【概(gai)要(yao)描(miao)述】小(xiao)鼠骨(gu)內(nei)膜間(jian)充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞公司正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：JMSU1膀(pang)胱癌(ai)HS-27A人(ren)骨髓(sui)基(ji)質(zhi)成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞HS-5 (STR)人(ren)骨髓(sui)基(ji)質(zhi)細(xi)胞AMO1 (STR)人(ren)骨髓(sui)漿(jiang)細(xi)胞MUTZ-1 (STR)人(ren)骨髓(sui)增(zeng)生(sheng)異(yi)常(chang)綜(zong)合征(zheng)細(xi)胞A375.S2 (STR)人(ren)黑色(se)瘤細(xi)胞HMY-1
(STR)人(ren)黑色(se)瘤細(xi)胞A375/LUC (STR)人(ren)黑色(se)瘤細(xi)胞HMY-1人(ren)黑色(se)瘤細(xi)胞MNT-1人(ren)黑色(se)瘤細(xi)胞

小鼠(shu)骨內(nei)膜間(jian)充質(zhi)幹(gan)分(fen)離自(zi)股骨(gu)、脛骨(gu)；骨(gu)內膜(mo)是壹(yi)層致密(mi)結締(di)組織膜(mo)，覆蓋(gai)在骨(gu)的(de)表面(mian)（關節面(mian)除外），新鮮(xian)骨(gu)內(nei)膜呈粉紅色(se)，含(han)有豐富的(de)血管(guan)、神經(jing)和成(cheng)骨細(xi)胞。此外，附著於骨(gu)的(de)肌腱、韌(ren)帶於附著部位(wei)都(dou)與(yu)骨內(nei)膜編(bian)織在(zai)壹(yi)起。因(yin)而骨內(nei)膜(mo)與(yu)骨質(zhi)結(jie)合甚(shen)為牢(lao)固。骨內(nei)膜(mo)富含(han)血管(guan)、神經(jing)，通過(guo)骨(gu)質(zhi)的(de)滋養(yang)孔分(fen)布於骨(gu)質(zhi)和(he)骨髓(sui)。骨(gu)內(nei)膜(mo)分(fen)內、外兩層，外層主要(yao)是(shi)粗(cu)大(da)的(de)膠原纖維束，部(bu)分(fen)纖維(wei)穿入(ru)骨(gu)質(zhi)，使(shi)骨內膜固定於骨(gu)面(mian)；內層疏松(song)，含(han)成(cheng)骨細(xi)胞和(he)破骨(gu)細(xi)胞（分(fen)別(bie)具(ju)有產(chan)生(sheng)新骨(gu)質(zhi)和(he)改建骨的(de)功(gong)能）。骨(gu)髓(sui)腔(qiang)和(he)骨(gu)松(song)質(zhi)的(de)網(wang)眼也(ye)襯(chen)著壹(yi)層菲薄的(de)結締組織膜(mo)，叫(jiao)做(zuo)骨膜。骨內膜(mo)的(de)內層和骨(gu)膜有分(fen)化成(cheng)骨細(xi)胞和(he)破骨(gu)細(xi)胞的(de)能力(li)，以(yi)形(xing)成(cheng)新骨(gu)質(zhi)和(he)破壞、改(gai)造已(yi)生(sheng)成(cheng)的(de)骨質(zhi)，所(suo)以對骨(gu)的(de)發生(sheng)、生(sheng)長(chang)、修復(fu)等(deng)具(ju)有重(zhong)要(yao)意義(yi)。骨內(nei)膜間(jian)充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞是(shi)壹(yi)種具有高度自(zi)我(wo)更新能力(li)和(he)多(duo)向分(fen)化潛能的(de)幹(gan)細(xi)胞，可(ke)以向(xiang)骨、軟(ruan)骨(gu)、肌組織、皮(pi)膚(fu)、脂(zhi)肪、神經(jing)等多(duo)種組織分(fen)化，因(yin)此可(ke)以(yi)作為組織工(gong)程中的(de)種子細(xi)胞。骨(gu)內膜(mo)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞的(de)體外培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)要(yao)求較高，在培(pei)養(yang)過(guo)程(cheng)中，受貼(tie)壁(bi)時(shi)間(jian)、種植(zhi)密度(du)、血清含(han)量(liang)、培(pei)養(yang)溫度和(he)培(pei)養(yang)基(ji)pH值等條(tiao)件(jian)的(de)影響(xiang)。
方法簡介(jie)：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)小鼠骨內膜(mo)間(jian)充質(zhi)幹(gan)采用(yong)沖(chong)洗(xi)骨(gu)髓(sui)、消(xiao)化骨內(nei)膜、差速貼(tie)壁(bi)法結合培(pei)養(yang)基(ji)篩(shai)選(xuan)制(zhi)備(bei)而來，細(xi)胞總(zong)量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離的(de)小鼠骨內膜(mo)間(jian)充質(zhi)幹(gan)經CD29、CD44免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達(da)90%以上(shang)，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原體、細(xi)菌、酵母和(he)真(zhen)菌等。

本公司所(suo)有產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做(zuo)其他科學實(shi)驗(yan)外的(de)使用！

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁(bi)

細(xi)胞形(xing)態 成(cheng)纖維(wei)細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代特性(xing) 可傳(chuan)2-3代

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工作

1. 實(shi)驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準備(bei)無菌的(de)培養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶、移液(ye)管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術(shu)器械等(deng)，並進(jin)行(xing)高壓滅(mie)菌或其他(ta)合適的(de)消毒(du)處理(li)。

2. 試劑(ji)準備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買合適的(de)培養(yang)基(ji)、消(xiao)化酶（如(ru)、膠原酶等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清、雙抗(kang)等(deng)試劑(ji)，確保(bao)其無(wu)菌且在有效(xiao)期內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物或(huo)組織來源準備(bei)：根據實(shi)驗(yan)需求，選(xuan)擇合適的(de)動物並(bing)進(jin)行(xing)相(xiang)應的(de)麻醉或處死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需組織；或(huo)從(cong)已(yi)有的(de)組織樣(yang)本庫中獲(huo)取(qu)組織。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件(jian)下，迅速取(qu)出(chu)目(mu)標組織，盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)對組織的(de)損(sun)傷，並(bing)去(qu)除多(duo)余(yu)的(de)脂肪、結締組織等(deng)非目(mu)的(de)組織。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組織用(yong)預冷(leng)的(de)無菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去除血(xue)液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切：將組織剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊，以便後續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離

1. 消化：將剪碎的(de)組織塊放入(ru)含(han)有適量(liang)消(xiao)化酶的(de)離心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒溫搖床或(huo)培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)。期間(jian)可輕(qing)輕搖(yao)晃(huang)離(li)心(xin)管(guan)，使消(xiao)化更均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消(xiao)化：當組織塊大(da)部(bu)分(fen)被消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加入(ru)含(han)血清的(de)培養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心(xin)：用細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未(wei)消(xiao)化的(de)組織碎(sui)片(pian)，然後(hou)將濾(lv)液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收集細(xi)胞沈(chen)澱。

細(xi)胞觀(guan)察與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)：每天(tian)用倒置(zhi)顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞的(de)形態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密度等(deng)，記錄細(xi)胞的(de)變化情況(kuang)，如(ru)發現細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異(yi)常(chang)，及時(shi)采取(qu)相應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計(ji)數與(yu)活力(li)檢(jian)測(ce)：在需要(yao)時(shi)，可采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍(lan)染色(se)等方(fang)法對細(xi)胞進(jin)行(xing)計(ji)數和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)，以了(le)解細(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況和健康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速操作

- 組織取(qu)材後(hou)需立即處(chu)理，避免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴露(lu)於室(shi)溫或非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用(yong)無菌 PBS 或生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組織，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消化酶選(xuan)擇

- 根據組織類型(xing)選(xuan)擇消化酶，避免(mian)過(guo)度(du)消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消化時(shi)間(jian)需嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可(ke)通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細(xi)胞解(jie)離狀(zhuang)態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇

- 使用(yong)含(han)血清或特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子的(de)培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞需添加胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌或批次(ci)，減(jian)少(shao)細(xi)胞適應壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞貼(tie)壁能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需要(yao)包(bao)被培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原蛋白(bai)、多聚(ju)賴氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度建(jian)議控制(zhi)在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分(fen)化。

三(san)、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操作

- 全程(cheng)在超(chao)凈臺(tai)操作，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗材，避免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培養(yang)基(ji)中可(ke)添加雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期(qi)使用可能影(ying)響(xiang)細(xi)胞活(huo)性。

2. 支(zhi)原體檢測(ce)

- 定期(qi)檢測(ce)支(zhi)原體汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後需及時(shi)丟棄細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察(cha)

- 每天(tian)檢查細(xi)胞形(xing)態、密(mi)度及培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及時(shi)更換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如(ru)細(xi)胞變(bian)圓、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可(ke)能提示汙(wu)染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存(cun)

- 原代細(xi)胞分(fen)裂次(ci)數(shu)有限（壹(yi)般 5-10 代），需及時(shi)凍存(cun)早期代次(ci)細(xi)胞。

- 凍存(cun)液(ye)建(jian)議使用(yong) DMSO+血清（或專用凍存(cun)培養(yang)基(ji)），梯度降溫後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。