503 兔(tu)抗人轉(zhuan)化生(sheng)長(chang)因(yin)子β3多克隆抗體(ti) Transforming Growth Factor β3
LOP504 鼠抗人(ren)轉(zhuan)谷酰(xian)氨(an)酶(mei)II單克(ke)隆抗體(ti) TransglutaminaseII（TGaseII） 壹(yi)、 原理

與Southern或Northern雜交方(fang)法類似，但Western Blot采用的(de)是聚丙烯酰胺(an)凝膠(jiao)電泳，被檢測(ce)物(wu)是蛋白(bai)質(zhi)，“探針”是抗體，“顯(xian)色”用標記(ji)的二(er)抗。經(jing)過(guo)PAGE分離的(de)蛋白(bai)質(zhi)樣品(pin)，轉(zhuan)移到(dao)固(gu)相(xiang)載體（例(li)如硝(xiao)#纖維(wei)素(su)薄膜）上，固(gu)相(xiang)載體以(yi)非(fei)共價鍵(jian)形式(shi)吸(xi)附蛋白(bai)質(zhi)，且能保(bao)持(chi)電泳分離(li)的多肽(tai)類型(xing)及(ji)其(qi)生物(wu)學(xue)活(huo)性(xing)不(bu)變(bian)。以(yi)固(gu)相(xiang)載體上(shang)的蛋白(bai)質(zhi)或多肽(tai)作為(wei)抗(kang)原(yuan)，與(yu)對應的抗體起(qi)免疫反(fan)應，再與酶(mei)或同(tong)位(wei)素(su)標記的第二(er)抗體(ti)起(qi)反(fan)應，經(jing)過(guo)底物(wu)顯(xian)色或放射自(zi)顯(xian)影(ying)以(yi)檢測(ce)電(dian)泳分離(li)的特異性(xing)目(mu)的(de)基因表達的(de)蛋白(bai)成分。該(gai)技術(shu)也(ye)廣(guang)泛應用於檢測(ce)蛋白(bai)水(shui)平的表(biao)達。

二(er)、分類(lei) Luteinizing Hormone（LH） 現常(chang)用(yong)的有(you)底物(wu)化(hua)學(xue)發光(guang)ECL和底物(wu)DAB呈色，體(ti)同(tong)水(shui)平和實驗條件(jian)的(de)是用*種方(fang)法，目(mu)前發表文章(zhang)通常(chang)是用底物(wu)化(hua)學(xue)發光(guang)ECL。只(zhi)要買(mai)現成的試(shi)劑盒(he)就(jiu)行，操(cao)作(zuo)也(ye)比較(jiao)簡(jian)單，原(yuan)理如下(xia)（二(er)抗用(yong)HRP標記）：反應底物(wu)為(wei)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)+魯米(mi)諾(nuo)，如遇(yu)到(dao)HRP，即發光(guang)，可(ke)使(shi)膠(jiao)片(pian)曝光(guang)，就(jiu)可(ke)洗出條帶(dai)。

三(san)、 主(zhu)要試劑

、 丙烯酰胺(an)和N，N’-亞甲(jia)雙丙烯酰胺(an)，應以(yi)溫(wen)熱(re)（以(yi)利(li)於(yu)溶(rong)解雙丙稀酰(xian)胺(an)）的去離(li)子水配制(zhi)含(han)有(you)29%（w/v）丙稀酰(xian)胺(an)和%（w/v）N，N’-亞甲(jia)雙丙烯酰胺(an)儲存(cun)液(ye)丙稀酰(xian)胺(an)29g，N，N-亞甲(jia)叉(cha)雙丙稀酰(xian)胺(an)g，加H2O至(zhi) 00ml。）儲於棕色瓶(ping)，4℃避光(guang)保(bao)存(cun)。嚴格(ge)核(he)實PH不得超過(guo)7.0，因可以(yi)發生脫(tuo)氨(an)基(ji)反(fan)應是光(guang)催(cui)化(hua)或堿催(cui)化(hua)的。使(shi)用(yong)期(qi)不(bu)得(de)超過(guo)兩個(ge)月(yue)，隔(ge)幾(ji)個(ge)月(yue)須重新(xin)配制(zhi)。如(ru)有(you)沈(chen)澱，可以(yi)過(guo)濾(lv)。 Luteinizing Hormone（LH） 2、 十二(er)烷基(ji)硫(liu)#鈉SDS溶(rong)液(ye):0%（w/v）0.gSDS，mlH2O去離(li)子水配制(zhi)，室(shi)溫(wen)保(bao)存(cun)。

3、 分離膠(jiao)緩沖液(ye):.5mmol/L Tris-HCl （pH8.8）:8.5gTris和48mlmol/L HCl 混(hun)合(he)，加水稀釋(shi)到(dao)00ml終(zhong)體(ti)積(ji)。過(guo)濾(lv)後(hou)40℃保(bao)存(cun)。

4、 濃縮(suo)膠緩(huan)沖(chong)液(ye):0.5mmol/L Tris-HCl （pH6.8）:6.05gTris溶(rong)於40mlH2O中，用約(yue)48ml mol/L HCl調至(zhi)pH6.8加水稀釋(shi)到(dao)00ml終(zhong)體(ti)積(ji)。過(guo)濾(lv)後(hou)40C保(bao)存(cun)。這兩種(zhong)緩(huan)沖液(ye)必(bi)須使(shi)用(yong)Tris堿制(zhi)備(bei)，再(zai)用(yong)HCL調節(jie)PH值，而(er)不用 Tris.CL。

5、 TEMED原溶(rong)液(ye)N，N，N’N’四甲(jia)基(ji)乙(yi)二(er)胺(an)催(cui)化(hua)過(guo)硫(liu)#銨(an)形成自(zi)由(you)基(ji)而(er)加速兩種(zhong)丙稀酰(xian)胺(an)的聚合(he)。PH太低時(shi)，聚(ju)合(he)反應受到(dao)抑制(zhi)。0%（w/v）過(guo)硫(liu)#胺(an)溶(rong)液(ye)。提供兩種(zhong)丙稀酰(xian)胺(an)聚合(he)所(suo)必須的自(zi)由(you)基(ji)。去離(li)子水配制(zhi)數(shu)ml，臨用前配制(zhi).

6、 SDS- PAGE加樣緩沖液(ye):pH6.8 0.5mol/L Tris緩沖液(ye)8ml，甘油6.4ml，0%SDS 2.8ml，巰(qiu)基(ji)乙醇(chun)3.2ml，0.05%溴酚(fen)藍.6ml，H2O 32ml混(hun)勻(yun)備用(yong)。按(an):或:2比例(li)與蛋白(bai)質(zhi)樣品(pin)混(hun)合(he)，在沸水終(zhong)煮(zhu)3min混(hun)勻(yun)後(hou)再上(shang)樣(yang)，壹(yi)般為(wei)20-25ul，總蛋白(bai)量(liang)00μg。

7、 Tris-甘氨(an)#電泳緩沖(chong)液(ye):30.3gTris，88g甘氨(an)#，0gSDS，用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)溶(rong)解至(zhi)000ml，得0.25mol/L Tris-.92mol/L甘氨(an)#電極緩(huan)沖液(ye)。臨(lin)用前稀釋(shi)0倍(bei)。

8、 轉(zhuan)移緩(huan)沖(chong)液(ye)：配制(zhi)L轉(zhuan)移緩(huan)沖(chong)液(ye)，需(xu)稱(cheng)取(qu)2.9g甘氨(an)#、5.8gTris堿、0.37g SDS，並(bing)加入200ml甲(jia)醇(chun)，加水至(zhi)總(zong)量(liang)L。

9、 麗春(chun)紅(hong)染液(ye)儲存(cun)液(ye)：麗春(chun)紅(hong)S 2g 三#乙#30g 磺基水(shui)楊# 30g 加水至(zhi)00ml 用時上(shang)述儲存(cun)液(ye)稀釋(shi)0倍(bei)即成麗春(chun)紅(hong)S使(shi)用(yong)液(ye)。使(shi)用(yong)後(hou)應予以(yi)廢(fei)棄。

0、 脫(tuo)脂奶粉5%（w/v）。

、 NaN3 0.02% 疊(die)氮(dan)鈉（有(you)毒(du)，戴手(shou)套操(cao)作(zuo)），溶(rong)於磷(lin)#緩沖鹽(yan)溶(rong)液(ye)（PBS）。

2、 Tris緩沖鹽(yan)溶(rong)液(ye)（TBS）:20mmol/LTris/HCl（pH7.5），500mmol/LnaCl。

3、 Tween20（5）鼠抗人(ren)-MMP-9（6）鼠抗人(ren)-TIMP-。

4、 過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)標記的第二(er)抗體(ti)。

5、 NBT（溶(rong)於70%二(er)甲(jia)基(ji)甲(jia)酰(xian)胺(an)，75mg/ml）。

6、 BCIP（溶(rong)於00%二(er)甲(jia)基(ji)甲(jia)酰(xian)胺(an)，50mg/ml）。

7、 00mmol/LTris-HCl（pH9.5）。

8、 00mmol/L NaCl。

9、 50mmol/LTris-HCl（pH7.5），5mmol/L EDTA。