【概(gai)要(yao)描述】小鼠腓(fei)腸肌細(xi)胞(bao)公(gong)司正(zheng)在出售的產品：ARD (STR)人(ren)多(duo)發性骨(gu)髓瘤(liu)細(xi)胞(bao)豬原代(dai)腎(shen)小(xiao)球(qiu)系(xi)膜(mo)細(xi)胞(bao)兔原(yuan)代(dai)卵(luan)巢(chao)間(jian)質(zhi)細(xi)胞(bao)大鼠原代(dai)胰(yi)腺導管上(shang)皮細(xi)胞(bao)人原(yuan)代(dai)視(shi)網(wang)膜(mo)muller細(xi)胞(bao)人原(yuan)代(dai)胎(tai)盤周細(xi)胞(bao)小鼠(shu)原代(dai)髓(sui)核(he)細(xi)胞(bao)大鼠原代(dai)胰(yi)腺星(xing)狀細(xi)胞(bao)兔原(yuan)代(dai)子(zi)宮(gong)成纖(xian)維細(xi)胞(bao)大鼠原代(dai)胰(yi)島細(xi)胞(bao)

小(xiao)鼠(shu)腓(fei)腸肌分(fen)離自小(xiao)腿(tui)肌肉組(zu)織(zhi)；腓(fei)腸肌位於(yu)小腿(tui)後(hou)面的皮下，是(shi)壹個淺表(biao)的肌肉，當人(ren)體(ti)站(zhan)立(li)時(shi)，可(ke)以(yi)在小腿(tui)後(hou)面看(kan)到隆(long)起(qi)肌肉的(de)輪(lun)廓就是(shi)腓(fei)腸肌。腓(fei)腸肌為小(xiao)腿(tui)後(hou)側群淺組肌肉，有內(nei)、外二頭，內(nei)側(ce)頭(tou)起(qi)自股骨(gu)內(nei)側(ce)髁(ke)上(shang)的(de)三角形(xing)隆(long)起(qi)，外側(ce)頭起自股骨(gu)外側(ce)髁的近(jin)側(ce)端，在二頭的深面各有壹滑(hua)膜(mo)囊(nang)。腓(fei)腸肌的二肌腹(fu)增(zeng)大，在腘窩(wo)下角彼(bi)此鄰近，所(suo)成夾(jia)角(jiao)多(duo)為25°～30°，此肌下行(xing)與(yu)比目(mu)魚(yu)肌移行(xing)為跟腱，止(zhi)於跟骨(gu)結節。腓(fei)腸肌的動(dong)脈(mai)發(fa)自腘動(dong)脈(mai)、靜(jing)脈(mai)與(yu)動(dong)脈(mai)伴(ban)行(xing)，註入(ru)腘靜(jing)脈(mai)或小(xiao)隱(yin)靜(jing)脈(mai)。腓(fei)腸肌的神(shen)經全(quan)部(bu)來自脛(jing)神(shen)經。包括(kuo)內(nei)、外側(ce)肌神經。腓(fei)腸肌在行(xing)走(zou)及(ji)站立(li)時能(neng)提足(zu)跟向上，直(zhi)立(li)時(shi)，腓(fei)腸肌和(he)比目(mu)魚(yu)肌都參加強固(gu)膝關(guan)節，並調節小(xiao)腿(tui)和(he)足(zu)的位(wei)置。脛(jing)前(qian)皮膚缺損(sun)或深(shen)部(bu)竇道(dao)及(ji)瘢痕(hen)，可(ke)以(yi)切(qie)取腓(fei)腸肌內(nei)側(ce)頭(tou)及(ji)其(qi)皮面皮膚所(suo)形(xing)成的(de)肌皮瓣向前(qian)旋轉。腓(fei)腸肌還可(ke)影(ying)響(xiang)足(zu)的縱(zong)弓(gong)，該肌癱(tan)瘓(huan)時，足(zu)縱(zong)弓(gong)將(jiang)加深。該(gai)肌由脛(jing)神(shen)經支(zhi)配(pei)，股骨(gu)髁上(shang)骨(gu)折(zhe)時，因(yin)腓(fei)腸肌收縮(suo)遠(yuan)側(ce)端(duan)常自後(hou)移位。腓(fei)腸肌是(shi)脛(jing)骨(gu)和(he)腓(fei)骨(gu)後(hou)面的壹塊肌肉。腓(fei)腸肌細(xi)胞(bao)屬於骨(gu)骼肌細(xi)胞(bao)的壹種，骨(gu)骼肌又稱橫(heng)紋(wen)肌，肌肉中的壹種，約(yue)占(zhan)全(quan)身(shen)重(zhong)量(liang)的40%。骨(gu)骼肌纖維為長(chang)柱形(xing)的(de)多(duo)核(he)細(xi)胞(bao)，肌膜的(de)外面有基膜(mo)緊密(mi)貼附(fu)。屬於橫(heng)紋(wen)肌，橫(heng)紋(wen)肌還包括(kuo)心(xin)肌與(yu)內(nei)臟橫(heng)紋(wen)肌，其(qi)中骨(gu)骼肌主(zhu)要(yao)分(fen)布於(yu)四(si)肢(zhi)。每塊肌肉都(dou)是(shi)具有壹定(ding)形(xing)態、結(jie)構(gou)和(he)功能(neng)的器(qi)官，有豐(feng)富的(de)血管、淋(lin)巴(ba)分(fen)布，在軀(qu)體(ti)神(shen)經支(zhi)配(pei)下(xia)收(shou)縮(suo)或舒張(zhang)，進行(xing)隨(sui)意(yi)運動(dong)。肌肉可(ke)根據(ju)共(gong)形(xing)狀(zhuang)、大小、位置、起(qi)止(zhi)點、纖維方(fang)向(xiang)和(he)作(zuo)用等命(ming)名。依形(xing)態命(ming)名的如斜方(fang)肌、菱(ling)形(xing)肌、三角肌、梨狀(zhuang)肌等。骨(gu)骼肌細(xi)胞(bao)呈(cheng)纖維狀，不分(fen)支，有明顯橫(heng)紋(wen)，核(he)很(hen)多(duo)，且都位於細(xi)胞(bao)膜下(xia)方(fang)。肌細(xi)胞(bao)內(nei)有許多(duo)沿細(xi)胞(bao)長軸(zhou)平行(xing)排列的(de)細(xi)絲狀(zhuang)肌原纖(xian)維。每壹肌原纖(xian)維都有相間(jian)排列的(de)明帶（Ⅰ帶(dai)）及(ji)暗帶(dai)（A帶(dai)）。明(ming)帶染(ran)色較淺，而(er)暗帶(dai)染(ran)色較深。暗帶(dai)中間(jian)有壹條較明亮(liang)的線稱H線。H線的中部(bu)有壹M線。明帶中間(jian)，有壹條較暗的(de)線稱為Z線。兩個Z線之間(jian)的(de)區段，叫(jiao)做(zuo)壹個肌節。骨(gu)骼肌細(xi)胞(bao)原代(dai)分(fen)離培養3天後(hou)，可(ke)見(jian)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)伸展，細(xi)胞(bao)形(xing)態大小不壹，呈(cheng)梭形(xing)、不規(gui)則(ze)形(xing)、三角形(xing)或扇(shan)形(xing)，核(he)卵(luan)圓形(xing)、居(ju)中；2周後(hou)細(xi)胞(bao)匯合(he)，多(duo)數細(xi)胞(bao)伸展呈(cheng)長梭(suo)形(xing)，胞(bao)漿(jiang)豐(feng)富，有分(fen)枝(zhi)狀突(tu)起，細(xi)胞(bao)平行(xing)排列成單(dan)層或部(bu)分(fen)區域(yu)多(duo)層重(zhong)疊(die)生長(chang)，高低(di)起(qi)伏；細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)低(di)時(shi)，常(chang)交(jiao)織(zhi)成網(wang)狀(zhuang)；密(mi)度(du)高時(shi)，則(ze)排列為旋渦狀或柵(zha)欄狀。傳(chuan)代(dai)後(hou)細(xi)胞(bao)生長(chang)較快(kuai)，4-6天即(ji)可(ke)匯合(he)，並保持上(shang)述形(xing)態學(xue)特(te)征(zheng)和(he)生長(chang)特(te)點。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的小鼠腓(fei)腸肌采(cai)用(yong)膠(jiao)原(yuan)酶消化法結(jie)合(he)差速(su)貼壁(bi)法制(zhi)備而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量(liang)約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的小鼠腓(fei)腸肌經α-Sarcometric actin免(mian)疫熒光鑒定(ding)，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵母(mu)和(he)真菌等。

本(ben)公(gong)司所(suo)有產品僅(jin)供科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科學(xue)實(shi)驗(yan)外的(de)使(shi)用(yong)！

包被(bei)條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率(lv) 每(mei)2-3天換液(ye)壹次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁(bi)

細(xi)胞(bao)形(xing)態 成纖(xian)維細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特(te)性 可(ke)傳(chuan)3-5代(dai)左(zuo)右

消化液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養條件 氣(qi)相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準備：準備無菌的培養皿(min)、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離心管、手(shou)術器(qi)械(xie)等，並進行(xing)高壓(ya)滅菌或其(qi)他(ta)合(he)適的(de)消毒(du)處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準備：配制或購買合(he)適的(de)培養基(ji)、消化酶（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶等）、胎(tai)牛血清(qing)、雙抗(kang)等試(shi)劑，確保其(qi)無菌且在有效期內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或組(zu)織(zhi)來源準備：根據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並進行(xing)相應(ying)的麻醉或處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織(zhi)；或從(cong)已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫(ku)中獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌條件下(xia)，迅速(su)取(qu)出目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除(chu)多(duo)余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取出的(de)組織(zhi)用(yong)預冷的(de)無菌PBS沖(chong)洗數(shu)次，以去(qu)除(chu)血液(ye)和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以便(bian)後(hou)續消化。

細(xi)胞(bao)分(fen)離

1. 消化：將(jiang)剪碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊放入含有適量(liang)消化酶的(de)離心管中，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或培養箱中消化壹段時(shi)間(jian)。期間(jian)可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管，使(shi)消化更均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當組(zu)織(zhi)塊大部(bu)分(fen)被消化成單(dan)細(xi)胞(bao)懸液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時(shi)，加入含血清(qing)的培養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離心：用細(xi)胞(bao)篩過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除(chu)未消化的組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察與(yu)檢測

1. 日(ri)常(chang)觀察：每(mei)天用(yong)倒置顯微鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀態、密(mi)度(du)等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)的變化情況，如發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或異(yi)常(chang)，及(ji)時采(cai)取(qu)相應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與(yu)活(huo)力檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼藍染(ran)色等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力檢(jian)測，以了解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長情況和(he)健(jian)康(kang)狀態。

壹、取材(cai)與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或非(fei)營養環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽水(shui)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇(ze)

- 根據(ju)組織(zhi)類(lei)型選(xuan)擇(ze)消化酶，避(bi)免(mian)過度消化導致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴(yan)格控(kong)制(zhi)（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通(tong)過顯微鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)解離狀態。

二、培養條件優(you)化

1. 培養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含血清(qing)或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)需(xu)添加胰(yi)島素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換培養基(ji)品牌(pai)或批次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)適應(ying)壓(ya)力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較弱，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培養皿(min)（如膠原(yuan)蛋(dan)白、多(duo)聚賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度匯合(he)會導致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制和(he)分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控制

1. 無菌操作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹次性耗(hao)材，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養基(ji)中可(ke)添加雙抗(kang)，但(dan)長期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測支(zhi)原體(ti)汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每(mei)天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度(du)及(ji)培養基(ji)顏(yan)色，及(ji)時更(geng)換培養基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天換液(ye)壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎(sui)片增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提示汙(wu)染(ran)或營養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分(fen)裂次(ci)數(shu)有限(xian)（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時凍(dong)存早(zao)期代(dai)次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血清(qing)（或專用凍(dong)存培養基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫後(hou)液氮保存。