【概(gai)要描(miao)述(shu)】雞(ji)腎(shen)小管上(shang)皮細胞(bao)的(de)相關產品：NCI-H3255人肺(fei)癌(ai)細胞(bao)人(ren)原代下(xia)腔(qiang)靜脈(mai)外(wai)膜(mo)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)人(ren)原代喉(hou)黏膜上(shang)皮細胞(bao)人(ren)原代頸靜脈(mai)球(qiu)瘤(liu)細胞(bao)綿羊(yang)原代II型(xing)肺(fei)泡上(shang)皮細胞(bao)兔(tu)原代鼓(gu)膜上(shang)皮幹(gan)細胞(bao)大(da)鼠(shu)原代腦(nao)血管周(zhou)細胞(bao)大(da)鼠(shu)原代真皮(pi)毛乳(ru)頭細胞(bao)小鼠原代骨(gu)膜幹(gan)細胞(bao)人(ren)原代增(zeng)生(sheng)性瘢痕(hen)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)

雞(ji)腎(shen)小管上(shang)皮細胞(bao)

包被條件(jian) 鼠(shu)尾膠(jiao)原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率 每(mei)2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特性 貼(tie)壁

細胞(bao)形(xing)態(tai) 上(shang)皮細胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代特性 可傳(chuan)1代

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

雞(ji)腎(shen)小管上(shang)皮分(fen)離自腎組織；腎(shen)臟(zang)是機體(ti)的(de)重要器(qi)官，它的(de)基本(ben)功(gong)能(neng)是生(sheng)成尿液(ye)，借以(yi)清除體(ti)內(nei)代謝(xie)產物(wu)及(ji)某些(xie)廢(fei)物(wu)、毒(du)物(wu)，同(tong)時(shi)經(jing)重(zhong)吸(xi)收(shou)功(gong)能(neng)保留水(shui)份及(ji)其(qi)他(ta)有(you)用(yong)物(wu)質(zhi)，如(ru)葡(pu)萄(tao)糖、蛋白(bai)質(zhi)、氨基酸(suan)、鈉(na)離子、鉀(jia)離(li)子(zi)、碳(tan)suan氫(qing)鈉(na)等，以(yi)調(tiao)節(jie)水(shui)、電(dian)解質(zhi)平衡及(ji)維(wei)護酸(suan)堿平衡(heng)。腎(shen)臟同時(shi)還(hai)有(you)內分泌功(gong)能(neng)，生(sheng)成腎(shen)素、促(cu)紅細胞(bao)生(sheng)成素(su)、活(huo)性維(wei)生(sheng)D3、前列(lie)腺素、激肽等，又(you)為(wei)機體部(bu)分(fen)內分泌激(ji)素的(de)降解場(chang)所和(he)腎外(wai)激(ji)素(su)的(de)靶器(qi)官。腎(shen)臟的(de)這些(xie)功(gong)能(neng)，保證了(le)機(ji)體內環(huan)境的(de)穩定(ding)，使(shi)新陳代謝(xie)得以(yi)正常(chang)進行(xing)。腎(shen)小管是機體(ti)腎(shen)臟器(qi)官上(shang)與(yu)腎(shen)小囊壁層(ceng)相(xiang)連的(de)壹(yi)條細長(chang)上(shang)皮性小管，具(ju)有(you)重吸收(shou)（reabsorption）和(he)排(pai)泌作(zuo)用(yong)。腎小管按不(bu)同(tong)的(de)形態(tai)結構、分(fen)布(bu)位(wei)置(zhi)和(he)功(gong)能(neng)分(fen)成近(jin)端小管、髓袢(pan)和(he)遠端小管三部(bu)分(fen)；近端小管可(ke)分為直(zhi)部(bu)和(he)曲(qu)部(bu)，曲(qu)部(bu)也(ye)稱(cheng)為(wei)近(jin)曲(qu)小管，位(wei)於皮(pi)質(zhi)迷(mi)路內(nei)，於腎(shen)小體附近高(gao)度蟠曲(qu)；遠(yuan)端小管曲(qu)部(bu)也(ye)稱(cheng)為(wei)遠(yuan)曲(qu)小管，位(wei)於皮(pi)質(zhi)迷(mi)路內(nei)。腎小管上(shang)皮細胞(bao)是腎小管外(wai)面(mian)的(de)壹(yi)層(ceng)細胞(bao)，腎(shen)小管上(shang)皮細胞(bao)的(de)分離、培養(yang)是研(yan)究腎(shen)臟(zang)疾(ji)病(bing)的(de)壹(yi)項(xiang)重(zhong)要技術，目(mu)前該(gai)分(fen)離(li)方法(fa)有(you)酶分離法(fa)、化(hua)學分(fen)離法(fa)篩網(wang)分(fen)離(li)法(fa)、顯微解剖(pou)分(fen)離法(fa)、流式(shi)細胞(bao)儀分離法(fa)等。腎小管上(shang)皮細胞(bao)主(zhu)要(yao)功(gong)能(neng)：①腎(shen)小管上(shang)皮細胞(bao)重(zhong)吸(xi)收(shou)原尿中幾乎全(quan)部的(de)葡(pu)萄(tao)糖和(he)氨基酸(suan)；②排(pai)泌非(fei)營(ying)養物(wu)質(zhi)進入終尿；③細胞(bao)能(neng)分(fen)泌炎(yan)癥介質(zhi)如(ru)細胞(bao)因子和(he)趨化(hua)因子，通(tong)過(guo)產生(sheng)IL-8或直(zhi)接(jie)趨化(hua)白細胞(bao)參(can)與(yu)急(ji)性炎(yan)癥反(fan)應；④移植腎炎(yan)癥和(he)新月體(ti)腎炎(yan)中PTEpiC表(biao)達(da)IL-2R和(he)MHC-Ⅱ類(lei)抗原，這說(shuo)明腎(shen)小管上(shang)皮細胞(bao)參(can)與(yu)腎(shen)免(mian)疫損(sun)傷的(de)發(fa)生(sheng)。隨(sui)著對(dui)腎間(jian)質(zhi)纖維(wei)化(hua)機制(zhi)研(yan)究的(de)日漸加(jia)深(shen)，腎小管上(shang)皮細胞(bao)（RTECs）在(zai)其(qi)中的(de)作(zuo)用(yong)日益(yi)被人們(men)重(zhong)視。因此(ci)，提(ti)供(gong)良(liang)好(hao)的(de)腎小管上(shang)皮細胞(bao)模(mo)型(xing)，在(zai)腎(shen)小管間(jian)質(zhi)疾病(bing)的(de)發(fa)病(bing)機制(zhi)和(he)治療藥(yao)物(wu)篩(shai)選的(de)研(yan)究中是非(fei)常(chang)重要(yao)的(de)
方法(fa)簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)雞(ji)腎(shen)小管上(shang)皮采(cai)用(yong)篩網(wang)過(guo)濾、膠(jiao)原酶消化(hua)法(fa)結合差(cha)速(su)貼(tie)壁法(fa)，並通過(guo)上(shang)皮細胞(bao)專(zhuan)用(yong)培養(yang)基(ji)培養(yang)篩(shai)選制(zhi)備而(er)來，細胞(bao)總量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分離(li)的(de)雞(ji)腎(shen)小管上(shang)皮經(jing)Cytokeratin-18免(mian)疫熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細菌、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌(jun)等。

壹(yi)、細胞(bao)培養(yang)

1取材 在無菌環境下從機體(ti)取出某種(zhong)組織(zhi)細胞(bao)（視實驗(yan)目(mu)的(de)而定(ding)），經(jing)過(guo)壹(yi)定(ding)的(de)處理（如(ru)消化(hua)分散(san)細胞(bao)、分(fen)離(li)等(deng)）後(hou)接(jie)入培養(yang)器(qi)血中，這壹(yi)過(guo)程稱(cheng)為取材。如(ru)是細胞(bao)株的(de)擴(kuo)大(da)培養(yang)則無取材這壹(yi)過(guo)程。機(ji)體取出的(de)組織細胞(bao)的(de)培養(yang)稱(cheng)為原代培養(yang)。2培養(yang) 將取得的(de)組織細胞(bao)接(jie)入培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)板(ban)中的(de)過(guo)程稱(cheng)為培養(yang)。3凍(dong)存及(ji)復(fu)蘇(su)（可(ke)參閱後面(mian)有(you)關章(zhang)節(jie)）為(wei)了(le)保存細胞(bao)，特別(bie)是不(bu)易(yi)獲(huo)得的(de)突(tu)變(bian)型細胞(bao)或(huo)細胞(bao)株，要(yao)將細胞(bao)凍(dong)存(cun)。凍(dong)存(cun)的(de)溫度壹(yi)般(ban)用(yong)液氮(dan)的(de)溫度－196℃，將細胞(bao)收(shou)集至凍存(cun)管中加入含保護劑(ji)（壹(yi)般(ban)為(wei)二甲亞碸(feng)或甘(gan)油(you)）的(de)培養(yang)基(ji)，以(yi)壹(yi)定(ding)的(de)冷卻(que)速(su)度凍存(cun)，最(zui)終保存於液(ye)氮(dan)中。在極低的(de)溫度下，細胞(bao)保存的(de)時(shi)間(jian)幾(ji)乎是無限(xian)的(de)。復蘇壹(yi)般(ban)采(cai)用(yong)快融(rong)方法(fa)，即從液氮(dan)中取出凍存(cun)管後(hou)，立即放入37℃水中，使之在壹(yi)分(fen)鐘(zhong)內迅(xun)速(su)融(rong)解。然後將細胞(bao)轉(zhuan)入培養(yang)器(qi)皿中進行(xing)培養(yang)。

二(er)、原代細胞(bao)分(fen)離(li)

凡是來源(yuan)於胚(pei)胎、組(zu)織器(qi)官及(ji)外(wai)周(zhou)血(xue)，經(jing)特殊(shu)分(fen)離方法(fa)制備而(er)來的(de)原初培養(yang)的(de)細胞(bao)稱(cheng)之為原代細胞(bao)。1懸(xuan)浮細胞(bao)的(de)分離方法(fa)組織材料若(ruo)來(lai)自血(xue)液、羊(yang)水、胸水(shui)或(huo)腹水(shui)的(de)懸液材料，的(de)方法(fa)是采(cai)用(yong)1000r/min的(de)低速(su)離心(xin)10分鐘(zhong)。經(jing)離心後(hou)由於各(ge)種(zhong)細胞(bao)的(de)比重(zhong)不(bu)同(tong)可(ke)在(zai)分(fen)層液中形成不(bu)同(tong)層(ceng)，這(zhe)樣(yang)可根據需(xu)要(yao)收(shou)獲(huo)目的(de)細胞(bao)。2實(shi)體(ti)組(zu)織(zhi)材料的(de)分離方法(fa)對於實(shi)體(ti)組織(zhi)材料，由於細胞(bao)間(jian)結(jie)合緊密，為了使(shi)組織中的(de)細胞(bao)充(chong)分分(fen)散(san)，形成細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，可(ke)采(cai)用(yong)機械(xie)分(fen)散(san)法(fa)（物(wu)理裂解）和(he)消化(hua)分離(li)法(fa)。

三、細胞(bao)增(zeng)殖(zhi)檢(jian)測技術

目(mu)前主(zhu)要有(you)兩種(zhong)用(yong)於檢(jian)測細胞(bao)增(zeng)殖(zhi)能力(li)的(de)方法(fa)。壹(yi)種(zhong)是直(zhi)接(jie)的(de)方法(fa)，通過(guo)直(zhi)接(jie)測定(ding)進(jin)行(xing)分(fen)裂

的(de)細胞(bao)數(shu)來(lai)評(ping)價細胞(bao)的(de)增(zeng)殖(zhi)能力(li)。另(ling)壹(yi)種(zhong)是間(jian)接(jie)的(de)方法(fa)，即細胞(bao)活(huo)力(li)（cell viability）檢(jian)測方法(fa)，通過(guo)檢(jian)測樣品中健康(kang)細胞(bao)的(de)數目來評(ping)價細胞(bao)的(de)增(zeng)殖(zhi)能力(li)。顯然，細胞(bao)活(huo)力(li)檢(jian)測法(fa)並不(bu)能(neng)最(zui)終證明檢(jian)測樣品中的(de)細胞(bao)是否在增(zeng)殖(zhi)。如(ru)細胞(bao)在(zai)某壹(yi)培養(yang)條件(jian)下會自(zi)發(fa)啟動(dong)雕亡程序，但藥(yao)物(wu)的(de)幹擾可抑制(zhi)雕(diao)亡的(de)發(fa)生(sheng)；這時(shi)若(ruo)采(cai)用(yong)細胞(bao)活(huo)力(li)檢(jian)測法(fa)，顯然可(ke)以(yi)區(qu)分兩種(zhong)條件(jian)下的(de)細胞(bao)數(shu)量(liang)，但(dan)我(wo)們(men)並不(bu)能(neng)從(cong)藥(yao)物(wu)幹(gan)擾組細胞(bao)數(shu)大(da)於對(dui)照(zhao)組的(de)事實(shi)說明(ming)藥(yao)物(wu)可(ke)促(cu)進細胞(bao)增(zeng)殖(zhi)的(de)結論。所以(yi)最(zui)直(zhi)接(jie)的(de)證據應該(gai)采(cai)用(yong)方法(fa)壹(yi)。

取材：首(shou)先(xian)，用(yong)培養(yang)液(ye)濕潤(run)所(suo)取的(de)組織材料，並用(yong)鋒利(li)的(de)眼科剪(jian)去(qu)除附(fu)在(zai)其上(shang)的(de)脂肪(fang)和(he)結締(di)組織。接(jie)著用(yong)平衡(heng)液（如(ru)PBS或Hanks液）漂(piao)洗(xi)，再用(yong)眼科彎剪(jian)將組織(zhi)塊(kuai)剪(jian)成小塊。多(duo)次用(yong)PBS或Hanks液(ye)漂(piao)洗(xi)，直(zhi)到液(ye)體(ti)清亮(liang)、無(wu)油(you)滴(di)為止。

接(jie)種(zhong)：用(yong)濕潤(run)的(de)吸管吸(xi)取切(qie)碎(sui)的(de)組織塊，輕輕吹到培養(yang)瓶(ping)皿中，並按壹(yi)定(ding)間(jian)距(ju)均勻(yun)放(fang)在(zai)培養(yang)瓶(ping)底壁上(shang)。註意不(bu)要(yao)過(guo)多(duo)，確(que)保組織(zhi)塊(kuai)切(qie)面(mian)貼(tie)在(zai)培養(yang)瓶(ping)底壁上(shang)。

培養(yang)：將培養(yang)瓶(ping)翻轉(zhuan)，使瓶底朝(chao)上(shang)，在種(zhong)植了(le)組(zu)織(zhi)塊(kuai)壹(yi)側(ce)的(de)對側面(mian)加(jia)足(zu)培養(yang)液(ye)，避免(mian)組織(zhi)塊(kuai)與(yu)培養(yang)液(ye)接(jie)觸，然(ran)後塞緊瓶塞。將種(zhong)植了(le)組(zu)織(zhi)塊(kuai)的(de)壹(yi)側(ce)朝(chao)上(shang)，靜置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中。待組織(zhi)塊(kuai)貼(tie)壁1到3小時(shi)後(hou)翻(fan)瓶(ping)，使(shi)貼(tie)壁的(de)組織塊浸(jin)沒(mei)在培養(yang)液(ye)中，繼(ji)續靜置(zhi)。換液(ye)：每(mei)隔(ge)2到3天(tian)更換壹(yi)次(ci)培養(yang)液(ye)，或者(zhe)根據培養(yang)瓶(ping)種(zhong)顏色(se)的(de)變化(hua)確(que)定(ding)換(huan)液時(shi)間(jian)。

壹(yi)、原代細胞(bao)計(ji)數

將血球(qiu)計(ji)數板(ban)及(ji)蓋(gai)片(pian)用(yong)擦試(shi)幹(gan)凈，並將蓋片(pian)蓋在(zai)計(ji)數板(ban)上(shang)。

將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)吸(xi)出少(shao)許(xu)，滴(di)加在(zai)蓋片(pian)邊(bian)緣，使懸(xuan)液充(chong)滿(man)蓋(gai)片(pian)和(he)計(ji)數板(ban)之間(jian)。

靜置(zhi)3分鐘(zhong)。

鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，計(ji)算計(ji)數板(ban)四(si)大格(ge)細胞(bao)總數(shu)，壓線(xian)細胞(bao)只(zhi)計(ji)左側(ce)和(he)上(shang)方的(de)。然後按下式(shi)計(ji)算：

細胞(bao)數(shu)/ml＝4大(da)格(ge)細胞(bao)總數(shu)/ 4×10000

註意：鏡(jing)下(xia)偶(ou)見由兩個(ge)以(yi)上(shang)細胞(bao)組(zu)成的(de)細胞(bao)團，應按單個(ge)細胞(bao)計(ji)算，若(ruo)細胞(bao)團占10%以(yi)上(shang)，說明(ming)分散(san)不(bu)好(hao)，需(xu)重(zhong)新(xin)制(zhi)備細胞(bao)懸(xuan)液(ye)。

二、原代細胞(bao)活(huo)力(li)

將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)以(yi)0.5ml加(jia)入試管中。

加(jia)入0.5ml 0.4%臺盼蘭染液，染色(se)2壹(yi)3分(fen)鐘(zhong)。

吸取少(shao)許(xu)懸液(ye)塗於載(zai)玻片(pian)上(shang)，加上(shang)蓋片(pian)。

鏡(jing)下(xia)取幾個任意視野分(fen)別計(ji)死細胞(bao)和(he)活(huo)細胞(bao)數(shu)，計(ji)細胞(bao)活(huo)力(li)。

死細胞(bao)能(neng)被臺盼蘭染上(shang)色(se)，鏡(jing)下(xia)可(ke)見深蘭色(se)的(de)細胞(bao)，活(huo)細胞(bao)不(bu)被染色(se)，鏡(jing)下(xia)呈(cheng)無(wu)色(se)透(tou)明(ming)狀(zhuang)。

活(huo)力(li)測定(ding)可(ke)以(yi)和(he)細胞(bao)計(ji)數合起來(lai)進(jin)行(xing)，但(dan)要(yao)考(kao)慮到染液對原細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)加倍(bei)稀釋作(zuo)用(yong)。