【概要描述】熒(ying)光(guang)-PCR法(fa)註意事項：．基礎程(cheng)序；2．擴(kuo)增溫度(du)和延伸溫度(du)；3．反應時(shi)間；4．循(xun)環(huan)次數；5．PCR 反應液的(de)配制(zhi)；6．PCR技(ji)術的(de)基本原(yuan)理；7．PCR的(de)反應動力學(xue)；8．PCR擴(kuo)增產(chan)物(wu)；9．PCR反應體系與(yu)反應條件。

性能指標：點擊(ji)了解更多(duo)熒(ying)光(guang)-PCR法(fa)。
.試劑盒(he)檢測特異(yi)性為00%
2. 檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)重現性為00%
3. 靈(ling)敏(min)度(du)可(ke)達到(dao)03/ml
4. 有(you)效期(qi)為6個月(yue)產(chan)品(pin)名稱：熒(ying)光(guang)-PCR法(fa)
規格：48T/盒(he)
類別:熒光(guang)-PCR法(fa)
運輸：低(di)溫、避(bi)光(guang)、快(kuai)遞(di)免費(fei)送貨(huo)上(shang)門(men)。
用(yong)途(tu)：生化實驗，合(he)成(cheng)實(shi)驗等(deng)試(shi)驗(yan)。
運(yun)輸及(ji)保(bao)存(cun):低(di)溫運輸,-20℃保(bao)存(cun), 保(bao)存(cun)期(qi)限(xian)為 6 個月(yue)。
自備試劑：樣(yang)品(pin) RNA。

使(shi)用(yong)方(fang)法:
壹、樣(yang)品(pin) RNA 的(de)制(zhi)備(bei)
、用(yong)自選方(fang)法抽提病毒(du)樣(yang)品(pin) RNA。註(zhu)意：可(ke)以(yi)選用(yong)本公(gong)司(si)的(de)壹(yi)管(guan)式病(bing)毒(du) RNAout
2、或(huo)柱(zhu)式病(bing)毒(du) RNAout。
二：RT（逆轉錄(lu)）反應合(he)成 cDNA
. 按(an)下表配制(zhi) RT 反應體系（20 μL 體系）
2. 70℃保(bao)溫(wen) 5 分(fen)鐘變(bian)性模(mo)板(ban)後立即(ji)冰浴(yu)。
3. 嚴(yan)格按(an)順(shun)序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆(ni)轉錄(lu)酶(mei)（含(han) RI），
反應終(zhong)體積(ji)為(wei) 20μL。
4. 42℃保(bao)溫(wen) 60 分(fen)鐘。此步(bu)為(wei) RT 反應。
5. 70℃保(bao)溫(wen) 0 分(fen)鐘以(yi)終止(zhi)反應，然後(hou)放置(zhi)在(zai)冰(bing)上(shang)待用(yong)。合(he)成的 cDNA 可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)作為 PCR 模(mo)板(ban)使用(yong)，丌(ji)需(xu)要純化。
反應五要素(su)：
參加PCR反應的(de)物(wu)質(zhi)主(zhu)要有五種(zhong)即(ji)引物(wu)、酶(mei)、dNTP、模(mo)板(ban)和Mg2+
引物(wu)：引物(wu)是(shi)PCR特異(yi)性反應的(de)關鍵，PCR 產(chan)物(wu)的(de)特(te)異(yi)性取(qu)決(jue)於引物(wu)與(yu)模(mo)板(ban)DNA互(hu)補的(de)程(cheng)度(du)。理論上(shang)，只(zhi)要知(zhi)道(dao)任何(he)壹(yi)段(duan)模(mo)板(ban)DNA序列(lie)， 就(jiu)能按其設(she)計互(hu)補的(de)寡(gua)核(he)苷(gan)酸鏈(lian)做(zuo)引物(wu)，利(li)用(yong)PCR就(jiu)可(ke)將模(mo)板(ban)DNA在體外大(da)量(liang)擴(kuo)增。設計引物(wu)應遵(zun)循(xun)以(yi)下原(yuan)則(ze)：
①引物(wu)長(chang)度(du)： 5-30bp，常用(yong)為(wei)20bp左右。
②引物(wu)擴(kuo)增跨度(du)： 以(yi)200-500bp為宜(yi)，特(te)定(ding)條件下可(ke)擴增長(chang)至(zhi)0kb的(de)片段(duan)。
③引物(wu)堿基：G+C含量以(yi)40-60%為宜(yi)，G+C太(tai)少擴(kuo)增效果(guo)不(bu)佳(jia)，G+C過多(duo)易(yi)出現非特(te)異(yi)條帶。ATGC隨(sui)機(ji)分布(bu)，避(bi)免5個以(yi)上(shang)的(de)嘌呤(ling)或(huo)嘧(mi)啶(ding)核(he)苷(gan)酸(suan)的(de)成串(chuan)排列(lie)。
④避(bi)免引物(wu)內(nei)部(bu)出現二級結(jie)構(gou)，避(bi)免兩條引物(wu)間(jian)互(hu)補，特(te)別(bie)是(shi)3'端的互(hu)補，否(fou)則(ze)會形成(cheng)引物(wu)二聚(ju)體，產(chan)生非特(te)異(yi)的(de)擴增條帶。
⑤引物(wu)3'端的堿基，特別是(shi)末及(ji)倒數第二個堿基，應嚴(yan)格要求(qiu)配對(dui)，以(yi)避(bi)免因末端堿基不(bu)配對(dui)而(er)導致(zhi)PCR失(shi)敗(bai)。
⑥引物(wu)中(zhong)有(you)或(huo)能加上(shang)合(he)適(shi)的(de)酶切(qie)位(wei)點， 被(bei)擴(kuo)增的靶序列(lie)有適(shi)宜(yi)的酶(mei)切(qie)位(wei)點， 這(zhe)對(dui)酶(mei)切(qie)分(fen)析(xi)或(huo)分子(zi)克(ke)隆(long)很有(you)好(hao)處。
⑦引物(wu)的(de)特(te)異(yi)性：引物(wu)應與(yu)核酸(suan)序列(lie)數據(ju)庫(ku)的其(qi)它序列(lie)無(wu)明(ming)顯(xian)同源性。
引物(wu)量(liang)：每(mei)條引物(wu)的(de)濃(nong)度(du)0.～umol或(huo)0～00pmol，以(yi)低引物(wu)量(liang)產(chan)生所(suo)需(xu)要的結(jie)果(guo)為好(hao)，引物(wu)濃(nong)度(du)偏(pian)高(gao)會(hui)引起錯(cuo)配和非特(te)異(yi)性擴增，且可(ke)增加引物(wu)之間(jian)形成(cheng)二聚(ju)體的機(ji)會。
2-基-3-硝(xiao)苯甲酯(zhi) 59382-59-　400µL　Bovine Serum Albumin, Acetylated　-20℃保(bao)存(cun)

三(san)基膦 594-09-2　00µg　Vitronectin　-20℃保(bao)存(cun)

3-氯(lv)-2-硝(xiao)苯胺 59483-54-4　5mg　Thioredoxin　-20℃保(bao)存(cun)

DL-蛋氨 59-5-8　mg　Streptavidin　-20℃保(bao)存(cun)

-基吡(bi)唑(zuo)-4-甲 5952-92-　0.mL　Streptavidin，HRP conjugated　頻繁(fan)使用(yong)時(shi)放4℃，不(bu)用(yong)時(shi)放-20℃

二基丙(bing)二 595-46-0　0.5mL　Streptavidin，AP Conjugated　4℃保(bao)存(cun)，請(qing)勿冷凍(dong)

4-溴-2-甲氧苯(ben)胺(an) 59557-9-4　0mg　Avidin　-20℃保(bao)存(cun)

3-氨(an)基-2-萘(nai)甲 5959-52-4　2mg　HRP-Avidin　-20℃保(bao)存(cun)

2,2-二基-3-羥基丙(bing) 597-3-9　00mg　AP-Avidin　-20℃保(bao)存(cun)

2,2-二基丁二 597-43-3　5mg　FITC-Avidin　-20℃保(bao)存(cun)

2-甲乙酯(zhi)苯(ben)胺 59777-72-9　mg　R-Phycoerythrin Avidin　-20℃保(bao)存(cun)

2,5-二氯煙(yan) 59782-85-3　0mg　Nuetral Avidin　-20℃保(bao)存(cun)

代(dai)嗎(ma)啉 ,-二氧化物(wu)鹽(yan)鹽(yan) 5980-62-6　g　Biotin　-20℃保(bao)存(cun)

,-環(huan)丙(bing)基二羧 598-0-7　5mg　FITC-Biotin　-20℃保(bao)存(cun)

溴(xiu)丙(bing) 598-3-2　25mg　Biotin-BSA　-20℃保(bao)存(cun)
熒(ying)光(guang)-PCR法(fa)LM-37瓊(qiong)脂(zhi)  規格: ml  Monkey apoprotein A,apo-A

改(gai)良(liang)緩(huan)沖蛋白(bai)腖(dong)水(shui)  規格: 0.2ml  Monkey apoprotein B00,apo-B00

枸櫞(yuan)鹽培(pei)養(yang)基  規格: 0.2ml  Monkey Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF

Christensen尿素(su)瓊(qiong)脂(zhi)  規格: 0.ml  Peanut agglutinin,PNA

尿素(su)酶瓊(qiong)脂(zhi)基礎  規格: 0.2ml  Sophora japonica agglutinin,SJA

MR-VP培(pei)養(yang)基  規格: 0.2ml  Aflatoxin,AFT

緩(huan)沖葡萄(tao)糖(tang)蛋白(bai)腖(dong)水(shui)  規格: 0.ml  Chicken ,3-βD glucosidase,,3-βD-Glu  

V-P半固(gu)體瓊(qiong)脂(zhi)  規格: 0.ml  Hydroxycorticosteroids,7-OHCS  

胰(yi)蛋白(bai)腖(dong)水(shui)  規格: 0.ml  Chicken 7-ketosteroids,7-KS  

明膠(jiao)培(pei)養(yang)基  規格: 0.ml  Chicken 5-Nucleotidase,5-NT  

鹽腖(dong)水(shui)培(pei)養(yang)基  規格: 0.2ml  Chicken factor B,BF  

靛基質(zhi)試驗(yan)培(pei)養(yang)基  規格: 0.2ml  Chicken C-Reactive Protein,CRP  

吲(yin)哚(duo)培(pei)養(yang)基  規格: 0.ml  Chicken L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL  

丙(bing)二培(pei)養(yang)基  規格: 0.ml  Chicken N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG  

馬尿(niao)培(pei)養(yang)基  規格: 0.ml  Chicken Interferon α,IFN-α
註意事項：
①加入試劑的順(shun)序應*，以(yi)保(bao)證(zheng)所(suo)有反應板(ban)孔溫(wen)育(yu)的(de)時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。
②使用(yong)幹(gan)凈的(de)塑(su)料(liao)容(rong)器(qi)配置(zhi)洗滌(di)液。
③按(an)照(zhao)雞血(xue)紅(hong)蛋白(bai)(HB)ELISA檢測(ce)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書(shu)中標明的時(shi)間(jian)、加液的(de)量(liang)及順(shun)序進(jin)行溫育(yu)操(cao)作(zuo)。
④底(di)物(wu)A應揮(hui)發，避(bi)免長(chang)時(shi)間(jian)打(da)開(kai)蓋(gai)子(zi)。底物(wu)B對(dui)光(guang)敏(min)感，避(bi)免長(chang)時(shi)間(jian)暴露於光(guang)下。避(bi)免用(yong)手接(jie)觸，有毒(du)。實驗(yan)完(wan)成(cheng)後應立即(ji)讀取(qu)OD值(zhi)。
⑤洗滌(di)酶(mei)標板(ban)時應充(chong)分拍(pai)幹(gan)，不(bu)要將吸水(shui)紙直(zhi)接(jie)放入酶標反應孔(kong)中吸(xi)水(shui)。
⑥使(shi)用(yong)壹(yi)次性的吸(xi)頭以(yi)免交叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸(xi)取(qu)終止(zhi)液和底(di)物(wu)A、B液時(shi)，避(bi)免使用(yong)帶金(jin)屬(shu)部(bu)分的加樣(yang)器 。
⑦實(shi)驗中不(bu)用(yong)的(de)板(ban)條應立即(ji)放回包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中(zhong)，密封(feng)保(bao)存(cun)，以(yi)免變質(zhi)。
⑧試劑(ji)應按(an)標簽說(shuo)明書(shu)儲(chu)存(cun)，使(shi)用(yong)前恢復(fu)到(dao)室(shi)溫。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的(de)標準(zhun)品(pin)應丟(diu)棄(qi)，不(bu)可(ke)保(bao)存(cun)。
⑨不(bu)用(yong)的(de)其它試劑(ji)應包(bao)裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同批號(hao)的試(shi)劑(ji)不(bu)要混用(yong)。保(bao)質(zhi)前使用(yong)。