【概(gai)要描述(shu)】小(xiao)鼠(shu)骨髓單(dan)個核(he)細(xi)胞公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產品：ZJU-0430+LUCGBC-SD人膽(dan)囊癌(ai)細(xi)胞SK-UT1人子宮(gong)平滑(hua)肌肉(rou)瘤(liu)細胞MDA-MB-435乳腺(xian)癌(ai)細(xi)胞HCC1806乳腺(xian)鱗(lin)狀癌(ai)細(xi)胞4T1/GFP4T1/GFP 小(xiao)鼠乳腺(xian)癌(ai)細(xi)胞帶(dai)綠色(se)熒(ying)光(guang)MX-1乳腺(xian)癌(ai)細(xi)胞MCF-7/GFP人乳腺(xian)癌(ai)細(xi)胞帶(dai)綠色(se)熒(ying)光(guang)MDA-MB-231/RFP乳腺(xian)癌(ai)細(xi)胞帶(dai)紅色熒光gpc-1前列腺(xian)癌(ai)細(xi)胞9L-B前列腺(xian)癌(ai)細(xi)胞

小(xiao)鼠(shu)骨(gu)髓(sui)單(dan)個核(he)分(fen)離(li)自骨髓(sui)；骨(gu)髓是機體的造(zao)血(xue)組織，位(wei)於身(shen)體的許(xu)多(duo)骨骼(ge)內(nei)。成(cheng)年動(dong)物(wu)的骨(gu)髓(sui)分兩種：紅骨髓和(he)黃骨(gu)髓(sui)。紅骨髓能制(zhi)造紅細胞、血(xue)小板(ban)和(he)各種白細(xi)胞。血(xue)小板(ban)有(you)止血(xue)作用，白細(xi)胞能殺(sha)滅(mie)與抑制(zhi)各種病(bing)原體(ti)，包(bao)括細菌(jun)、病(bing)毒等(deng)；某(mou)些淋(lin)巴(ba)細(xi)胞能制(zhi)造抗體(ti)。因此(ci)，骨髓(sui)不但(dan)是造(zao)血器官(guan)，它(ta)還(hai)是重(zhong)要的免(mian)疫器(qi)官(guan)。骨髓(sui)是存在於長(chang)骨（如(ru)肱骨、股(gu)骨）的骨(gu)髓(sui)腔(qiang)和(he)扁(bian)平(ping)骨（如(ru)髂(qia)骨）的稀(xi)松(song)骨(gu)質(zhi)間(jian)的網(wang)眼中(zhong)，是壹(yi)種海(hai)綿狀(zhuang)的組織，能產生血細胞的骨(gu)髓(sui)略呈紅色，稱(cheng)為紅骨髓。出生(sheng)時(shi)，紅骨髓充滿全(quan)身(shen)骨(gu)髓(sui)腔(qiang)，隨著年齡(ling)增大(da)，脂(zhi)肪(fang)細胞增多(duo)，相當(dang)部(bu)分(fen)紅骨髓被黃(huang)骨(gu)髓(sui)取代(dai)，最後(hou)幾(ji)乎(hu)只有(you)扁(bian)平(ping)骨骨髓腔(qiang)中(zhong)有(you)紅骨髓。骨髓(sui)單(dan)個核(he)細(xi)胞是骨(gu)髓中(zhong)具(ju)有(you)單個核(he)的細(xi)胞，包(bao)括淋巴(ba)細(xi)胞和(he)單核(he)細(xi)胞。註(zhu)意這(zhe)裏(li)是（mononuclear cell）單個核(he)細(xi)胞，而不是（Monocyte）單(dan)核(he)細(xi)胞。單(dan)個核(he)細(xi)胞的體(ti)積(ji)、形(xing)態(tai)和(he)比(bi)重與(yu)骨(gu)髓(sui)其(qi)他細(xi)胞不同，利(li)用(yong)壹(yi)定(ding)比(bi)例聚(ju)蔗(zhe)糖和(he)泛影(ying)鈉(na)形(xing)成(cheng)的等(deng)滲(shen)溶液(ye)作密度(du)梯(ti)度(du)離(li)心，使壹(yi)定(ding)密度(du)的細(xi)胞按(an)相應(ying)密度(du)梯(ti)度(du)分(fen)布(bu)，可(ke)將各種血(xue)細胞與(yu)單個核(he)分(fen)離(li)。
方法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的小(xiao)鼠(shu)骨髓單個核(he)采(cai)用(yong)取骨髓(sui)、通過(guo)密度(du)梯(ti)度(du)離(li)心法制(zhi)備而來(lai)制(zhi)備而來(lai)，細胞總(zong)量約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公司(si)實驗(yan)室(shi)分離(li)的小(xiao)鼠(shu)骨髓單個核(he)經過檢(jian)測，純(chun)度(du)可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產品僅供科學(xue)實驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他科(ke)學(xue)實驗(yan)外的使(shi)用(yong)！

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率 每2-3天(tian)換液(ye)壹(yi)次

生長特(te)性(xing) 半貼壁(bi)半(ban)懸(xuan)浮

細胞形(xing)態(tai) 圓(yuan)形(xing)

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 不增殖(zhi)；不傳(chuan)代(dai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養(yang)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實驗(yan)器材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手術(shu)器(qi)械等(deng)，並(bing)進行高壓滅(mie)菌(jun)或其(qi)他合適的消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試劑(ji)準備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買合適的培養(yang)基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗等(deng)試劑(ji)，確保(bao)其(qi)無菌(jun)且在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實驗(yan)動物(wu)或組織來(lai)源(yuan)準備(bei)：根(gen)據(ju)實驗(yan)需求，選擇合適的動(dong)物(wu)並(bing)進行相應(ying)的麻醉(zui)或處(chu)死(si)，獲(huo)取所需(xu)組織；或從已(yi)有(you)的組織樣本庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織。

取材(cai)與處(chu)理

1. 取材(cai)：在無菌(jun)條件下(xia)，迅(xun)速(su)取出目(mu)標(biao)組織，盡量減少對組織的損(sun)傷，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組織等(deng)非目(mu)的組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取出的組織用預冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以(yi)去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切：將組織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細胞分(fen)離

1. 消(xiao)化(hua)：將剪碎(sui)的組織塊放入含有(you)適量消(xiao)化(hua)酶(mei)的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床或培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更均勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組織塊大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或小細(xi)胞團(tuan)時(shi)，加(jia)入含血清(qing)的培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾與(yu)離心：用(yong)細(xi)胞篩過濾細胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的組織碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將濾液(ye)以(yi)適當的轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細胞沈澱。

細胞觀(guan)察與(yu)檢(jian)測

1. 日常觀察：每天用(yong)倒置(zhi)顯微鏡(jing)觀(guan)察細胞的形(xing)態(tai)、生長狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等(deng)，記錄細(xi)胞的變(bian)化(hua)情況(kuang)，如(ru)發現(xian)細(xi)胞汙(wu)染或異常，及(ji)時(shi)采取相應(ying)措(cuo)施。
2. 細胞計(ji)數與(yu)活(huo)力檢(jian)測：在(zai)需(xu)要時(shi)，可(ke)采用臺(tai)盼藍染色等(deng)方法(fa)對細(xi)胞進行計(ji)數和(he)活(huo)力檢(jian)測，以(yi)了(le)解(jie)細胞的生(sheng)長(chang)情況(kuang)和(he)健康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組織取材(cai)後(hou)需立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫(wen)或非營(ying)養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或生理鹽水沖洗(xi)組織，去除血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選擇

- 根(gen)據(ju)組織類型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通常 10-30 分鐘），可(ke)通過顯微鏡(jing)觀(guan)察細胞解(jie)離狀(zhuang)態。

二、培養(yang)條件優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選擇

- 使(shi)用(yong)含血清(qing)或特定(ding)生長(chang)因子的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞需(xu)添加(jia)胰島素、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更換培養(yang)基(ji)品牌(pai)或批(pi)次，減少細胞適應壓力(li)。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞貼(tie)壁能力(li)較弱，可(ke)能需(xu)要(yao)包被培養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑制(zhi)和(he)分化(hua)。

三、汙(wu)染控制(zhi)

1. 無菌(jun)操(cao)作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次性(xing)耗(hao)材(cai)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙抗，但(dan)長期(qi)使用(yong)可(ke)能影(ying)響(xiang)細胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體(ti)檢(jian)測

- 定(ding)期(qi)檢(jian)測支原體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後(hou)需及(ji)時(shi)丟棄(qi)細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控

1. 日常觀察

- 每天檢(jian)查細(xi)胞形(xing)態(tai)、密度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更換培養(yang)基(ji)（通常每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異(yi)常形(xing)態(tai)（如(ru)細胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可(ke)能提示汙(wu)染或營養(yang)不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞分(fen)裂次數(shu)有(you)限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍存早期(qi)代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或專(zhuan)用凍(dong)存培養(yang)基(ji)），梯度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮(dan)保(bao)存。