【概(gai)要(yao)描述】小(xiao)鼠陰道壁(bi)成(cheng)纖維細胞公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產品：MOLP8人多發(fa)性(xing)骨(gu)髓(sui)瘤(liu)HCT-8/VCR耐長春新(xin)堿結(jie)腸(chang)癌細胞HCT-8/LUCSTR人(ren)結腸(chang)癌細胞帶(dai)熒光(guang)酶HCT-8/5-Fu耐5氟結腸癌細胞CT26.WT/LUC小(xiao)鼠結(jie)腸(chang)癌細胞帶(dai)熒光(guang)酶RB視網膜(mo)母細胞瘤(liu)GH3垂體(ti)瘤(liu)細胞K562/LUCSTR人(ren)慢(man)性(xing)髓(sui)系白血病細胞帶(dai)熒光(guang)酶P3HR1EBV陽性(xing)B淋(lin)巴(ba)瘤細胞S180艾(ai)氏腹(fu)水瘤(liu)細胞

本公(gong)司(si)所(suo)有產品(pin)僅供科學(xue)實驗(yan)，不(bu)做其(qi)他科學(xue)實驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用！

小(xiao)鼠陰道壁(bi)成(cheng)纖維分離自(zi)陰道組(zu)織(zhi)；陰道位於(yu)膀胱(guang)、尿(niao)道(dao)和(he)直(zhi)腸(chang)之(zhi)間(jian)，是壹(yi)個(ge)富(fu)有(you)彈性(xing)的(de)管(guan)狀(zhuang)器官。它(ta)在(zai)人(ren)類生殖過程(cheng)中具有多(duo)種生理功能，是連(lian)接子(zi)宮與(yu)外陰的通(tong)道(dao)，是排出月經血、娩出(chu)嬰(ying)兒的必經之(zhi)路，也(ye)是壹(yi)個(ge)重(zhong)要(yao)的性(xing)交(jiao)器官。陰道壁(bi)按(an)組織學(xue)由外到(dao)內(nei)分(fen)三(san)層，即黏膜(mo)層、肌(ji)層和外(wai)膜(mo)。1）黏(nian)膜(mo)層由上(shang)皮和固(gu)有(you)膜(mo)組(zu)成(cheng)。上(shang)皮較(jiao)厚(hou)，為(wei)復層鱗狀(zhuang)上(shang)皮，從基底(di)層到表(biao)層由基底(di)層、旁基底(di)層、中間(jian)層和表(biao)層組成(cheng)。沒(mei)有(you)角化層。陰道粘(zhan)膜(mo)的(de)基底(di)層呈細波(bo)紋(wen)狀(zhuang)起(qi)伏(fu)。2）肌(ji)層由平(ping)滑肌(ji)組(zu)織構(gou)成(cheng)，肌(ji)束排列(lie)不(bu)規(gui)則，縱行(xing)和環(huan)形(xing)互(hu)相(xiang)交(jiao)錯。肌(ji)束間(jian)有較(jiao)多(duo)的(de)結締(di)組織(zhi)和彈性(xing)纖維。陰道外(wai)口(kou)有環形(xing)的橫紋(wen)肌(ji)稱括(kuo)約肌(ji)。3）外(wai)膜(mo)層為(wei)纖維膜(mo)，由(you)結(jie)締(di)組織(zhi)構成(cheng)，內(nei)含豐(feng)富(fu)的(de)彈性(xing)纖維、靜脈叢、淋(lin)巴(ba)管(guan)和(he)神(shen)經。大鼠陰道壁(bi)成(cheng)纖維細胞主要(yao)分離自(zi)外膜(mo)層，成(cheng)纖維細胞（Fibroblast）是疏(shu)松(song)結締(di)組織(zhi)的主要(yao)細胞成(cheng)分(fen)，由(you)胚(pei)胎(tai)時期(qi)的(de)間(jian)充質(zhi)細胞分(fen)化而來。成(cheng)纖維細胞較(jiao)大(da)，輪(lun)廓清楚，多為(wei)突起(qi)的(de)紡錘(chui)形或星形的(de)扁(bian)平狀結(jie)構，其(qi)細胞核(he)呈規(gui)則的卵圓(yuan)形(xing)，核仁(ren)大(da)而(er)明(ming)顯。成(cheng)纖維細胞功能活(huo)動(dong)旺(wang)盛，細胞質(zhi)嗜(shi)弱(ruo)堿性(xing)，具明顯的(de)蛋(dan)白質(zhi)合(he)成(cheng)和(he)分(fen)泌(mi)活動，在(zai)壹(yi)定條(tiao)件(jian)下(xia)，它(ta)可以實現跟纖維細胞的(de)互(hu)相(xiang)轉(zhuan)化；成(cheng)纖維細胞對(dui)不同(tong)程(cheng)度的細胞變性(xing)、壞(huai)死和組(zu)織(zhi)缺(que)損的修復有(you)著(zhe)十(shi)分重(zhong)要(yao)的作用(yong)。
方法簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的小(xiao)鼠陰道壁(bi)成(cheng)纖維采用(yong)yi蛋(dan)白酶-膠(jiao)原酶混合(he)消(xiao)化法結合(he)差(cha)速貼(tie)壁(bi)法制備而來(lai)，細胞總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的小(xiao)鼠陰道壁(bi)成(cheng)纖維經Vimentin免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌、酵(jiao)母和(he)真菌等(deng)。

培(pei)養基 含FBS、生(sheng)長添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液(ye)頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次

生(sheng)長特性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞形(xing)態(tai) 成(cheng)纖維細胞樣

傳(chuan)代特性(xing) 可傳2-3代左(zuo)右(you)；2代以(yi)內狀態(tai)

消(xiao)化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材準(zhun)備：準(zhun)備無菌的(de)培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶、移(yi)液管(guan)、離心管(guan)、手(shou)術器械等(deng)，並進(jin)行(xing)高壓滅菌(jun)或其他(ta)合(he)適的消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配制(zhi)或購買合(he)適的培(pei)養基、消(xiao)化酶（如(ru)、膠(jiao)原酶等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確保其(qi)無菌且(qie)在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或組織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需(xu)求，選擇(ze)合(he)適的動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的麻醉(zui)或處死，獲取(qu)所(suo)需組織；或從已(yi)有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣本庫(ku)中獲取(qu)組(zu)織。

取(qu)材(cai)與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅(xun)速取(qu)出(chu)目標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組織的損傷(shang)，並去除(chu)多(duo)余(yu)的脂肪、結締(di)組織(zhi)等(deng)非目的組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取(qu)出(chu)的組織用(yong)預(yu)冷(leng)的無菌PBS沖(chong)洗數次，以(yi)去除(chu)血液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊，以(yi)便後(hou)續消化。

細胞分(fen)離

1. 消(xiao)化：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊放(fang)入(ru)含有(you)適量(liang)消(xiao)化酶的(de)離心管(guan)中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床或培(pei)養箱(xiang)中消化壹(yi)段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕輕搖晃離心管(guan)，使(shi)消化更(geng)均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部(bu)分被(bei)消化成(cheng)單(dan)細胞懸(xuan)液或小(xiao)細胞團時，加(jia)入(ru)含血清的(de)培(pei)養基終止(zhi)消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離心：用(yong)細胞篩(shai)過濾(lv)細胞懸(xuan)液，去除(chu)未(wei)消(xiao)化的組織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心，收集細胞沈澱(dian)。

細胞觀(guan)察與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每(mei)天(tian)用倒置顯微鏡(jing)觀察(cha)細胞的(de)形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密(mi)度等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞的(de)變化情況，如發(fa)現(xian)細胞汙(wu)染或異常(chang)，及時(shi)采取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計數與(yu)活力檢測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可采用(yong)臺盼藍(lan)染色(se)等(deng)方法對細胞進(jin)行(xing)計數和(he)活(huo)力檢測(ce)，以(yi)了解(jie)細胞的(de)生長情況和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速操(cao)作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後需立即處理(li)，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴露於(yu)室(shi)溫或非營養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無菌 PBS 或生理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗組織，去除(chu)血液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶選擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類型選擇(ze)消化酶，避(bi)免(mian)過度消(xiao)化導致細胞損傷(shang)。

- 消(xiao)化時間(jian)需嚴格控制(zhi)（通常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可通過顯微鏡(jing)觀察(cha)細胞解(jie)離狀態(tai)。

二(er)、培(pei)養條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養基選擇(ze)

- 使(shi)用含血清或特定生(sheng)長因子(zi)的培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細胞需(xu)添加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養基品(pin)牌或批次，減(jian)少(shao)細胞適應壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與(yu)傳代

- 原代細胞貼(tie)壁(bi)能力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能需(xu)要(yao)包(bao)被培(pei)養皿(min)（如(ru)膠原蛋(dan)白、多聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密(mi)度建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會導致接(jie)觸抑制和(he)分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制

1. 無菌操(cao)作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺操(cao)作，使(shi)用壹(yi)次性(xing)耗(hao)材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培(pei)養基中可添加雙(shuang)抗(kang)，但長期(qi)使(shi)用可能影(ying)響(xiang)細胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染後需(xu)及(ji)時(shi)丟棄細胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查(zha)細胞形(xing)態(tai)、密(mi)度及(ji)培(pei)養基顏(yan)色(se)，及時更(geng)換(huan)培(pei)養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如(ru)細胞變圓、碎(sui)片增多）可能提(ti)示汙染(ran)或營養不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存

- 原代細胞分(fen)裂(lie)次數(shu)有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需(xu)及時凍(dong)存(cun)早期(qi)代次(ci)細胞。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血清（或專用凍(dong)存(cun)培(pei)養基），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液氮保存。