【概(gai)要描述(shu)】小(xiao)鼠肝(gan)非(fei)實(shi)質(zhi)細胞(bao)公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：CX-1 (STR)人大(da)腸癌(ai)細(xi)胞(bao)EL4-Luc熒光酶(mei)標記(ji)的小(xiao)鼠淋(lin)巴(ba)瘤細胞(bao)MBT-2-Luc熒(ying)光酶標(biao)記的小(xiao)鼠膀(pang)胱(guang)癌(ai)細(xi)胞A9-Luc熒光(guang)酶(mei)標記的小(xiao)鼠皮(pi)下結(jie)締組(zu)織細(xi)胞(bao)RM-1-Luc熒(ying)光酶標(biao)記的小(xiao)鼠前(qian)列腺(xian)癌(ai)細(xi)胞4T1.2-Luc熒光(guang)酶標(biao)記(ji)的小(xiao)鼠乳(ru)腺(xian)癌細胞(bao)EMT-6-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標記(ji)的小(xiao)鼠乳(ru)腺(xian)癌細胞(bao)Py8119-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標記(ji)的小(xiao)鼠乳(ru)腺(xian)癌細胞(bao)BV2-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標記(ji)

小(xiao)鼠肝(gan)非(fei)實(shi)質(zhi)分(fen)離(li)自肝(gan)臟組(zu)織；肝(gan)臟是身(shen)體內(nei)以(yi)代(dai)謝(xie)功(gong)能(neng)為(wei)主(zhu)的壹個(ge)器官(guan)，並(bing)在(zai)身(shen)體裏(li)面起(qi)著去氧(yang)化、儲(chu)存肝(gan)糖(tang)、分(fen)泌(mi)性蛋白(bai)質(zhi)的合成(cheng)等(deng)作(zuo)用(yong)；肝(gan)臟也制造消化(hua)系統(tong)中之(zhi)膽汁(zhi)。肝臟是機(ji)體(ti)內(nei)臟裏最大(da)的器官(guan)，位於機(ji)體中的腹部位(wei)置(zhi)，在(zai)右側橫(heng)隔(ge)膜之(zhi)下，位(wei)於膽囊之(zhi)前(qian)端且(qie)於右(you)邊(bian)腎(shen)臟的前(qian)方，胃(wei)的上方。肝(gan)臟是機(ji)體(ti)消化(hua)系統(tong)中最大(da)的消化(hua)腺，為壹(yi)紅棕(zong)色(se)的V字形器(qi)官(guan)。肝臟是尿(niao)素合(he)成(cheng)的主要器官，又(you)是新陳代謝(xie)的重(zhong)要器官。肝(gan)臟在機(ji)體(ti)位(wei)置(zhi)和形態(tai)結構：肝(gan)臟位於右(you)上腹，隱藏(zang)在(zai)右側膈下(xia)和肋骨深面(mian)，大(da)部分(fen)肝(gan)為肋弓(gong)所(suo)復(fu)蓋，僅(jin)在腹上區、右肋弓(gong)間露(lu)出(chu)並直接接觸腹前(qian)壁，肝(gan)上面則與(yu)膈及(ji)腹前(qian)壁相接。肝實(shi)質(zhi)細胞(bao)具(ju)有肝功(gong)能(neng)的單位(wei)，是(shi)肝臟的基本(ben)組(zu)成(cheng)單位(wei)之(zhi)壹。肝(gan)非(fei)實(shi)質(zhi)細胞(bao)是(shi)指除了(le)肝(gan)實(shi)質(zhi)細胞(bao)之(zhi)外的細胞(bao)，主要包含了肝竇(dou)內(nei)皮(pi)細胞(bao)、肝星狀細(xi)胞(bao)、肝枯(ku)否(fou)細胞。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司實(shi)驗室分(fen)離(li)的小(xiao)鼠肝(gan)非(fei)實(shi)質(zhi)采用(yong)取(qu)肝臟灌(guan)流、膠原酶(mei)消化(hua)、密(mi)度梯度離(li)心法(fa)制備(bei)而(er)來制備(bei)而(er)來，細(xi)胞總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司實(shi)驗室分(fen)離(li)的小(xiao)鼠肝(gan)非(fei)實(shi)質(zhi)經過(guo)檢(jian)測，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體(ti)、細菌(jun)、酵母和真菌等(deng)。

本公司所(suo)有產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)學實(shi)驗，不做其(qi)他科(ke)學實(shi)驗外的使用(yong)！

培養(yang)基 含FBS、生長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性 懸(xuan)浮(fu)

細胞形態(tai) 圓形

傳代特(te)性 不(bu)增殖；不(bu)傳代

消化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶

培養(yang)條件(jian) 氣(qi)相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作(zuo)

1. 實(shi)驗器材(cai)準備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌的培養(yang)皿、培養(yang)瓶、移(yi)液管(guan)、離心(xin)管、手(shou)術器械等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓滅菌(jun)或其(qi)他合(he)適(shi)的消毒處理(li)。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配(pei)制或購(gou)買(mai)合適的培養(yang)基、消化(hua)酶（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確保(bao)其(qi)無菌且(qie)在(zai)有效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物或組(zu)織來源準備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求，選擇合適(shi)的動(dong)物並進(jin)行相應(ying)的麻醉或處死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或從(cong)已(yi)有的組(zu)織樣(yang)本庫(ku)中獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材(cai)與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌條(tiao)件(jian)下，迅速取(qu)出目(mu)標組(zu)織，盡(jin)量(liang)減少(shao)對組(zu)織的損傷，並去除多(duo)余(yu)的脂肪(fang)、結(jie)締組(zu)織等(deng)非(fei)目的組(zu)織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的組(zu)織用(yong)預冷(leng)的無菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞(bao)分(fen)離(li)

1. 消化(hua)：將剪碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放(fang)入(ru)含有適量(liang)消化(hua)酶的離心(xin)管中，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或培養(yang)箱中消化(hua)壹段(duan)時間。期間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心(xin)管(guan)，使消化(hua)更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當組(zu)織塊(kuai)大(da)部分(fen)被消化(hua)成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸液(ye)或小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入(ru)含血(xue)清的培養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩過(guo)濾(lv)細胞懸液，去(qu)除未(wei)消化(hua)的組(zu)織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將濾(lv)液以(yi)適(shi)當的轉速(su)離心(xin)，收(shou)集細胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與(yu)檢測

1. 日常觀察(cha)：每天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形態(tai)、生長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等(deng)，記(ji)錄細胞的變化(hua)情況(kuang)，如(ru)發現細(xi)胞(bao)汙(wu)染或異(yi)常，及時采取(qu)相應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計數(shu)與(yu)活(huo)力檢測：在(zai)需(xu)要時，可(ke)采(cai)用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對細(xi)胞(bao)進(jin)行計數(shu)和活(huo)力檢測，以(yi)了(le)解細胞的生長(chang)情況(kuang)和健康狀態(tai)。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立即(ji)處理(li)，避免長(chang)時間暴露(lu)於室(shi)溫或非(fei)營養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無菌 PBS 或生(sheng)理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶選擇

- 根(gen)據(ju)組(zu)織類型(xing)選擇消化(hua)酶，避免(mian)過(guo)度消化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞損傷。

- 消化(hua)時間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)解(jie)離狀態(tai)。

二(er)、培養(yang)條件(jian)優化(hua)

1. 培養(yang)基選擇

- 使(shi)用含血(xue)清或特(te)定(ding)生長(chang)因子的培養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分(fen)細(xi)胞需(xu)添(tian)加胰島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培養(yang)基品(pin)牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁與(yu)傳代

- 原代(dai)細胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要包被培養(yang)皿（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳代時(shi)密(mi)度建議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接觸抑(yi)制和分(fen)化(hua)。

三、汙染(ran)控制

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺操作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性耗材(cai)，避免交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培養(yang)基中可(ke)添(tian)加雙抗，但(dan)長(chang)期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢測

- 定(ding)期檢(jian)測支(zhi)原體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟棄細胞。

四、狀態(tai)監控

1. 日(ri)常觀察(cha)

- 每天(tian)檢(jian)查細(xi)胞形態(tai)、密(mi)度及(ji)培養(yang)基顏(yan)色，及時更換(huan)培養(yang)基（通(tong)常每 2-3 天(tian)換(huan)液壹(yi)次）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎片(pian)增多(duo)）可(ke)能(neng)提示(shi)汙(wu)染或營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳代與(yu)凍存(cun)

- 原代(dai)細胞(bao)分(fen)裂次數(shu)有限(xian)（壹般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存(cun)早(zao)期代(dai)次細胞。

- 凍(dong)存(cun)液建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍(dong)存培養(yang)基），梯度降(jiang)溫後(hou)液氮保(bao)存(cun)。