【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】小(xiao)鼠表皮(pi)成纖維(wei)細胞(bao)公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：647-V膀胱(guang)癌XWLC-05人(ren)肺(fei)腺(xian)癌細胞(bao)XWLC-05+GFP人(ren)肺(fei)腺(xian)癌細胞(bao)EPLC272H人(ren)肺(fei)腺(xian)癌細胞(bao)LTEP-α-2人(ren)肺(fei)腺(xian)癌細胞(bao)SPC-A1人(ren)肺(fei)腺(xian)癌細胞(bao)HCC-1833人(ren)肺(fei)腺(xian)癌細胞(bao)A549/Tax人(ren)肺(fei)腺(xian)癌耐(nai)藥性細胞(bao)Hep 3B2.1-7人(ren)肝(gan)癌細胞(bao)Huh7.5.1 (STR)人(ren)肝(gan)癌細胞(bao)

小(xiao)鼠(shu)表皮(pi)成纖維(wei)分離(li)自皮(pi)膚組(zu)織；表(biao)皮(pi)位於(yu)動物皮(pi)膚的(de)外(wai)層(ceng)，由胚胎(tai)時期(qi)外(wai)胚層(ceng)形成(cheng)，具(ju)有抗摩擦和抗損傷(shang)的作(zuo)用。表(biao)皮(pi)是(shi)皮(pi)膚的(de)淺層(ceng)結構(gou)，由(you)復(fu)層(ceng)扁平(ping)上皮(pi)構(gou)成(cheng)。從(cong)基底(di)層(ceng)到表面可分為(wei)五(wu)層(ceng)，即基底(di)層(ceng)、棘(ji)層(ceng)、顆粒層(ceng)、透(tou)明(ming)層(ceng)和角質(zhi)層(ceng)。成纖維(wei)細胞(bao)（Fibroblast）是(shi)疏(shu)松(song)結締(di)組織(zhi)的主要細胞(bao)成(cheng)分，由(you)胚胎(tai)時期(qi)的(de)間(jian)充(chong)質(zhi)細胞(bao)分化而(er)來(lai)。成纖維(wei)細胞(bao)較(jiao)大(da)，輪廓(kuo)清(qing)楚(chu)，多為(wei)突(tu)起的(de)紡(fang)錘形(xing)或(huo)星形(xing)的扁平(ping)狀結構(gou)，其(qi)細胞(bao)核(he)呈(cheng)規則(ze)的卵圓(yuan)形(xing)，核(he)仁(ren)大(da)而明(ming)顯。成纖維(wei)細胞(bao)功(gong)能(neng)活動旺盛，細胞(bao)質(zhi)嗜(shi)弱堿性(xing)，具(ju)明(ming)顯的蛋白(bai)質(zhi)合(he)成(cheng)和分泌(mi)活動，在(zai)壹(yi)定(ding)條(tiao)件(jian)下(xia)，它可(ke)以(yi)實現跟纖維(wei)細胞(bao)的(de)互相轉(zhuan)化；成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)對(dui)不同(tong)程(cheng)度(du)的(de)細胞(bao)變(bian)性(xing)、壞死和組織缺(que)損的修(xiu)復(fu)有(you)著十分重(zhong)要(yao)的作(zuo)用。剛(gang)分離(li)的(de)表(biao)皮(pi)成纖維(wei)細胞(bao)呈(cheng)圓(yuan)形(xing)、折(zhe)光(guang)性良(liang)好(hao)，懸浮(fu)於(yu)培(pei)養基中。30min細胞(bao)貼壁，其(qi)中部(bu)分開(kai)始(shi)伸出(chu)偽足，表現為(wei)小的突(tu)起；6h後細胞(bao)基本(ben)貼壁wan全(quan)，伸展成梭形，胞(bao)核(he)清(qing)晰(xi)，分布(bu)較(jiao)均(jun)勻，散在(zai)生長，不聚(ju)集成團；細胞(bao)生(sheng)長迅速，5-7天(tian)即呈(cheng)融合(he)狀態，細胞(bao)排(pai)列(lie)緊密(mi)，有的(de)交叉重(zhong)疊(die)生(sheng)長，平(ping)坦、胞體較(jiao)大(da)，細胞(bao)質(zhi)透(tou)明(ming)，細胞(bao)核(he)較(jiao)大(da)，呈(cheng)橢(tuo)圓(yuan)形(xing)，顏(yan)色(se)淡。細胞(bao)融合(he)，並(bing)彼(bi)此(ci)連接成(cheng)網(wang)狀；細胞(bao)呈(cheng)突(tu)起的紡(fang)錘形(xing)或(huo)星形(xing)的扁平(ping)分布(bu)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實驗室分離(li)的(de)小(xiao)鼠(shu)表皮(pi)成纖維(wei)采(cai)用先(xian)中性dan白(bai)酶(mei)消化、後yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠原酶(mei)混合(he)消化法(fa)結合(he)差(cha)速貼壁法(fa)制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司(si)實驗室分離(li)的(de)小(xiao)鼠(shu)表皮(pi)成纖維(wei)經(jing)Vimentin免(mian)疫(yi)熒光(guang)鑒定(ding)，純(chun)度可(ke)達90%以上，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌等(deng)。

本(ben)公(gong)司(si)所有產品僅(jin)供科(ke)學(xue)實驗，不做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實驗外(wai)的使用！

培(pei)養基 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液(ye)頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次

生(sheng)長特性 貼壁

細胞(bao)形(xing)態(tai) 成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特性 可(ke)傳(chuan)3-5代(dai)

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件(jian) 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工作(zuo)

1. 實驗器(qi)材準備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培(pei)養皿、培(pei)養瓶、移液管、離(li)心(xin)管、手術(shu)器械等，並(bing)進(jin)行高壓滅(mie)菌或(huo)其他(ta)合(he)適(shi)的消毒(du)處(chu)理。

2. 試(shi)劑(ji)準備：配制(zhi)或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的培(pei)養基、消化酶(mei)（如(ru)、膠原酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙(shuang)抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確保(bao)其(qi)無菌且(qie)在(zai)有效期(qi)內(nei)。

3. 實驗動物或(huo)組織(zhi)來源準備：根(gen)據(ju)實驗需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動物並(bing)進(jin)行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉或(huo)處死，獲(huo)取(qu)所需組(zu)織(zhi)；或(huo)從(cong)已有的(de)組織樣本(ben)庫中獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材與處理

1. 取(qu)材：在(zai)無菌條(tiao)件(jian)下(xia)，迅(xun)速取(qu)出(chu)目標(biao)組織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損傷(shang)，並去(qu)除(chu)多余(yu)的(de)脂肪、結締(di)組織(zhi)等非(fei)目的組織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組(zu)織用預(yu)冷的無(wu)菌PBS沖洗數次，以去(qu)除(chu)血液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組(zu)織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以便後續(xu)消化。

細胞(bao)分離(li)

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎的組(zu)織(zhi)塊放入(ru)含(han)有適(shi)量(liang)消化酶(mei)的離(li)心(xin)管中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培(pei)養箱(xiang)中消化壹(yi)段時間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖(yao)晃離(li)心(xin)管，使消化更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止消化：當(dang)組(zu)織塊大(da)部(bu)分被(bei)消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸液(ye)或(huo)小細胞(bao)團時，加(jia)入(ru)含(han)血清(qing)的(de)培(pei)養基終(zhong)止消化。

3. 過(guo)濾(lv)與離(li)心(xin)：用細胞(bao)篩(shai)過(guo)濾(lv)細胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除(chu)未消化的(de)組(zu)織碎片(pian)，然後將(jiang)濾(lv)液以適(shi)當的轉(zhuan)速離(li)心(xin)，收(shou)集細胞(bao)沈澱。

細胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每(mei)天(tian)用倒(dao)置顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)的(de)形(xing)態、生長狀態、密(mi)度等(deng)，記(ji)錄細胞(bao)的(de)變(bian)化情(qing)況，如(ru)發現細胞(bao)汙(wu)染或(huo)異(yi)常(chang)，及時采(cai)取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與活力(li)檢測(ce)：在(zai)需要(yao)時，可(ke)采(cai)用臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色(se)等方法(fa)對(dui)細胞(bao)進(jin)行計(ji)數和活力(li)檢測(ce)，以了(le)解細胞(bao)的(de)生(sheng)長情(qing)況和健康狀態。

壹(yi)、取(qu)材與分離(li)

1. 快(kuai)速操作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材後需(xu)立(li)即(ji)處理，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或(huo)非營(ying)養環境。

- 使用無(wu)菌 PBS 或(huo)生理鹽水沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組織(zhi)類型(xing)選擇(ze)消化酶(mei)，避(bi)免(mian)過度消化導致(zhi)細胞(bao)損傷(shang)。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘），可通(tong)過顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)解離(li)狀態。

二、培(pei)養條(tiao)件(jian)優化

1. 培(pei)養基選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清(qing)或(huo)特定(ding)生長因子的(de)培(pei)養基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細胞(bao)需(xu)添(tian)加(jia)胰島(dao)素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更換培(pei)養基品牌(pai)或(huo)批次，減少(shao)細胞(bao)適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細胞(bao)貼壁能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需要(yao)包被培(pei)養皿（如(ru)膠原蛋(dan)白(bai)、多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過度(du)匯合(he)會導致(zhi)接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分化。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制

1. 無(wu)菌操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用壹(yi)次性耗(hao)材，避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染。

- 培(pei)養基中可添(tian)加(jia)雙抗，但(dan)長期使用可(ke)能(neng)影(ying)響細胞(bao)活性(xing)。

2. 支原體(ti)檢測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支原體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法），汙(wu)染後需(xu)及時丟(diu)棄細胞(bao)。

四(si)、狀態監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每(mei)天(tian)檢查細胞(bao)形(xing)態(tai)、密度及培(pei)養基顏(yan)色(se)，及時更(geng)換(huan)培(pei)養基（通(tong)常(chang)每(mei) 2-3 天(tian)換液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態(tai)（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增(zeng)多）可(ke)能(neng)提示(shi)汙(wu)染或(huo)營(ying)養不足。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍存(cun)

- 原代(dai)細胞(bao)分裂次數有(you)限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液建(jian)議(yi)使用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用凍(dong)存(cun)培(pei)養基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫後液(ye)氮保存(cun)。