【概要描(miao)述(shu)】小鼠小腸平滑肌細(xi)胞公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：SNU-C4結腸(chang)癌OAW42細(xi)胞OCI-AML-2細(xi)胞OCUB-F細(xi)胞OCUB-M細(xi)胞OCUM-1細(xi)胞OE21細(xi)胞OMC-1細(xi)胞Onda11(no11)細(xi)胞ONS-76細(xi)胞

本(ben)公(gong)司所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科學實(shi)驗，不(bu)做其(qi)他(ta)科(ke)學實(shi)驗外(wai)的(de)使用！

小鼠小腸平滑肌分離(li)自(zi)小腸組織；小腸位於(yu)腹(fu)中，上(shang)端接(jie)幽(you)門(men)與胃(wei)相(xiang)通，下(xia)端通過闌(lan)門(men)與大(da)腸相(xiang)連，是食物消化(hua)吸(xi)收(shou)的(de)主要場(chang)所。小腸盤曲(qu)於(yu)腹腔內，上(shang)連(lian)胃幽(you)門(men)，下接(jie)盲(mang)腸(chang)，分為十(shi)二指腸(chang)、空(kong)腸(chang)和回腸(chang)三部分。小腸內消化(hua)是至關(guan)重(zhong)要的(de)，因(yin)為食(shi)物經(jing)過小腸內胰(yi)液(ye)、膽(dan)汁和小腸液的(de)化(hua)學性(xing)消化(hua)及(ji)小腸運動(dong)的(de)機械性(xing)消化(hua)後(hou)，基(ji)本上(shang)完成了消化(hua)過程(cheng)，同(tong)時(shi)營養物(wu)質被(bei)小腸粘(zhan)膜吸(xi)收(shou)了。小腸管壁(bi)由(you)粘(zhan)膜、粘(zhan)膜下(xia)層(ceng)、肌層(ceng)和漿(jiang)膜構成。其(qi)結(jie)構特點是管壁(bi)有(you)環(huan)形(xing)皺襞(bi)，粘(zhan)膜有(you)許多(duo)絨毛，絨毛根部的(de)上皮下陷至固有(you)層(ceng)，形成(cheng)管狀的(de)腸腺，其(qi)開(kai)口位(wei)於(yu)絨毛根部之(zhi)間(jian)。絨毛和(he)腸(chang)腺與(yu)小腸的(de)消化(hua)和(he)吸(xi)收(shou)功(gong)能(neng)關(guan)系密(mi)切；構成腸(chang)腺的(de)細(xi)胞有(you)柱狀(zhuang)細(xi)胞、杯(bei)狀(zhuang)細(xi)胞、潘(pan)氏(shi)細(xi)胞和(he)未(wei)分化(hua)細(xi)胞。柱狀(zhuang)細(xi)胞和(he)內(nei)分泌(mi)細(xi)胞與(yu)絨毛上(shang)皮相(xiang)似，接近絨毛的(de)柱狀(zhuang)細(xi)胞與(yu)吸(xi)收細(xi)胞相(xiang)似，絨毛深(shen)部的(de)柱狀(zhuang)細(xi)胞微(wei)絨毛少(shao)而(er)短，不形(xing)成紋狀(zhuang)緣(yuan)。小腸有(you)三種功(gong)能(neng)即消化(hua)、吸(xi)收(shou)和(he)分泌(mi)及(ji)運動(dong)功(gong)能(neng)，其(qi)中(zhong)以(yi)吸(xi)收和分泌(mi)功能(neng)為主(zhu)。平滑肌細(xi)胞的(de)收縮(suo)是負責(ze)腸蠕(ru)動(dong)的(de)動(dong)力(li)，促使(shi)食物(wu)向下(xia)運(yun)動(dong)。小腸平滑肌細(xi)胞原(yuan)代(dai)分離(li)培(pei)養(yang)3天(tian)後，可(ke)見細(xi)胞貼壁(bi)伸(shen)展(zhan)，細(xi)胞形(xing)態(tai)大小不壹，呈(cheng)梭(suo)形、不規(gui)則(ze)形、三角形或(huo)扇形(xing)，核(he)卵圓形、居中(zhong)；2周(zhou)後(hou)細(xi)胞匯(hui)合(he)，多數細(xi)胞伸(shen)展(zhan)呈長梭(suo)形，胞漿(jiang)豐(feng)富(fu)，有(you)分枝(zhi)狀突起，細(xi)胞平行排(pai)列(lie)成單(dan)層(ceng)或(huo)部分區域(yu)多(duo)層(ceng)重(zhong)疊(die)生(sheng)長，高(gao)低起伏(fu)；細(xi)胞密(mi)度低時(shi)，常(chang)交織成網狀(zhuang)；密(mi)度高時(shi)，則排(pai)列(lie)為旋(xuan)渦狀(zhuang)或(huo)柵欄狀(zhuang)。傳(chuan)代(dai)後細(xi)胞生(sheng)長較(jiao)快，4-6天即可(ke)匯合(he)，並(bing)保持(chi)上(shang)述(shu)形態學特征和(he)生(sheng)長特點。小腸平滑肌肉瘤是起源於小腸壁(bi)肌層(ceng)、黏膜下(xia)肌層(ceng)和腸(chang)壁(bi)血(xue)管平滑肌的(de)惡性(xing)腫(zhong)瘤，是小腸結締組織惡(e)性(xing)腫(zhong)瘤中(zhong)最(zui)常(chang)見(jian)的(de)壹種(zhong)。因(yin)此，體(ti)外(wai)小腸平滑肌細(xi)胞的(de)培養對(dui)研(yan)究(jiu)小腸平滑肌肉瘤提(ti)供(gong)了基(ji)礎(chu)和前提。此外(wai)，體外(wai)培養(yang)細(xi)胞，由(you)於影(ying)響因(yin)素(su)較(jiao)為單(dan)壹，是研究(jiu)細(xi)胞功(gong)能(neng)以及(ji)相(xiang)應(ying)的(de)細(xi)胞信(xin)號轉(zhuan)導(dao)機(ji)制的(de)基(ji)礎(chu)。
方法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分離(li)的(de)小鼠小腸平滑肌采(cai)用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠原酶聯合(he)消化(hua)法(fa)結(jie)合(he)差速貼壁(bi)法(fa)制(zhi)備(bei)而來(lai)，細(xi)胞總(zong)量約為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室分離(li)的(de)小鼠小腸平滑肌經(jing)α-SMA免(mian)疫熒光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可(ke)達90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體、細(xi)菌、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌等(deng)。

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天(tian)換(huan)液壹次

生(sheng)長特性(xing) 貼壁(bi)

細(xi)胞形(xing)態(tai) 成(cheng)纖維細(xi)胞樣

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 可(ke)傳(chuan)3代(dai)左右

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備(bei)工作

1. 實(shi)驗器(qi)材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌的(de)培養皿、培養瓶、移液(ye)管、離(li)心(xin)管、手術(shu)器械等，並(bing)進行高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適的(de)消毒處理。

2. 試劑準備(bei)：配制或(huo)購買(mai)合(he)適的(de)培養基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清、雙抗等試劑，確保(bao)其(qi)無菌且在(zai)有(you)效(xiao)期(qi)內。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織來(lai)源準備(bei)：根據實(shi)驗(yan)需求，選擇(ze)合(he)適的(de)動(dong)物(wu)並(bing)進行相(xiang)應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或(huo)處死，獲取(qu)所(suo)需組織；或(huo)從已有(you)的(de)組織樣本庫中獲取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌條(tiao)件下(xia)，迅速(su)取出(chu)目(mu)標組織，盡(jin)量減少(shao)對(dui)組織的(de)損傷(shang)，並(bing)去(qu)除多余(yu)的(de)脂(zhi)肪、結(jie)締組織等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組織。

2. 清洗：將(jiang)取出(chu)的(de)組織用(yong)預(yu)冷的(de)無菌PBS沖洗數次，以去(qu)除血(xue)液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將(jiang)組織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小塊，以便後續(xu)消化(hua)。

細(xi)胞分離(li)

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組織塊放入含有(you)適量消化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心(xin)管中，在37℃恒(heng)溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可(ke)輕輕搖晃(huang)離(li)心(xin)管，使消化(hua)更(geng)均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當組織塊大部分被(bei)消化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)或(huo)小細(xi)胞團時(shi)，加入(ru)含血(xue)清的(de)培養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過濾與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過濾細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，去(qu)除未消化(hua)的(de)組織碎(sui)片，然後將(jiang)濾液(ye)以(yi)適當的(de)轉速離(li)心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察與檢測

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每天用(yong)倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞的(de)形態、生(sheng)長狀(zhuang)態、密度等，記(ji)錄細(xi)胞的(de)變化(hua)情況(kuang)，如發(fa)現(xian)細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采取(qu)相(xiang)應(ying)措施(shi)。
2. 細(xi)胞計(ji)數與活力(li)檢測：在需(xu)要時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色等方法(fa)對(dui)細(xi)胞進行計(ji)數和活力(li)檢測，以了解(jie)細(xi)胞的(de)生(sheng)長情況(kuang)和健(jian)康狀態。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離(li)

1. 快速操作

- 組織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立(li)即處理，避免(mian)長時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於室溫(wen)或(huo)非營養環(huan)境。

- 使(shi)用無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理鹽水(shui)沖洗組織，去(qu)除血(xue)液、雜(za)質。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根據組織類(lei)型(xing)選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度消化(hua)導(dao)致細(xi)胞損(sun)傷(shang)。

- 消化(hua)時(shi)間(jian)需(xu)嚴格控制（通常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可(ke)通過顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培養(yang)條(tiao)件優(you)化(hua)

1. 培(pei)養基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清或(huo)特定(ding)生(sheng)長因(yin)子的(de)培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞需(xu)添(tian)加胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次，減少(shao)細(xi)胞適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代細(xi)胞貼壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可(ke)能(neng)需要包(bao)被(bei)培養皿（如膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多(duo)聚賴氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度建議控制在(zai) 70%-80%，過度匯合(he)會導致接觸抑(yi)制和(he)分化(hua)。

三、汙(wu)染控制

1. 無菌操(cao)作

- 全(quan)程在(zai)超凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹次性(xing)耗(hao)材(cai)，避免(mian)交叉汙(wu)染。

- 培(pei)養基(ji)中可(ke)添加(jia)雙抗，但長期(qi)使用可(ke)能(neng)影響細(xi)胞活性(xing)。

2. 支(zhi)原體(ti)檢測

- 定(ding)期(qi)檢測支原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後需及(ji)時(shi)丟棄細(xi)胞。

四(si)、狀態(tai)監控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢查細(xi)胞形(xing)態(tai)、密度及(ji)培養(yang)基(ji)顏色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液壹次）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞變圓、碎(sui)片增多(duo)）可(ke)能(neng)提示汙(wu)染或(huo)營養不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞分裂(lie)次數有(you)限（壹般 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍存(cun)早期(qi)代次細(xi)胞。

- 凍(dong)存(cun)液建議使用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專用凍(dong)存(cun)培養基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後液(ye)氮(dan)保(bao)存(cun)。