【概(gai)要描述】雞小腸黏膜上皮(pi)細(xi)胞的(de)相關(guan)產品：calu-1-luc-EGFP人肺(fei)癌細(xi)胞小鼠原代骨(gu)骼(ge)肌細(xi)胞小鼠原代心(xin)房心(xin)肌細(xi)胞人原代扁(bian)桃體(ti)間質(zhi)細(xi)胞人原代關(guan)節(jie)滑(hua)膜成(cheng)纖維細(xi)胞人原代宮頸上皮(pi)細(xi)胞人原代子(zi)宮微血(xue)管(guan)內皮(pi)細(xi)胞小鼠原代外(wai)根(gen)鞘(qiao)細(xi)胞兔(tu)原代外(wai)根(gen)鞘(qiao)細(xi)胞大(da)鼠(shu)原代陰道真(zhen)皮(pi)成(cheng)纖維細(xi)胞

雞小腸黏膜上皮(pi)細(xi)胞

包被條件 鼠尾(wei)膠(jiao)原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率 每(mei)2-3天換(huan)液壹次

生(sheng)長(chang)特性 貼(tie)壁(bi)

細(xi)胞形(xing)態(tai) 上皮(pi)細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代特性 可傳(chuan)1代

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養條件 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

雞小腸黏膜上皮(pi)分離(li)自小腸組織(zhi)；小腸位於(yu)腹中，上(shang)端接幽門(men)與(yu)胃(wei)相通(tong)，下(xia)端通過(guo)闌(lan)門(men)與(yu)大腸(chang)相連(lian)，是食(shi)物(wu)消(xiao)化(hua)吸(xi)收的(de)主(zhu)要場(chang)所。小腸盤(pan)曲(qu)於(yu)腹腔內，上連(lian)胃(wei)幽門(men)，下(xia)接盲(mang)腸(chang)，分(fen)為(wei)十(shi)二(er)指腸(chang)、空(kong)腸和回腸三部分(fen)。小腸內消(xiao)化(hua)是(shi)至關(guan)重(zhong)要的，因為食(shi)物經過(guo)小腸內胰液、膽(dan)汁(zhi)和(he)小腸液的化(hua)學性消(xiao)化(hua)及(ji)小腸運動的(de)機(ji)械性消(xiao)化(hua)後(hou)，基本(ben)上完(wan)成(cheng)了(le)消(xiao)化(hua)過(guo)程(cheng)，同時(shi)營(ying)養物質(zhi)被(bei)小腸粘膜吸收了(le)。小腸管壁由(you)粘膜、粘膜下層(ceng)、肌層(ceng)和漿(jiang)膜構(gou)成(cheng)。其結(jie)構(gou)特點(dian)是管(guan)壁有(you)環形(xing)皺襞，粘膜有(you)許多絨(rong)毛(mao)，絨(rong)毛(mao)根(gen)部的(de)上(shang)皮(pi)下陷(xian)至固(gu)有(you)層(ceng)，形成(cheng)管(guan)狀(zhuang)的(de)腸(chang)腺(xian)，其開(kai)口(kou)位(wei)於(yu)絨(rong)毛(mao)根(gen)部之(zhi)間(jian)。絨(rong)毛(mao)和(he)腸(chang)腺(xian)與小腸的消(xiao)化(hua)和(he)吸收功(gong)能(neng)關(guan)系密(mi)切(qie)；構(gou)成(cheng)腸(chang)腺(xian)的細(xi)胞有(you)柱狀(zhuang)細(xi)胞、杯(bei)狀(zhuang)細(xi)胞、潘(pan)氏細(xi)胞和(he)未(wei)分化(hua)細(xi)胞。柱(zhu)狀(zhuang)細(xi)胞和(he)內分泌(mi)細(xi)胞與(yu)絨(rong)毛(mao)上(shang)皮(pi)相似，接近(jin)絨(rong)毛(mao)的(de)柱(zhu)狀(zhuang)細(xi)胞與(yu)吸(xi)收細(xi)胞相似，絨(rong)毛(mao)深部的(de)柱(zhu)狀(zhuang)細(xi)胞微(wei)絨(rong)毛(mao)少而(er)短，不(bu)形成(cheng)紋狀緣(yuan)。小腸有(you)三種(zhong)功(gong)能(neng)即(ji)消(xiao)化(hua)、吸(xi)收和(he)分(fen)泌(mi)及(ji)運動功(gong)能(neng)，其中(zhong)以吸收和(he)分(fen)泌(mi)功能(neng)為(wei)主(zhu)。平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞的(de)收縮(suo)是負(fu)責腸蠕動的動(dong)力(li)，促使(shi)食(shi)物向(xiang)下運動。腸(chang)黏膜上皮(pi)細(xi)胞是(shi)機(ji)體內外(wai)環(huan)境的(de)重(zhong)要屏(ping)障，持續暴(bao)露於(yu)大量抗(kang)原中，也(ye)是機(ji)體(ti)面(mian)對(dui)病(bing)原微生(sheng)物(wu)的(de)道(dao)防線(xian)。因此，腸(chang)黏膜上皮(pi)細(xi)胞除(chu)有(you)吸收、分(fen)泌(mi)和(he)轉運等重(zhong)要生(sheng)理(li)功(gong)能(neng)之(zhi)外(wai)，在(zai)黏膜先天性和(he)獲得性免疫(yi)防禦(yu)機制中(zhong)也(ye)起著重(zhong)要作用(yong)。腸(chang)黏膜上皮(pi)細(xi)胞作(zuo)為(wei)首先接觸(chu)抗(kang)原的細(xi)胞，在(zai)黏膜免疫(yi)反應的(de)起始階(jie)段(duan)發(fa)揮(hui)關(guan)鍵(jian)作用(yong)，它決(jue)定(ding)黏膜免疫(yi)反應的(de)發(fa)生(sheng)、性質(zhi)和(he)強(qiang)度(du)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司實驗室分離(li)的(de)雞小腸黏膜上皮(pi)采用(yong)中(zhong)性dan白酶-膠(jiao)原酶混(hun)合消(xiao)化(hua)法(fa)結(jie)合(he)差速貼(tie)壁(bi)法(fa)，並通(tong)過(guo)上皮(pi)細(xi)胞專用(yong)培(pei)養基培養篩選(xuan)制備而(er)來(lai)，細(xi)胞總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公司實驗室分離(li)的(de)雞小腸黏膜上皮(pi)經Cytokeratin-18免疫(yi)熒(ying)光鑒定，純度(du)可達90%以上，且不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xi)菌、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

壹、細(xi)胞培(pei)養

1取(qu)材 在(zai)無(wu)菌環(huan)境下(xia)從(cong)機(ji)體取(qu)出某種(zhong)組織(zhi)細(xi)胞（視(shi)實驗目(mu)的(de)而(er)定(ding)），經過(guo)壹定的(de)處(chu)理（如消(xiao)化(hua)分(fen)散(san)細(xi)胞、分(fen)離(li)等）後(hou)接入培養器血(xue)中(zhong)，這(zhe)壹過程(cheng)稱為(wei)取(qu)材。如是(shi)細(xi)胞株的(de)擴大培養則無取(qu)材這(zhe)壹過程(cheng)。機體(ti)取(qu)出的組(zu)織(zhi)細(xi)胞的(de)培(pei)養稱為原代培(pei)養。2培養 將取(qu)得的(de)組(zu)織(zhi)細(xi)胞接入培養瓶(ping)或(huo)培養板中的過(guo)程(cheng)稱為(wei)培(pei)養。3凍(dong)存及(ji)復蘇（可參(can)閱後面(mian)有(you)關章節(jie)）為了(le)保(bao)存細(xi)胞，特別是(shi)不(bu)易(yi)獲得的突變(bian)型細(xi)胞或(huo)細(xi)胞株，要將細(xi)胞凍(dong)存。凍(dong)存的(de)溫(wen)度(du)壹般用(yong)液(ye)氮(dan)的溫度(du)－196℃，將細(xi)胞收集(ji)至(zhi)凍(dong)存管(guan)中(zhong)加入含(han)保(bao)護(hu)劑(ji)（壹般為(wei)二(er)甲亞碸或甘油(you)）的培養基，以壹定的(de)冷(leng)卻速度(du)凍(dong)存，最(zui)終(zhong)保(bao)存於(yu)液氮中(zhong)。在(zai)極(ji)低的(de)溫(wen)度(du)下(xia)，細(xi)胞保(bao)存的(de)時(shi)間幾乎(hu)是(shi)無限(xian)的。復(fu)蘇(su)壹般采用(yong)快(kuai)融方(fang)法(fa)，即(ji)從(cong)液(ye)氮中取(qu)出凍(dong)存管(guan)後(hou)，立(li)即(ji)放入37℃水(shui)中，使(shi)之(zhi)在壹分鐘(zhong)內迅(xun)速融解(jie)。然後將細(xi)胞轉(zhuan)入培養器皿(min)中進(jin)行培(pei)養。

二、原代細(xi)胞分(fen)離(li)

凡是來(lai)源於(yu)胚胎(tai)、組(zu)織(zhi)器(qi)官(guan)及(ji)外(wai)周(zhou)血(xue)，經特殊(shu)分(fen)離(li)方(fang)法(fa)制備而(er)來(lai)的(de)原初培(pei)養的細(xi)胞稱(cheng)之(zhi)為原代細(xi)胞。1懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞的(de)分(fen)離方(fang)法(fa)組織(zhi)材料(liao)若來(lai)自血(xue)液(ye)、羊(yang)水(shui)、胸水(shui)或腹(fu)水(shui)的懸(xuan)液(ye)材料(liao)，的方(fang)法(fa)是采用(yong)1000r/min的(de)低(di)速離心10分(fen)鐘(zhong)。經離(li)心(xin)後(hou)由於(yu)各(ge)種細(xi)胞的(de)比(bi)重(zhong)不(bu)同(tong)可在(zai)分層(ceng)液中(zhong)形成(cheng)不(bu)同(tong)層(ceng)，這(zhe)樣可根(gen)據需(xu)要收獲目(mu)的(de)細(xi)胞。2實體組(zu)織(zhi)材料(liao)的分(fen)離(li)方(fang)法(fa)對(dui)於(yu)實體組(zu)織(zhi)材料(liao)，由於(yu)細(xi)胞間(jian)結(jie)合(he)緊密，為了(le)使(shi)組(zu)織(zhi)中(zhong)的(de)細(xi)胞充(chong)分分(fen)散(san)，形成(cheng)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，可采用(yong)機(ji)械分(fen)散(san)法(fa)（物理(li)裂(lie)解(jie)）和消(xiao)化(hua)分(fen)離法(fa)。

三、細(xi)胞增(zeng)殖檢(jian)測(ce)技(ji)術

目(mu)前(qian)主(zhu)要有(you)兩種(zhong)用(yong)於(yu)檢測細(xi)胞增(zeng)殖能(neng)力(li)的方(fang)法(fa)。壹種是(shi)直(zhi)接的方(fang)法(fa)，通過(guo)直(zhi)接測定(ding)進(jin)行分(fen)裂

的細(xi)胞數(shu)來(lai)評(ping)價(jia)細(xi)胞的(de)增(zeng)殖能(neng)力(li)。另(ling)壹種是(shi)間(jian)接的方(fang)法(fa)，即(ji)細(xi)胞活(huo)力(li)（cell viability）檢測方(fang)法(fa)，通過(guo)檢(jian)測(ce)樣品中健康(kang)細(xi)胞的(de)數(shu)目(mu)來(lai)評(ping)價(jia)細(xi)胞的(de)增(zeng)殖能(neng)力(li)。顯然，細(xi)胞活(huo)力(li)檢測法(fa)並不(bu)能(neng)最(zui)終證(zheng)明(ming)檢(jian)測樣品中的(de)細(xi)胞是(shi)否在(zai)增(zeng)殖。如細(xi)胞在(zai)某(mou)壹培養條件下會自發(fa)啟動雕(diao)亡(wang)程(cheng)序，但藥物的(de)幹擾可抑(yi)制雕(diao)亡(wang)的(de)發(fa)生(sheng)；這(zhe)時若采用(yong)細(xi)胞活(huo)力(li)檢測法(fa)，顯然可以區(qu)分兩(liang)種(zhong)條件下的(de)細(xi)胞數(shu)量(liang)，但我們並不(bu)能(neng)從(cong)藥物幹(gan)擾組細(xi)胞數(shu)大(da)於(yu)對(dui)照組的(de)事(shi)實說明(ming)藥物可促進(jin)細(xi)胞增(zeng)殖的(de)結(jie)論。所(suo)以最直接的證(zheng)據應該采用(yong)方(fang)法(fa)壹。

取(qu)材：首先，用(yong)培(pei)養液濕潤所(suo)取(qu)的組(zu)織(zhi)材料(liao)，並用(yong)鋒(feng)利的眼科剪(jian)去(qu)除(chu)附在(zai)其上(shang)的脂肪和結(jie)締(di)組織(zhi)。接著用(yong)平(ping)衡(heng)液(ye)（如PBS或(huo)Hanks液(ye)）漂洗，再(zai)用(yong)眼科彎(wan)剪(jian)將組織(zhi)塊(kuai)剪(jian)成(cheng)小塊(kuai)。多(duo)次用(yong)PBS或(huo)Hanks液(ye)漂洗，直(zhi)到液體清亮(liang)、無(wu)油(you)滴(di)為止。

接種：用(yong)濕(shi)潤(run)的吸管吸(xi)取(qu)切碎的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)到培養瓶(ping)皿(min)中，並按壹定間(jian)距(ju)均(jun)勻放在培(pei)養瓶(ping)底(di)壁(bi)上(shang)。註(zhu)意不要過多(duo)，確(que)保(bao)組織(zhi)塊(kuai)切(qie)面(mian)貼(tie)在(zai)培養瓶(ping)底(di)壁(bi)上(shang)。

培養：將培養瓶(ping)翻(fan)轉，使(shi)瓶(ping)底(di)朝(chao)上(shang)，在(zai)種植了(le)組(zu)織(zhi)塊(kuai)壹側(ce)的對(dui)側(ce)面加足培(pei)養液，避免組(zu)織(zhi)塊(kuai)與(yu)培(pei)養液接觸(chu)，然後塞(sai)緊(jin)瓶(ping)塞(sai)。將種植了(le)組(zu)織(zhi)塊(kuai)的(de)壹側(ce)朝上(shang)，靜置於(yu)37℃培養箱(xiang)中。待(dai)組織(zhi)塊(kuai)貼(tie)壁(bi)1到3小時後翻(fan)瓶(ping)，使(shi)貼(tie)壁(bi)的組織(zhi)塊(kuai)浸(jin)沒在(zai)培養液中，繼(ji)續靜置。換(huan)液：每(mei)隔2到3天更換(huan)壹次培養液，或者根(gen)據培(pei)養瓶(ping)種(zhong)顏色的變(bian)化(hua)確(que)定換(huan)液時間(jian)。

壹、原代細(xi)胞計(ji)數(shu)

將血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)板(ban)及(ji)蓋片用(yong)擦(ca)試(shi)幹(gan)凈，並將蓋片(pian)蓋在(zai)計(ji)數(shu)板(ban)上。

將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)吸出少許，滴(di)加在蓋(gai)片邊(bian)緣(yuan)，使(shi)懸(xuan)液充(chong)滿(man)蓋(gai)片(pian)和計(ji)數(shu)板(ban)之間。

靜置3分鐘(zhong)。

鏡下觀(guan)察(cha)，計(ji)算(suan)計(ji)數(shu)板(ban)四大格細(xi)胞總(zong)數(shu)，壓線(xian)細(xi)胞只計(ji)左側(ce)和上(shang)方(fang)的。然後按下式(shi)計(ji)算(suan)：

細(xi)胞數(shu)/ml＝4大(da)格細(xi)胞總(zong)數(shu)/ 4×10000

註(zhu)意：鏡下偶(ou)見由(you)兩個(ge)以上細(xi)胞組(zu)成(cheng)的(de)細(xi)胞團(tuan)，應按單(dan)個(ge)細(xi)胞計(ji)算(suan)，若細(xi)胞團(tuan)占10%以上，說明(ming)分(fen)散(san)不好(hao)，需(xu)重(zhong)新制備細(xi)胞懸(xuan)液(ye)。

二、原代細(xi)胞活(huo)力(li)

將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)以0.5ml加入試管(guan)中。

加入0.5ml 0.4%臺盼蘭(lan)染液，染色2壹3分鐘(zhong)。

吸取(qu)少許懸液(ye)塗於(yu)載玻片(pian)上，加上蓋(gai)片。

鏡下取(qu)幾個(ge)任意視野(ye)分別計(ji)死(si)細(xi)胞和(he)活(huo)細(xi)胞數(shu)，計(ji)細(xi)胞活(huo)力(li)。

死細(xi)胞能(neng)被(bei)臺盼蘭(lan)染上色，鏡下可見深蘭(lan)色的細(xi)胞，活(huo)細(xi)胞不(bu)被(bei)染色，鏡下呈(cheng)無色透(tou)明(ming)狀(zhuang)。

活力(li)測定可以和細(xi)胞計(ji)數(shu)合(he)起來(lai)進(jin)行，但要考慮到染液對(dui)原細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的加倍稀(xi)釋作(zuo)用(yong)。