【概要描(miao)述(shu)】小(xiao)鼠(shu)背(bei)根(gen)神(shen)經元細胞公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：MAC-T牛(niu)乳腺(xian)上皮細(xi)胞CAL-12T人肺(fei)癌(ai)細(xi)胞NCI-H3255人肺(fei)癌(ai)細(xi)胞NCI-H292-LUC-EGFP人肺(fei)癌(ai)細(xi)胞calu-1-luc-EGFP人肺(fei)癌(ai)細(xi)胞LL97A(AlMy)(ATCC CCL-191)人肺(fei)成(cheng)纖維細(xi)胞HPAEC人肺(fei)動(dong)脈(mai)內皮(pi)細(xi)胞PGBE1人肺(fei)巨細胞LTEP-s人肺(fei)鱗(lin)癌細胞NCI-H226-LUC-PURO人肺(fei)鱗(lin)癌細胞

小(xiao)鼠(shu)背(bei)根(gen)神(shen)經元分(fen)離自(zi)脊(ji)椎(zhui)背根(gen)神(shen)經節(jie)；感覺(jiao)神(shen)經母(mu)細胞發出(chu)軸(zhou)突(tu)，呈束(shu)狀，左右對稱(cheng)地從(cong)神(shen)經管的(de)背(bei)部進入(ru)，此(ci)時的(de)脊(ji)神(shen)經節(jie)即改稱(cheng)為背(bei)根神(shen)經節(jie)。神(shen)經系(xi)統(tong)最(zui)基(ji)本的(de)結(jie)構和(he)功(gong)能單(dan)位是(shi)神(shen)經元，即神(shen)經細(xi)胞，其大(da)小(xiao)和(he)外(wai)觀在(zai)中(zhong)樞(shu)神(shen)經系(xi)統(tong)中(zhong)差(cha)異(yi)很大(da)。但都(dou)具有(you)胞體和(he)樹(shu)突(tu)、軸(zhou)突(tu)。胞體又(you)叫核(he)周體(ti)，內含(han)神(shen)經絲(si)、微管、內質(zhi)網(wang)、遊離核(he)糖(tang)體(ti)和(he)壹(yi)個(ge)有明顯(xian)核(he)仁(ren)的(de)核(he)。壹(yi)些(xie)大(da)神(shen)經元突(tu)起的(de)粗面內質(zhi)網(wang)可用(yong)Nissl染(ran)色(se)顯(xian)示(shi)，在(zai)光(guang)鏡下是(shi)灰(hui)藍(lan)色(se)斑塊(kuai)狀(zhuang)，稱(cheng)為尼氏(shi)小(xiao)體(ti)。樹(shu)突(tu)和(he)軸(zhou)突(tu)是(shi)神(shen)經元的(de)突(tu)起，能(neng)在(zai)神(shen)經元之間傳遞(di)電(dian)沖動，突(tu)起的(de)大(da)小(xiao)和(he)形(xing)態(tai)各(ge)不相同(tong)，很難用(yong)常(chang)規的(de)顯(xian)微鏡鑒別(bie)。脊(ji)髓(sui)背(bei)根(gen)神(shen)經節(jie)是(shi)周圍(wei)神(shen)經的(de)主(zhu)要傳入(ru)神(shen)經元，是(shi)感覺(jiao)信號傳導(dao)的(de)中(zhong)繼(ji)站(zhan)。背(bei)根(gen)神(shen)經元細胞的(de)獲取(qu)較為困(kun)難，需要在(zai)盡(jin)可能(neng)短(duan)的(de)時間內通(tong)過解剖(pou)顯(xian)微鏡獲得壹(yi)定量(liang)的(de)背(bei)根(gen)神(shen)經節(jie)組織。神(shen)經組(zu)織體(ti)外(wai)培(pei)養(yang)方(fang)法是(shi)當(dang)代(dai)神(shen)經科(ke)學壹(yi)項很(hen)有價(jia)值(zhi)的(de)研(yan)究(jiu)手(shou)段(duan)，背(bei)根神(shen)經節(jie)富含(han)周圍(wei)神(shen)經系(xi)統(tong)感覺(jiao)神(shen)經元，已廣(guang)泛(fan)用(yong)於(yu)軸(zhou)突(tu)的(de)導(dao)向及再(zai)生(sheng)、中(zhong)樞(shu)及(ji)周圍(wei)神(shen)經系(xi)統(tong)的(de)髓(sui)鞘(qiao)形(xing)成(cheng)、神(shen)經營(ying)養因(yin)子(zi)作用(yong)及(ji)受(shou)體(ti)分(fen)布(bu)、神(shen)經細(xi)胞衰老(lao)機(ji)制(zhi)、基因(yin)治(zhi)療(liao)、組(zu)織工程等神(shen)經科(ke)學的(de)研(yan)究(jiu)。
方(fang)法簡介：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分(fen)離的(de)小(xiao)鼠(shu)背(bei)根(gen)神(shen)經元采用(yong)膠原酶&聯合消(xiao)化(hua)法、神(shen)經元專用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養篩選(xuan)結(jie)合(he)化(hua)學試劑抑制(zhi)法制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢測：

公(gong)司(si)實(shi)驗室分(fen)離的(de)小(xiao)鼠(shu)背(bei)根(gen)神(shen)經元經β-Tubulin免(mian)疫(yi)熒(ying)光鑒定，純度可達90%以上，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵母(mu)和(he)真(zhen)菌等(deng)。

本公(gong)司(si)所(suo)有產(chan)品(pin)僅供科(ke)學實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他科學(xue)實(shi)驗外(wai)的(de)使用(yong)！

包被(bei)條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml）

培養(yang)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻率(lv) 每2-3天(tian)換液壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特性 貼壁

細胞形態(tai) 神(shen)經元細胞樣(yang)

傳代特性 屬(shu)於(yu)終末分(fen)化(hua)細胞；屬(shu)於(yu)不(bu)增殖細胞群(qun)

消化(hua)液 0.25%yi蛋(dan)白酶

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian) 氣(qi)相(xiang)：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工作

1. 實(shi)驗器(qi)材準備(bei)：準(zhun)備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿、培(pei)養瓶、移(yi)液管、離心管、手術器械等(deng)，並(bing)進行高(gao)壓(ya)滅菌或(huo)其他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試劑準備：配(pei)制(zhi)或(huo)購(gou)買合(he)適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基、消(xiao)化(hua)酶（如、膠原酶等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑，確保其(qi)無(wu)菌且(qie)在(zai)有(you)效(xiao)期內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織來(lai)源準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並進行相應的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處死(si)，獲取(qu)所(suo)需組(zu)織；或(huo)從(cong)已有(you)的(de)組(zu)織樣(yang)本庫中獲取(qu)組織。

取(qu)材與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材：在(zai)無(wu)菌條(tiao)件(jian)下，迅速(su)取(qu)出目(mu)標組織，盡(jin)量減(jian)少對(dui)組(zu)織的(de)損(sun)傷(shang)，並去(qu)除多余(yu)的(de)脂(zhi)肪(fang)、結(jie)締(di)組織等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織。

2. 清洗：將取(qu)出的(de)組(zu)織用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)無(wu)菌PBS沖洗數次，以去除血液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將組織剪(jian)成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以便後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞分(fen)離

1. 消(xiao)化(hua)：將剪碎(sui)的(de)組(zu)織塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有(you)適(shi)量消化(hua)酶的(de)離心管中，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱中(zhong)消化(hua)壹(yi)段時間。期(qi)間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心管，使消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終止(zhi)消化(hua)：當組織塊(kuai)大(da)部分(fen)被(bei)消化(hua)成(cheng)單細胞懸液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團(tuan)時，加入(ru)含(han)血清的(de)培(pei)養(yang)基終止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾(lv)與(yu)離心：用(yong)細(xi)胞篩過濾(lv)細(xi)胞懸液，去除未消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織碎(sui)片(pian)，然(ran)後(hou)將濾(lv)液以適當的(de)轉速離心，收集細胞沈澱。

細胞觀察與(yu)檢測

1. 日(ri)常(chang)觀察：每天(tian)用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡觀察細胞的(de)形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等，記(ji)錄細(xi)胞的(de)變(bian)化(hua)情況，如發現(xian)細胞汙染(ran)或(huo)異(yi)常(chang)，及時采取(qu)相應措施。
2. 細(xi)胞計數與(yu)活力(li)檢測：在(zai)需(xu)要時，可采用(yong)臺盼(pan)藍染(ran)色(se)等方(fang)法對細胞進行計數和(he)活力(li)檢測，以了解細胞的(de)生(sheng)長(chang)情況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組(zu)織取(qu)材後(hou)需(xu)立即(ji)處(chu)理(li)，避免長(chang)時間暴(bao)露(lu)於(yu)室溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養環境(jing)。

- 使用(yong)無(wu)菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水(shui)沖洗組(zu)織，去(qu)除血液、雜(za)質(zhi)。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇

- 根據(ju)組(zu)織類型選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶，避免過度消化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間需(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)（通常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過顯(xian)微鏡觀察細胞解離狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基選(xuan)擇

- 使用(yong)含(han)血清或(huo)特定(ding)生(sheng)長(chang)因子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細(xi)胞需添(tian)加胰島素(su)、EGF 等。

- 避免頻繁更(geng)換培(pei)養基(ji)品牌或(huo)批次，減(jian)少細(xi)胞適應壓力(li)。

2. 貼壁與(yu)傳代

- 原代(dai)細胞貼壁能力(li)較弱(ruo)，可能(neng)需(xu)要包被(bei)培養(yang)皿（如膠原蛋(dan)白、多聚(ju)賴(lai)氨酸）。

- 傳代時密(mi)度建議控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯合會(hui)導(dao)致(zhi)接觸抑(yi)制(zhi)和(he)分(fen)化(hua)。

三、汙染(ran)控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操(cao)作

- 全(quan)程在(zai)超(chao)凈臺操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次性耗材，避免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基中可添(tian)加雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期使用(yong)可能(neng)影(ying)響細(xi)胞活性。

2. 支(zhi)原體檢測

- 定期檢測支原體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀察

- 每天(tian)檢查(zha)細(xi)胞形態(tai)、密(mi)度及培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及時更(geng)換培(pei)養基(ji)（通常(chang)每 2-3 天(tian)換液壹(yi)次）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如細(xi)胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多）可能(neng)提(ti)示(shi)汙染(ran)或(huo)營養(yang)不足。

2. 傳代與(yu)凍存

- 原代細胞分(fen)裂(lie)次數有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需及(ji)時凍(dong)存早(zao)期(qi)代次(ci)細胞。

- 凍存液建議使用(yong) DMSO+血清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存培養基），梯度降溫(wen)後(hou)液氮保存。