【概(gai)要(yao)描(miao)述】小鼠骺軟(ruan)骨細胞(bao)公(gong)司正在出(chu)售的產(chan)品：VM-CUB-1膀(pang)胱(guang)癌(ai)BHT101 (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)HTh-7 (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)Hth83 (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)KHM-5M (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)KMH-2 (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)KTC-1 (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)Ocut-2C (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)C643 (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)ARO (STR)人(ren)甲狀(zhuang)腺癌細(xi)胞(bao)

小鼠骺軟(ruan)骨分離自骨骺生(sheng)長(chang)板(ban)；骨骺生(sheng)長(chang)板(ban)位(wei)於長(chang)骨兩(liang)端骨骺和(he)骨幹之(zhi)間的軟(ruan)骨組織(zhi)，其中的骺軟(ruan)骨細胞(bao)可分裂(lie)、成熟、肥大(da)，最終被(bei)骨組織(zhi)所替(ti)換，對於長(chang)骨生長(chang)具有(you)重(zhong)要作(zuo)用。幼(you)稚(zhi)的骺軟(ruan)骨細胞(bao)位(wei)於軟(ruan)骨組織(zhi)的表(biao)層(ceng)，單(dan)個分布、體積(ji)較(jiao)小、呈橢(tuo)圓形，長(chang)軸與軟(ruan)骨表(biao)面平行(xing)，越向(xiang)深層(ceng)的(de)骺軟(ruan)骨細胞(bao)體積(ji)之(zhi)間增大(da)呈(cheng)圓形，細胞(bao)核(he)圓形或(huo)卵圓形，染色(se)淺(qian)，細(xi)胞(bao)質弱(ruo)嗜(shi)堿(jian)性，常見數(shu)量不(bu)壹的脂滴。成(cheng)熟的骺軟(ruan)骨細胞(bao)多2-8個成群(qun)分布於軟(ruan)骨陷(xian)窩內(nei)，這些(xie)骺軟(ruan)骨細胞(bao)由同(tong)壹(yi)個母細(xi)胞(bao)分裂(lie)增殖而成，稱(cheng)為(wei)同源(yuan)細胞(bao)群(qun)。電(dian)鏡下(xia)，骺軟(ruan)骨細胞(bao)有突(tu)起(qi)和(he)皺褶，細胞(bao)質內(nei)有大(da)量的(de)粗(cu)面內(nei)質網和(he)發達的高(gao)爾(er)基復合體及少(shao)量的(de)線粒(li)體。在組(zu)織(zhi)切片中，骺軟(ruan)骨細胞(bao)收縮(suo)為(wei)不規(gui)則(ze)形(xing)，在軟(ruan)骨囊(nang)和(he)細胞(bao)之間出現較大(da)的(de)腔隙(xi)。體外培養的骺軟(ruan)骨細胞(bao)對於研究(jiu)其生理(li)功(gong)能(neng)、藥(yao)物作(zuo)用以(yi)及各(ge)種(zhong)致(zhi)病(bing)因素(su)作用下的(de)病(bing)理(li)生理(li)改變(bian)具重(zhong)要(yao)意(yi)義。
方法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分離的小鼠骺軟(ruan)骨采(cai)用膠原(yuan)酶-中性dan白酶聯合消(xiao)化(hua)並軟(ruan)骨細胞(bao)專用培養基培養篩(shai)選制備(bei)而來，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量檢(jian)測：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分離的小鼠骺軟(ruan)骨經Ⅱ型膠原(yuan)蛋白免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純度(du)可達90%以(yi)上，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細菌、酵母(mu)和(he)真菌等。

本(ben)公(gong)司所有產(chan)品僅供科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其他科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外的使(shi)用！

培養基 含(han)FBS、生長(chang)添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換液頻(pin)率 每3-4天換液壹(yi)次(ci)

生長(chang)特(te)性 貼壁

細胞(bao)形態 梭形(xing)、多角(jiao)形(xing)

傳(chuan)代(dai)特(te)性 可傳(chuan)2-3代(dai)左(zuo)右

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋白酶

培養條件 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準備：準(zhun)備無(wu)菌的培(pei)養皿、培(pei)養瓶、移液管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器(qi)械等，並進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其他合適的消(xiao)毒處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準備：配制或(huo)購(gou)買(mai)合適的培養基、消(xiao)化(hua)酶（如、膠原(yuan)酶等）、胎牛血(xue)清(qing)、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確保(bao)其無菌且在(zai)有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動物(wu)或(huo)組織(zhi)來源(yuan)準備(bei)：根據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇合適的動物並進(jin)行(xing)相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或(huo)處死，獲取所(suo)需組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有(you)的(de)組織(zhi)樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組織(zhi)。

取材(cai)與處理(li)

1. 取材(cai)：在無菌條件下，迅速取出目標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量減少(shao)對組織(zhi)的損傷，並去(qu)除(chu)多余(yu)的脂肪、結(jie)締組(zu)織(zhi)等非目的組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將(jiang)取(qu)出的(de)組(zu)織(zhi)用預冷的(de)無(wu)菌PBS沖洗數(shu)次，以(yi)去(qu)除(chu)血液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便後續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化(hua)酶的離心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間。期間可輕輕搖(yao)晃離心(xin)管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止消(xiao)化(hua)：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸液或(huo)小細胞(bao)團時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培養基終止消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與離心：用細胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸液，去(qu)除(chu)未消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎片，然後將(jiang)濾(lv)液以(yi)適當(dang)的轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收集(ji)細胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測

1. 日(ri)常觀(guan)察：每天用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡觀(guan)察細胞(bao)的形(xing)態、生長(chang)狀(zhuang)態、密度(du)等，記(ji)錄細胞(bao)的變(bian)化(hua)情(qing)況，如發現細胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異常，及時(shi)采(cai)取相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與活力(li)檢(jian)測：在需(xu)要(yao)時(shi)，可采(cai)用臺盼(pan)藍染色等方(fang)法對細胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和(he)活力(li)檢(jian)測，以(yi)了解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況和(he)健康狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材與分離

1. 快(kuai)速操(cao)作

- 組織(zhi)取材後需立(li)即處理(li)，避(bi)免長(chang)時(shi)間暴露(lu)於室溫(wen)或(huo)非營養環境(jing)。

- 使用無菌 PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水沖洗組織(zhi)，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇

- 根據組織(zhi)類型選擇消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細胞(bao)損傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間需嚴(yan)格控(kong)制（通(tong)常 10-30 分鐘），可通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態。

二、培養條件優化(hua)

1. 培養基選擇

- 使用含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特定(ding)生長(chang)因子的(de)培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞(bao)需添(tian)加胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避(bi)免頻(pin)繁更(geng)換培養基品牌或(huo)批次(ci)，減少(shao)細胞(bao)適應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要包(bao)被(bei)培養皿（如膠原(yuan)蛋白、多聚(ju)賴氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合會導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑(yi)制和(he)分化(hua)。

三(san)、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無菌操(cao)作

- 全程(cheng)在超(chao)凈臺操(cao)作，使(shi)用壹次(ci)性耗(hao)材，避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養基中可添加雙(shuang)抗，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用可能(neng)影響細胞(bao)活性。

2. 支原(yuan)體檢(jian)測

- 定(ding)期檢(jian)測支原(yuan)體汙(wu)染(ran)（如 PCR 法），汙(wu)染(ran)後需及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每天檢(jian)查(zha)細胞(bao)形態、密度(du)及培(pei)養基顏色，及時(shi)更(geng)換(huan)培養基（通常每 2-3 天換液壹(yi)次(ci)）。

- 異常形態（如細胞(bao)變(bian)圓、碎片增多）可能(neng)提(ti)示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍(dong)存

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數(shu)有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及時(shi)凍(dong)存早(zao)期代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存液建(jian)議使(shi)用 DMSO+血清(qing)（或(huo)專用凍(dong)存培(pei)養基），梯(ti)度(du)降溫(wen)後液氮保存(cun)。