【概要描述(shu)】小(xiao)鼠(shu)視(shi)網膜(mo)微血管(guan)周(zhou)細胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的(de)產品：ZJU-0430GBC-SD人(ren)膽(dan)囊(nang)癌細胞(bao)MG-63人(ren)成(cheng)骨(gu)肉瘤(liu)細胞(bao)B16-F1黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)HME1黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)HME4黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)HME6黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)HME7黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)HME2黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)NW38黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)SK23黑(hei)色(se)瘤(liu)細胞(bao)

本公司(si)所有產品僅(jin)供科(ke)學實驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科(ke)學實驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用！

小(xiao)鼠(shu)視(shi)網膜(mo)微血管(guan)周(zhou)分離(li)自視網(wang)膜組(zu)織(zhi)；視網(wang)膜(mo)居(ju)於眼球壁的(de)內層，是(shi)壹(yi)層透(tou)明(ming)的(de)薄膜。視(shi)網膜由(you)色(se)素上皮(pi)層和視網(wang)膜感(gan)覺(jiao)層組(zu)成(cheng)，兩層間(jian)在(zai)病理情(qing)況(kuang)下(xia)可(ke)分開，稱(cheng)為視(shi)網膜(mo)脫(tuo)離(li)。色(se)素上皮(pi)層與(yu)脈(mai)絡(luo)膜(mo)緊密相連，由色(se)素上皮(pi)細胞(bao)組(zu)成(cheng)，它們具有支(zhi)持和營養(yang)光(guang)感(gan)受器細胞(bao)、遮光(guang)、散熱(re)以及(ji)再生和修復(fu)等(deng)作(zuo)用。組(zu)織(zhi)學上視(shi)網膜分(fen)為10層，由(you)外(wai)向(xiang)內分別(bie)為：色(se)素上皮(pi)層、視(shi)錐、視桿(gan)細胞(bao)層、外(wai)界(jie)膜(mo)、外(wai)顆粒(li)層、外(wai)叢狀(zhuang)層、內顆粒(li)層、內叢狀(zhuang)層、神經(jing)節(jie)細胞(bao)層、神經(jing)纖(xian)維層、內界膜(mo)。視網(wang)膜(mo)內層為襯(chen)於血管(guan)膜(mo)內面的(de)壹(yi)層薄膜，有感(gan)光(guang)作用；後(hou)部(bu)鼻(bi)側有壹(yi)視(shi)神經(jing)乳(ru)頭(tou)。視(shi)網膜(mo)上的(de)感(gan)覺(jiao)層是(shi)由三(san)個神經(jing)元(yuan)組成。神經(jing)元(yuan)是(shi)視細胞(bao)層，專(zhuan)司(si)感(gan)光(guang)，它包(bao)括錐細胞(bao)和桿細胞(bao)。視(shi)桿(gan)細胞(bao)主要在離(li)中(zhong)心凹較遠(yuan)的(de)視網(wang)膜(mo)上，而(er)視錐細胞(bao)則(ze)在(zai)中(zhong)心凹處(chu)最(zui)多。第二層叫雙節細胞(bao)，約(yue)有10到(dao)數(shu)百個(ge)視(shi)細胞(bao)通(tong)過(guo)雙節細胞(bao)與(yu)壹(yi)個(ge)神經(jing)節(jie)細胞(bao)相聯系，負責聯(lian)絡(luo)作(zuo)用。第(di)三(san)層叫節細胞(bao)層，專(zhuan)管(guan)傳導(dao)。視(shi)網(wang)膜是(shi)壹(yi)層菲薄的(de)但又非(fei)常(chang)復(fu)雜(za)的(de)結構(gou)，它(ta)貼(tie)於眼球的(de)後壁(bi)部(bu)，傳遞(di)來自視網(wang)膜感(gan)受器沖(chong)動的(de)神經(jing)纖(xian)維跨(kua)越(yue)視網(wang)膜(mo)表(biao)面，經由(you)視神經(jing)到(dao)達出口(kou)。視(shi)網膜的(de)分辨(bian)力是(shi)不均勻(yun)的(de)，在黃(huang)斑(ban)區(qu)，其(qi)分辨(bian)能(neng)力強(qiang)。它(ta)是(shi)組成血管(guan)腔(qiang)面單(dan)層扁(bian)平(ping)上皮(pi)樣(yang)細胞(bao)，它(ta)所產生(sheng)和分泌(mi)的(de)生物活性(xing)物質對維(wei)持血管(guan)張(zhang)力、調節(jie)血壓、抗血栓(shuan)形成等(deng)有重(zhong)要作用，在(zai)視(shi)網(wang)膜(mo)血管(guan)疾(ji)病的(de)發病機制中(zhong)有重(zhong)要病理生(sheng)理學意義(yi)。周(zhou)細胞(bao)（pericyte）又(you)稱(cheng)Rouget細胞(bao)和壁細胞(bao)，是(shi)壹(yi)種(zhong)包(bao)圍全身毛(mao)細血管(guan)和靜脈(mai)中(zhong)內皮(pi)細胞(bao)的(de)細胞(bao)，可(ke)以收(shou)縮(suo)。周細胞(bao)嵌入毛(mao)細血管(guan)內皮(pi)細胞(bao)的(de)基膜(mo)中(zhong)，通(tong)過(guo)物理接觸和旁(pang)分泌(mi)信號(hao)與(yu)內皮(pi)細胞(bao)進行細胞(bao)通(tong)訊(xun)，監視和穩定(ding)內皮(pi)細胞(bao)的(de)成熟(shu)過(guo)程。此外(wai)，周(zhou)細胞(bao)還(hai)具(ju)有調(tiao)控毛(mao)細血管(guan)血流(liu)量、細胞(bao)碎屑清除(chu)和吞(tun)噬以及(ji)血腦(nao)屏障滲(shen)透性(xing)的(de)作用，其(qi)多功能(neng)性(xing)是(shi)目前(qian)研(yan)究的(de)熱點(dian)之(zhi)壹(yi)，所以對血管(guan)周(zhou)細胞(bao)的(de)生物學特(te)征(zheng)、標記(ji)物、細胞(bao)功(gong)能(neng)等(deng)的(de)研(yan)究都(dou)為相關研(yan)究提供基(ji)礎(chu)資(zi)料(liao)。周細胞(bao)產生(sheng)手指(zhi)狀(zhuang)的(de)外(wai)延(yan)以調(tiao)控毛(mao)細血管(guan)的(de)血流(liu)量。周細胞(bao)和內皮(pi)細胞(bao)之(zhi)間共同(tong)擁(yong)有壹(yi)個(ge)基膜，基膜上有多種細胞(bao)連(lian)接，包(bao)括多種整(zheng)合素、神經(jing)鈣(gai)黏(nian)素、纖(xian)連蛋(dan)白以(yi)及(ji)接合素。它還(hai)參與毛(mao)細血管(guan)直(zhi)徑的(de)雙向調(tiao)控；毛(mao)細血管(guan)受(shou)損時，周(zhou)細胞(bao)還(hai)可(ke)增殖(zhi)，分化為內皮(pi)細胞(bao)和成纖(xian)維細胞(bao)。
方法(fa)簡介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室分離(li)的(de)小(xiao)鼠(shu)視(shi)網膜(mo)微血管(guan)周(zhou)采(cai)用中(zhong)性(xing)dan白酶(mei)-膠(jiao)原酶聯(lian)合消(xiao)化法制備而(er)來制備而(er)來，細胞(bao)總(zong)量約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測：

公司(si)實驗(yan)室分離(li)的(de)小(xiao)鼠(shu)視(shi)網膜(mo)微血管(guan)周(zhou)經α-SMA免疫熒光(guang)鑒(jian)定，純度(du)可(ke)達90%以(yi)上，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細菌、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

培養(yang)基 含FBS、生長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻率(lv) 每3-4天換(huan)液壹(yi)次(ci)；

生長特性(xing) 貼壁(bi)

細胞(bao)形態(tai) 成纖(xian)維細胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳1-2代左(zuo)右；

消化液 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培養(yang)條件(jian) 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實驗(yan)器材準備：準備無菌的(de)培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移(yi)液管、離(li)心管、手術(shu)器械(xie)等(deng)，並(bing)進行高(gao)壓滅菌或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑(ji)準備：配(pei)制或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛血清(qing)、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確保其(qi)無菌且(qie)在(zai)有效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗(yan)動物或組織(zhi)來源(yuan)準備：根(gen)據實驗(yan)需求，選擇合適的(de)動物並(bing)進行相應(ying)的(de)麻(ma)醉或處(chu)死(si)，獲(huo)取所需組(zu)織(zhi)；或從已(yi)有的(de)組織(zhi)樣(yang)本庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組(zu)織(zhi)。

取材與處(chu)理(li)

1. 取材：在無菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取出(chu)目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減少對組(zu)織(zhi)的(de)損傷(shang)，並(bing)去除(chu)多余的(de)脂(zhi)肪、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目的(de)組織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的(de)組織(zhi)用預(yu)冷(leng)的(de)無菌PBS沖(chong)洗數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除(chu)血液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化。

細胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組織(zhi)塊放入含有適(shi)量消化酶的(de)離(li)心管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕(qing)搖晃(huang)離(li)心管，使(shi)消化更均勻(yun)。

2. 終止(zhi)消化：當(dang)組織(zhi)塊大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化成單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入含血清(qing)的(de)培養(yang)基終(zhong)止消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心：用細胞(bao)篩過濾(lv)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱。

細胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每天(tian)用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)觀察細胞(bao)的(de)形態(tai)、生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的(de)變化情(qing)況(kuang)，如(ru)發現細胞(bao)汙(wu)染(ran)或異常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計(ji)數(shu)與活力檢(jian)測：在需要時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼藍染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對細胞(bao)進行計(ji)數和活力檢(jian)測，以了解細胞(bao)的(de)生長情(qing)況(kuang)和健康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材與分離(li)

1. 快速(su)操作(zuo)

- 組織(zhi)取材後需立(li)即處(chu)理(li)，避免(mian)長時間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫或非(fei)營養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去除(chu)血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶選擇

- 根(gen)據組織(zhi)類型選擇消化酶，避免(mian)過(guo)度(du)消(xiao)化導致細胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時間需(xu)嚴格控制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡(jing)觀察細胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條件(jian)優(you)化

1. 培養(yang)基選擇

- 使(shi)用含(han)血清(qing)或(huo)特定生(sheng)長因子(zi)的(de)培養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養(yang)基品牌(pai)或批(pi)次，減(jian)少細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與傳代(dai)

- 原代細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能力較弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要包(bao)被(bei)培養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白、多聚(ju)賴氨(an)酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密度(du)建議控制在(zai) 70%-80%，過度(du)匯合會(hui)導(dao)致接觸抑(yi)制和分化。

三(san)、汙染(ran)控制

1. 無菌操作(zuo)

- 全程在超(chao)凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材，避免(mian)交(jiao)叉汙染(ran)。

- 培養(yang)基中(zhong)可(ke)添加(jia)雙抗，但長期使(shi)用可(ke)能影(ying)響(xiang)細胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原體(ti)檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測支(zhi)原體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後(hou)需及(ji)時(shi)丟棄(qi)細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每天(tian)檢(jian)查細胞(bao)形態(tai)、密度(du)及(ji)培養(yang)基顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養(yang)基（通(tong)常(chang)每 2-3 天(tian)換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形態(tai)（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增多）可(ke)能提示汙(wu)染(ran)或營養(yang)不足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍存

- 原代細胞(bao)分(fen)裂(lie)次數有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及(ji)時(shi)凍存早期代(dai)次細胞(bao)。

- 凍存液(ye)建議使(shi)用 DMSO+血清(qing)（或(huo)專用凍存培養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫後液(ye)氮保存(cun)。