【概(gai)要(yao)描(miao)述】小(xiao)鼠鞏膜(mo)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：L363人(ren)多(duo)發性骨(gu)髓瘤細(xi)胞(bao)大鼠(shu)原(yuan)代(dai)椎體(ti)終(zhong)板軟骨幹(gan)細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠骨髓內皮(pi)細(xi)胞(bao)綿(mian)羊原代(dai)骨骼(ge)肌細(xi)胞(bao)兔(tu)原(yuan)代(dai)前列腺(xian)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)人(ren)原代(dai)陰道壁成纖(xian)維細(xi)胞(bao)iPS細(xi)胞(bao)小(xiao)鼠原代(dai)視網(wang)膜(mo)muller細(xi)胞(bao)綿(mian)羊原代(dai)卵巢顆(ke)粒細(xi)胞(bao)人(ren)原代(dai)肺微(wei)血管(guan)平滑(hua)肌細(xi)胞(bao)

小(xiao)鼠鞏膜(mo)成(cheng)纖維分離自鞏(gong)膜(mo)組織，鞏膜(mo)是(shi)眼球(qiu)壁的主(zhu)要(yao)組成之(zhi)壹。是(shi)眼球(qiu)纖(xian)維膜(mo)的(de)後5/6部(bu)分。前方(fang)聯(lian)接角膜(mo)，後方(fang)與視神(shen)經(jing)的(de)鞘(qiao)膜(mo)延(yan)續。鞏(gong)膜(mo)在(zai)視神(shen)經穿出(chu)部(bu)附(fu)近最厚，愈(yu)前愈(yu)薄，在肌腱附(fu)著(zhe)處(chu)又(you)復(fu)增厚。其與角膜(mo)交(jiao)界處(chu)，外面有(you)環形(xing)的(de)角(jiao)膜(mo)溝(gou)，深(shen)部(bu)有(you)鞏膜(mo)靜脈(mai)竇。小(xiao)兒(er)的鞏(gong)膜(mo)為(wei)淺(qian)藍(lan)色(se)，成(cheng)年(nian)為(wei)白(bai)色，老(lao)年因脂(zhi)肪(fang)沈(chen)著而(er)帶(dai)黃(huang)色(se)。鞏(gong)膜(mo)結(jie)構堅韌(ren)，有(you)支(zhi)持和保(bao)護(hu)眼內(nei)組織的作用(yong)。成纖維細(xi)胞(bao)是(shi)疏(shu)松結(jie)締組織的主(zhu)要(yao)細(xi)胞(bao)成(cheng)分，由胚(pei)胎(tai)時(shi)期(qi)的(de)間充(chong)質(zhi)細(xi)胞(bao)分化(hua)而(er)來(lai)；成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)較(jiao)大，輪廓清楚，多(duo)為(wei)突(tu)起的(de)紡(fang)錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的(de)扁(bian)平狀(zhuang)結(jie)構，其細(xi)胞(bao)核呈規則的(de)卵(luan)圓(yuan)形(xing)，核仁大而(er)明(ming)顯(xian)。成纖(xian)維細(xi)胞(bao)功(gong)能(neng)活(huo)動旺(wang)盛，細(xi)胞(bao)質(zhi)嗜(shi)弱堿性，具明(ming)顯(xian)的蛋白質(zhi)合成和分泌(mi)活(huo)動，在(zai)壹定條件(jian)下，它可(ke)以(yi)實(shi)現(xian)跟(gen)纖維細(xi)胞(bao)的(de)互相(xiang)轉(zhuan)化(hua)；成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)對(dui)不(bu)同(tong)程(cheng)度(du)的(de)細(xi)胞(bao)變(bian)性、壞(huai)死和組織缺損(sun)的(de)修(xiu)復(fu)有(you)著十(shi)分重要(yao)的作用(yong)。剛分離的(de)肺成纖維細(xi)胞(bao)呈(cheng)圓(yuan)形(xing)、折(zhe)光(guang)性良(liang)好，懸(xuan)浮(fu)於(yu)培養基中(zhong)。30min細(xi)胞(bao)貼(tie)壁，其中(zhong)部(bu)分開始(shi)伸(shen)出偽(wei)足(zu)，表(biao)現(xian)為(wei)小(xiao)的突起；6h後細(xi)胞(bao)基(ji)本(ben)貼(tie)壁wan全(quan)，伸(shen)展成(cheng)梭(suo)形(xing)，胞(bao)核清晰，分布較(jiao)均勻，散(san)在(zai)生(sheng)長(chang)，不(bu)聚集成團；細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)迅(xun)速(su)，5-7天即(ji)呈融(rong)合狀(zhuang)態(tai)，細(xi)胞(bao)排(pai)列(lie)緊密，有(you)的交(jiao)叉重疊生(sheng)長(chang)，平(ping)坦、胞(bao)體(ti)較(jiao)大，細(xi)胞(bao)質(zhi)透明(ming)，細(xi)胞(bao)核較(jiao)大，呈(cheng)橢(tuo)圓(yuan)形(xing)，顏色淡。細(xi)胞(bao)融(rong)合，並(bing)彼此連(lian)接成網(wang)狀(zhuang)；細(xi)胞(bao)呈(cheng)突(tu)起的(de)紡(fang)錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的(de)扁(bian)平分布。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室分離的(de)小(xiao)鼠鞏膜(mo)成(cheng)纖維采用混合膠(jiao)原(yuan)酶(mei)消化(hua)法(fa)結(jie)合差(cha)速(su)貼(tie)壁法制(zhi)備(bei)而(er)來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗(yan)室分離的(de)小(xiao)鼠鞏膜(mo)成(cheng)纖維經Vimentin免疫(yi)熒光鑒定(ding)，純度(du)可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等。

本(ben)公(gong)司(si)所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科學(xue)實驗(yan)，不(bu)做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實驗(yan)外的使用！

培養基 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每(mei)2-3天換液壹次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai) 成纖(xian)維細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性 可(ke)傳(chuan)1-3代(dai)左右(you)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養條件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作

1. 實驗(yan)器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶、移液管、離心(xin)管(guan)、手(shou)術(shu)器械等(deng)，並(bing)進(jin)行(xing)高壓滅菌(jun)或其他(ta)合適(shi)的(de)消毒(du)處理。

2. 試劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合適(shi)的(de)培養基、消化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血清、雙抗(kang)等(deng)試劑，確保(bao)其無菌(jun)且在有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實驗(yan)動物或組織來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據(ju)實驗(yan)需求(qiu)，選擇(ze)合適(shi)的(de)動(dong)物並(bing)進(jin)行(xing)相應的麻(ma)醉或處(chu)死(si)，獲(huo)取所(suo)需組織；或從(cong)已(yi)有(you)的組織樣本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織。

取材(cai)與處理(li)

1. 取材(cai)：在無(wu)菌(jun)條件(jian)下，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標(biao)組織，盡量減少(shao)對(dui)組織的損(sun)傷，並(bing)去(qu)除(chu)多(duo)余的脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締組織等非(fei)目的(de)組織。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出的組織用預(yu)冷(leng)的(de)無菌(jun)PBS沖洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除(chu)血液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組織剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後續消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組織塊(kuai)放入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化(hua)酶(mei)的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖床或培養箱中(zhong)消化(hua)壹段(duan)時(shi)間。期間可(ke)輕輕搖晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當(dang)組織塊(kuai)大部(bu)分被消化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)或小(xiao)細(xi)胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血清的培養基終(zhong)止消化(hua)。

3. 過濾(lv)與離心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，去除(chu)未消化(hua)的(de)組織碎(sui)片(pian)，然(ran)後將(jiang)濾(lv)液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀(guan)察：每(mei)天用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化(hua)情況(kuang)，如(ru)發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染或異常，及時(shi)采(cai)取(qu)相應措施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與活(huo)力檢(jian)測(ce)：在需要(yao)時(shi)，可(ke)采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活(huo)力檢(jian)測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情況(kuang)和健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹、取材(cai)與分離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組織取材(cai)後需立即(ji)處理(li)，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴露(lu)於(yu)室(shi)溫或非(fei)營養環境(jing)。

- 使用無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水沖洗(xi)組織，去除(chu)血液(ye)、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根據(ju)組織類型選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避(bi)免過(guo)度(du)消化(hua)導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消化(hua)時(shi)間需嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養基選擇(ze)

- 使用含(han)血清或特(te)定生(sheng)長(chang)因子的(de)培養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻繁更換培養基品(pin)牌或批(pi)次，減少(shao)細(xi)胞(bao)適(shi)應壓力。

2. 貼壁與傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁能力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包被(bei)培養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原(yuan)蛋白、多(duo)聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密度(du)建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度(du)匯(hui)合會(hui)導(dao)致接觸抑制(zhi)和分化(hua)。

三(san)、汙染控制(zhi)

1. 無菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超凈臺(tai)操作，使用壹次性耗材(cai)，避免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培養基中(zhong)可(ke)添(tian)加(jia)雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使用可(ke)能(neng)影響細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原(yuan)體(ti)檢(jian)測(ce)

- 定期(qi)檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及時(shi)丟棄細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每(mei)天檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密度(du)及培養基顏色，及時(shi)更(geng)換培養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天換液壹次）。

- 異常形(xing)態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示汙染或營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分裂次數(shu)有(you)限（壹般 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍(dong)存早期(qi)代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍(dong)存培養基），梯度(du)降(jiang)溫後液氮(dan)保(bao)存。