【概要描述】小(xiao)鼠海(hai)綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)公司正(zheng)在出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：UM-UC-3膀胱癌(ai)MOLT-3 (ATCCCRL-1552)人(ren)急性T淋(lin)巴(ba)細胞(bao)J.gamma1 (STR)人(ren)急性T細(xi)胞(bao)EL-1、SC、PH (STR)人(ren)急性單(dan)核細(xi)胞OCI-M2人(ren)急性粒細(xi)胞(bao)MT-4 (STR)人(ren)急性淋(lin)巴(ba)母(mu)細(xi)胞CEM/C1 (STR)人(ren)急性淋(lin)巴(ba)細胞(bao)I2.1人(ren)急性淋(lin)巴(ba)細胞(bao)11人(ren)急性淋(lin)巴(ba)細胞(bao)HAL-01人(ren)急性淋(lin)巴(ba)細胞(bao)

本公(gong)司所(suo)有產(chan)品(pin)僅供科(ke)學(xue)實(shi)驗，不(bu)做其他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗外(wai)的使用(yong)！

小(xiao)鼠海(hai)綿體內皮(pi)分離自(zi)海(hai)綿體組織；陰(yin)莖(jing)海綿體是由(you)海(hai)綿狀的(de)小(xiao)梁(liang)和(he)腔隙構(gou)成(cheng)的(de)血(xue)竇結(jie)構(gou)，它(ta)主(zhu)要包(bao)括(kuo)海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)、平滑肌細胞和(he)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)3種細(xi)胞(bao)成(cheng)分。其中(zhong)平滑肌細胞和(he)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)鑲嵌於(yu)海綿體細胞外基(ji)質(zhi)的(de)膠原中，而(er)海(hai)綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)則覆蓋(gai)於(yu)海綿體血(xue)竇的(de)腔面，僅占(zhan)海(hai)綿體組織的(de)2.8%。在消化海綿體組織時(shi)，膠原酶(mei)的作(zuo)用(yong)主(zhu)要是松(song)解(jie)海(hai)綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)與(yu)基(ji)膜的(de)聯系，破(po)壞海(hai)綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)間的(de)緊(jin)密連(lian)接。如(ru)果消化時(shi)間延長(chang)或(huo)膠(jiao)原(yuan)酶(mei)濃(nong)度(du)過(guo)大(da)，平滑肌細胞和(he)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)也將被消化下來，從而影響(xiang)海綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)的純(chun)度(du)。因此(ci)，比(bi)較(jiao)篩選合適的(de)膠(jiao)原酶(mei)濃(nong)度(du)和(he)消化時(shi)間是(shi)成(cheng)功(gong)分離海(hai)綿體內皮(pi)細(xi)胞(bao)的關鍵。
方法簡(jian)介：

公司實(shi)驗室(shi)分離的(de)小(xiao)鼠海(hai)綿體內皮(pi)采(cai)用(yong)混合酶(mei)消化法結合機(ji)械分離法(fa)、並用(yong)內皮(pi)細(xi)胞(bao)專用(yong)培養(yang)基(ji)培養(yang)篩選制備(bei)而(er)來，細(xi)胞(bao)總量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公司實(shi)驗室(shi)分離的(de)小(xiao)鼠海(hai)綿體內皮(pi)經(jing)CD31免疫熒光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度(du)可達(da)90%以上(shang)，且不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真(zhen)菌(jun)等(deng)。

包(bao)被(bei)條(tiao)件 PLL（0.1mg/ml），明(ming)膠（0.1%）

培養(yang)基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率 每2-3天換(huan)液壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁

細胞形態(tai) 內皮(pi)細(xi)胞(bao)樣

傳代(dai)特(te)性 可傳2-3代(dai)

消化液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養(yang)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準(zhun)備：準備無菌(jun)的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管(guan)、離心管(guan)、手術器械(xie)等(deng)，並進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其他(ta)合適的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑準備(bei)：配制或(huo)購(gou)買合適的(de)培養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛血(xue)清、雙抗等(deng)試劑，確保(bao)其無菌(jun)且(qie)在有效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織來源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗需(xu)求，選擇合適的(de)動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相應的麻醉(zui)或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需組織；或(huo)從已有(you)的(de)組織樣(yang)本庫(ku)中獲(huo)取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無菌(jun)條(tiao)件下，迅速(su)取(qu)出目(mu)標組織，盡量(liang)減(jian)少對組織的(de)損(sun)傷，並去除多余的(de)脂(zhi)肪、結締(di)組織等(deng)非目(mu)的組織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出的(de)組織用(yong)預(yu)冷的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以去除血(xue)液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將組織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消化。

細胞分離

1. 消化：將剪碎(sui)的組織塊(kuai)放(fang)入(ru)含有(you)適量(liang)消化酶(mei)的離(li)心(xin)管(guan)中，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中消化壹(yi)段(duan)時(shi)間。期(qi)間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心管(guan)，使消化更均勻。

2. 終止消化：當組織塊(kuai)大(da)部(bu)分被消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加入(ru)含血(xue)清的(de)培養(yang)基(ji)終止消化。

3. 過(guo)濾與(yu)離(li)心：用(yong)細胞(bao)篩(shai)過(guo)濾細胞(bao)懸(xuan)液，去除未消化的組織碎(sui)片，然後(hou)將濾液以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈澱(dian)。

細胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)：每天用(yong)倒(dao)置顯微(wei)鏡觀(guan)察(cha)細胞的形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度(du)等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的(de)變(bian)化情(qing)況，如(ru)發(fa)現細胞汙染(ran)或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采取(qu)相應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計數(shu)與(yu)活(huo)力(li)檢測(ce)：在需要時(shi)，可采用(yong)臺盼藍染(ran)色(se)等(deng)方法對細(xi)胞進行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活(huo)力(li)檢測(ce)，以(yi)了解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和(he)健康狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織取(qu)材(cai)後(hou)需立(li)即處(chu)理(li)，避免長(chang)時(shi)間暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環(huan)境(jing)。

- 使用(yong)無菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)組織，去除血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選擇

- 根(gen)據組織類型選擇消化酶(mei)，避免過(guo)度(du)消化導致細胞損傷(shang)。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴(yan)格控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可(ke)通過(guo)顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞解離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條件優化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選擇

- 使用(yong)含血(xue)清或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需(xu)添加胰島素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁更換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌或批(pi)次，減(jian)少細(xi)胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細胞(bao)貼壁能力(li)較(jiao)弱，可(ke)能需(xu)要包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋白、多聚賴氨酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會(hui)導致(zhi)接觸(chu)抑制和(he)分化。

三、汙染(ran)控(kong)制

1. 無菌(jun)操(cao)作(zuo)

- 全程在超凈(jing)臺操(cao)作(zuo)，使用(yong)壹(yi)次性耗材(cai)，避免交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可(ke)添加雙抗，但(dan)長(chang)期(qi)使用(yong)可能影響(xiang)細胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支原(yuan)體汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及時(shi)丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀態(tai)監控

1. 日常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每天檢查(zha)細胞(bao)形態(tai)、密度(du)及培養(yang)基(ji)顏色(se)，及(ji)時(shi)更換(huan)培養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次）。

- 異常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多）可(ke)能提(ti)示汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍存早期(qi)代(dai)次細胞。

- 凍存液建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專用(yong)凍存培養(yang)基(ji)），梯度(du)降溫後(hou)液氮(dan)保(bao)存。