【概要(yao)描(miao)述】小(xiao)鼠結腸(chang)平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞公司(si)正在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：SW403結(jie)腸(chang)癌(ai)OVISE細胞(bao)OVK18細(xi)胞(bao)OVKATE細胞OVMANA細(xi)胞(bao)OVSAHO細胞(bao)OVTOKO細胞(bao)P1HTR細胞(bao)P116細胞P30/OHK細(xi)胞(bao)

小(xiao)鼠結腸(chang)平(ping)滑(hua)肌分離(li)自(zi)結腸(chang)組(zu)織；結(jie)腸(chang)在(zai)右髂(qia)窩(wo)內續於盲腸(chang)，在(zai)第(di)3骶椎(zhui)平(ping)面(mian)連接(jie)直腸(chang)。結(jie)腸(chang)分升(sheng)結腸(chang)、橫(heng)結腸(chang)、降結腸(chang)和(he)乙狀結腸(chang)4部分，大(da)部分固定(ding)於腹後(hou)壁(bi)，結腸(chang)的(de)排列(lie)酷似(si)英(ying)文字(zi)母(mu)“M"，將(jiang)小(xiao)腸(chang)包圍在內。結腸(chang)橫(heng)切面(mian)由內到外依次(ci)為：黏膜（上(shang)皮層、固有層(ceng)、黏膜肌層(ceng)），黏膜下(xia)層（疏(shu)松(song)結締(di)組織(zhi)），肌層(ceng)（內環形(xing)、外縱(zong)行兩層(ceng)平滑(hua)肌），外膜（纖維(wei)膜或(huo)漿膜）。結(jie)腸(chang)平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞主要(yao)分布於黏膜肌層(ceng)和(he)肌層(ceng)的(de)內環形(xing)、外縱(zong)行平滑(hua)肌；結(jie)腸(chang)運(yun)動少而緩慢(man)，對刺(ci)激的(de)反應(ying)也(ye)較遲(chi)緩(huan)。結腸(chang)平(ping)滑(hua)肌在(zai)食(shi)物消(xiao)化(hua)與吸收(shou)、腸(chang)道運(yun)動和(he)物質(zhi)分泌、誘發全(quan)身炎(yan)癥反應(ying)以(yi)及(ji)細(xi)胞內信號轉導途(tu)徑等(deng)研究中起(qi)著重(zhong)要(yao)的(de)作(zuo)用。結腸(chang)平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞原代(dai)分離(li)培(pei)養(yang)3天後(hou)，可見細胞(bao)貼(tie)壁(bi)伸(shen)展(zhan)，細(xi)胞(bao)形(xing)態大(da)小(xiao)不(bu)壹(yi)，呈(cheng)梭(suo)形(xing)、不(bu)規則形(xing)、三角形(xing)或(huo)扇形(xing)，核卵(luan)圓(yuan)形(xing)、居(ju)中；2周(zhou)後(hou)細胞匯(hui)合，多數細(xi)胞伸(shen)展(zhan)呈(cheng)長梭(suo)形(xing)，胞漿豐富(fu)，有分枝(zhi)狀突(tu)起，細(xi)胞平(ping)行排列(lie)成單(dan)層(ceng)或(huo)部分區域(yu)多(duo)層(ceng)重(zhong)疊(die)生(sheng)長，高低起伏；細胞密度低時(shi)，常交(jiao)織成網狀；密度高時(shi)，則(ze)排列(lie)為(wei)旋(xuan)渦(wo)狀或(huo)柵(zha)欄狀。傳代(dai)後(hou)細胞生長較快(kuai)，4-6天即(ji)可匯(hui)合，並保持上(shang)述形(xing)態學特(te)征和(he)生(sheng)長特(te)點。結腸(chang)平(ping)滑(hua)肌運(yun)動活性(xing)受(shou)到神經(jing)遞(di)質(zhi)、胃腸(chang)激素和(he)藥物等(deng)因(yin)素的(de)調節。隨著(zhe)現(xian)代(dai)胃腸(chang)動(dong)力(li)學研究的(de)進展，對(dui)胃腸(chang)運(yun)動的(de)研究已(yi)從器(qi)官、組織水平發展到細(xi)胞(bao)、分子(zi)水平，要求在胃腸(chang)道單(dan)個平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞標(biao)本上(shang)來完(wan)成各種(zhong)電(dian)生(sheng)理(li)、藥理(li)和(he)分子(zi)生(sheng)物學等(deng)實(shi)驗。體外培(pei)養(yang)細胞(bao)，由於影(ying)響因(yin)素(su)單(dan)壹(yi)，是(shi)研究細胞(bao)功(gong)能(neng)以及(ji)相應的(de)細(xi)胞信號轉(zhuan)導機制(zhi)的(de)基(ji)礎。
方法簡介：

公司(si)實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)小(xiao)鼠結腸(chang)平(ping)滑(hua)肌采(cai)用yi蛋白酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)聯(lian)合消(xiao)化(hua)法結(jie)合差速貼(tie)壁(bi)法制(zhi)備(bei)而來(lai)，細胞總量約為5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量檢(jian)測(ce)：

公司(si)實(shi)驗室(shi)分離(li)的(de)小(xiao)鼠結腸(chang)平(ping)滑(hua)肌經(jing)α-SMA免疫(yi)熒(ying)光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母(mu)和(he)真(zhen)菌等(deng)。

本公(gong)司(si)所有產(chan)品僅(jin)供科(ke)學實(shi)驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實(shi)驗外的(de)使用！

培(pei)養(yang)基 含(han)FBS、生長添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率(lv) 每2-3天換液壹(yi)次(ci)

生長特(te)性 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態 成纖維(wei)細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性 可傳(chuan)3代(dai)左(zuo)右(you)

消(xiao)化(hua)液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培(pei)養(yang)條件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工作(zuo)

1. 實(shi)驗器(qi)材準備(bei)：準(zhun)備無菌的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶、移(yi)液管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器械(xie)等(deng)，並(bing)進行高壓滅菌或(huo)其(qi)他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒處(chu)理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制或(huo)購買(mai)合適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗等(deng)試劑(ji)，確(que)保其(qi)無菌且在有效(xiao)期內。

3. 實(shi)驗動(dong)物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實(shi)驗需(xu)求，選擇(ze)合適(shi)的(de)動(dong)物並進行相應的(de)麻(ma)醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所需(xu)組織；或(huo)從已(yi)有的(de)組(zu)織樣本庫(ku)中獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材與處理(li)

1. 取(qu)材：在無菌條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡量減少對組織的(de)損(sun)傷，並去(qu)除(chu)多(duo)余的(de)脂肪、結締(di)組織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織用預冷(leng)的(de)無菌PBS沖(chong)洗數次(ci)，以去(qu)除(chu)血(xue)液和(he)雜(za)質(zhi)。

3. 剪切：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消(xiao)化(hua)。

細胞(bao)分離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有適(shi)量消(xiao)化(hua)酶(mei)的(de)離(li)心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒溫搖床(chuang)或(huo)培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間。期間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離(li)心管(guan)，使消(xiao)化(hua)更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大(da)部分被(bei)消(xiao)化(hua)成單(dan)細(xi)胞懸液或(huo)小(xiao)細胞(bao)團(tuan)時(shi)，加(jia)入含(han)血清的(de)培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾(lv)與離(li)心：用細胞篩過濾(lv)細(xi)胞(bao)懸液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織碎片，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液以(yi)適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速離(li)心，收(shou)集細胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀察：每天用倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞(bao)的(de)形(xing)態、生(sheng)長狀態、密度等(deng)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)的(de)變化情況(kuang)，如發現(xian)細(xi)胞汙染(ran)或(huo)異(yi)常，及(ji)時(shi)采(cai)取(qu)相應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞(bao)計數與活力(li)檢(jian)測(ce)：在需(xu)要時(shi)，可(ke)采用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方法對(dui)細(xi)胞進行計數(shu)和(he)活(huo)力(li)檢(jian)測(ce)，以了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長情況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀態。

壹、取(qu)材與分離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取(qu)材後(hou)需(xu)立即(ji)處理(li)，避免(mian)長時(shi)間暴露於室溫(wen)或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使用無菌 PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗組織，去除(chu)血(xue)液、雜(za)質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織(zhi)類(lei)型選擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避免(mian)過度(du)消(xiao)化(hua)導致細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間需(xu)嚴格(ge)控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分鐘），可通(tong)過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀察細胞(bao)解離(li)狀態。

二(er)、培(pei)養(yang)條件(jian)優(you)化

1. 培(pei)養(yang)基選(xuan)擇(ze)

- 使用含(han)血清或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長因子(zi)的(de)培(pei)養(yang)基（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞需(xu)添加胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁更換(huan)培(pei)養(yang)基品(pin)牌或(huo)批次(ci)，減少細胞適(shi)應(ying)壓力(li)。

2. 貼(tie)壁(bi)與傳代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞貼(tie)壁(bi)能力(li)較弱(ruo)，可(ke)能需(xu)要包被(bei)培(pei)養(yang)皿(min)（如膠(jiao)原蛋白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密度建議控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度匯(hui)合會導致接(jie)觸抑制(zhi)和(he)分化。

三、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超凈(jing)臺(tai)操(cao)作(zuo)，使用壹次(ci)性耗材，避免(mian)交(jiao)叉汙染(ran)。

- 培(pei)養(yang)基中(zhong)可(ke)添(tian)加雙抗，但(dan)長期使用可能影(ying)響細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)。

2. 支原體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支原體汙染(ran)（如(ru) PCR 法），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細胞(bao)。

四(si)、狀態監(jian)控

1. 日(ri)常觀察

- 每天檢(jian)查細胞形(xing)態、密度及(ji)培(pei)養(yang)基顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基（通(tong)常每 2-3 天換液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常形(xing)態（如(ru)細胞(bao)變圓(yuan)、碎片增(zeng)多(duo)）可(ke)能(neng)提(ti)示汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存

- 原代(dai)細(xi)胞分裂(lie)次(ci)數有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存早期代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存液建(jian)議使用 DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用凍(dong)存培(pei)養(yang)基），梯(ti)度降溫後(hou)液氮(dan)保存。