【概(gai)要(yao)描述】小鼠肺(fei)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞公司(si)正在(zai)出售的(de)產品：1膠質(zhi)瘤(liu)RM-1+LUC小鼠前(qian)列腺(xian)癌細(xi)胞熒(ying)光(guang)酶(mei)標記(ji)SDOW-17小(xiao)鼠雜交瘤(liu)Sp2/0小鼠骨(gu)髓(sui)瘤(liu)細(xi)胞Sp2/0-Ag14小(xiao)鼠骨(gu)髓(sui)瘤(liu)細(xi)胞STC-1小(xiao)鼠小(xiao)腸內(nei)分(fen)泌細(xi)胞SV40-MES-13小(xiao)鼠腎小球系膜(mo)細(xi)胞SVEC4-10小(xiao)鼠淋(lin)巴(ba)結血(xue)管(guan)上(shang)皮樣(yang)細(xi)胞 TC-1小(xiao)鼠肺(fei)上(shang)皮細(xi)胞TCMK-1小(xiao)鼠腎小管上(shang)皮細(xi)胞

小鼠肺(fei)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)分(fen)離(li)自(zi)肺(fei)組(zu)織(zhi)；肺(fei)是(shi)機(ji)體(ti)的(de)呼吸器(qi)官，位(wei)於胸腔(qiang)，左(zuo)右(you)各壹(yi)，覆蓋於心之上(shang)。肺(fei)有分(fen)葉(ye)，左(zuo)二(er)右(you)三(san)，共(gong)五葉。肺(fei)經肺(fei)系（指(zhi)氣(qi)管(guan)、支氣(qi)管(guan)等）與喉(hou)、鼻相連，故稱喉(hou)為肺(fei)之門戶(hu)，鼻為肺(fei)之外竅(qiao)。微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞密(mi)切(qie)參與包(bao)括再(zai)生、發(fa)育(yu)、傷口愈合等(deng)壹(yi)系列(lie)生(sheng)理及(ji)炎(yan)癥反(fan)應。細(xi)胞呈(cheng)梭形(xing)或(huo)多角(jiao)形，形成(cheng)單層(ceng)後呈(cheng)鵝卵(luan)石(shi)樣(yang)或鋪路石樣(yang)排列(lie)。肺(fei)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細(xi)胞構(gou)成(cheng)半選擇性(xing)屏(ping)障，該屏(ping)障對於肺(fei)氣(qi)體(ti)交換(huan)，調節液(ye)體(ti)和(he)可(ke)溶(rong)物在(zai)血(xue)液(ye)與肺(fei)間質(zhi)之間的(de)流動(dong)具有(you)重要(yao)意(yi)義(yi)。
方法(fa)簡(jian)介：

公司(si)實驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)小鼠肺(fei)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)采(cai)用(yong)組(zu)織(zhi)貼(tie)塊法(fa)並(bing)結合內(nei)皮(pi)細(xi)胞專(zhuan)用(yong)培(pei)養基(ji)培養篩(shai)選制備而來(lai)，細(xi)胞總量(liang)約為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)：

公司(si)實驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)小鼠肺(fei)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)經(jing)CD31免疫(yi)熒光(guang)鑒定，純度可(ke)達(da)90%以(yi)上(shang)，且不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真(zhen)菌等。

本(ben)公司(si)所有(you)產品僅供科學實驗，不(bu)做其他科學實驗外的(de)使(shi)用(yong)！

包被(bei)條件 PLL（0.1mg/ml），明(ming)膠（0.1%）

培養基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻率 每2-3天換液(ye)壹(yi)次

生長(chang)特(te)性(xing) 貼壁

細(xi)胞形(xing)態(tai) 內(nei)皮(pi)細(xi)胞樣(yang)

傳代(dai)特(te)性(xing) 可(ke)傳1-2代

消(xiao)化液(ye) 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養條(tiao)件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工(gong)作(zuo)

1. 實驗器(qi)材準備：準(zhun)備無(wu)菌的(de)培養皿、培養瓶、移液管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術(shu)器(qi)械等(deng)，並(bing)進行(xing)高(gao)壓滅(mie)菌或其他合適(shi)的(de)消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試劑準備：配(pei)制或購買合適(shi)的(de)培養基(ji)、消(xiao)化酶(mei)（如(ru)、膠原酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等(deng)試劑，確保其無(wu)菌且在(zai)有效期內(nei)。

3. 實驗動物或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源準備：根(gen)據實驗需求，選擇合適(shi)的(de)動物並(bing)進(jin)行相應的(de)麻醉或(huo)處(chu)死，獲(huo)取所需(xu)組(zu)織(zhi)；或(huo)從已有(you)的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲取組(zu)織(zhi)。

取材與處(chu)理

1. 取材：在無(wu)菌條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取出目(mu)標組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減(jian)少對組(zu)織(zhi)的(de)損傷，並去(qu)除多余的(de)脂(zhi)肪(fang)、結締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預冷的(de)無(wu)菌PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次，以(yi)去除(chu)血(xue)液(ye)和(he)雜質(zhi)。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織(zhi)剪成(cheng)約1 - 2mm³的(de)小塊(kuai)，以(yi)便後續(xu)消(xiao)化。

細(xi)胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入(ru)含(han)有適(shi)量消(xiao)化酶(mei)的(de)離(li)心管(guan)中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖床(chuang)或(huo)培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段時(shi)間。期間可(ke)輕輕搖(yao)晃(huang)離(li)心管(guan)，使(shi)消(xiao)化更(geng)均(jun)勻。

2. 終止消(xiao)化：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清的(de)培養基(ji)終止消(xiao)化。

3. 過濾(lv)與離(li)心：用(yong)細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片(pian)，然後將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收集(ji)細(xi)胞沈澱(dian)。

細(xi)胞觀察與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常觀察：每天用(yong)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀察細(xi)胞的(de)形態(tai)、生(sheng)長(chang)狀態(tai)、密(mi)度等，記(ji)錄(lu)細(xi)胞的(de)變化情況，如(ru)發(fa)現細(xi)胞汙(wu)染或(huo)異(yi)常，及時采取相應措(cuo)施(shi)。
2. 細(xi)胞計(ji)數與活力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采用(yong)臺(tai)盼藍染(ran)色等(deng)方法(fa)對細(xi)胞進(jin)行計(ji)數(shu)和(he)活力檢(jian)測(ce)，以(yi)了解(jie)細(xi)胞的(de)生長(chang)情況和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取材與分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組(zu)織(zhi)取材後需(xu)立(li)即(ji)處(chu)理，避(bi)免長(chang)時間暴露於室(shi)溫或(huo)非(fei)營養環(huan)境。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或(huo)生理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化酶(mei)選擇

- 根據(ju)組(zu)織(zhi)類型(xing)選擇消(xiao)化酶(mei)，避(bi)免過(guo)度消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞損傷。

- 消(xiao)化時(shi)間需(xu)嚴格控(kong)制（通常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過顯(xian)微(wei)鏡觀察細(xi)胞解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養條(tiao)件優化

1. 培養基(ji)選擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清或(huo)特(te)定生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細(xi)胞需(xu)添加(jia)胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避免頻繁更換培(pei)養基(ji)品牌或(huo)批(pi)次，減(jian)少細(xi)胞適(shi)應壓力。

2. 貼壁與傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞貼(tie)壁能(neng)力較(jiao)弱(ruo)，可(ke)能(neng)需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養皿（如膠原蛋(dan)白、多聚賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳代(dai)時密(mi)度建議控(kong)制在 70%-80%，過度匯合會(hui)導致接觸抑制和(he)分(fen)化。

三、汙(wu)染控(kong)制

1. 無(wu)菌操(cao)作(zuo)

- 全(quan)程在(zai)超凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次性耗(hao)材，避免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培養基(ji)中(zhong)可(ke)添加(jia)雙抗(kang)，但(dan)長(chang)期使(shi)用(yong)可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞活性。

2. 支原體(ti)檢測(ce)

- 定期檢(jian)測(ce)支原體(ti)汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染後需(xu)及時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控(kong)

1. 日(ri)常觀察

- 每天檢查(zha)細(xi)胞形(xing)態(tai)、密(mi)度及培養基(ji)顏色，及時更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)（通常每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常形態(tai)（如(ru)細(xi)胞變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多）可(ke)能(neng)提示(shi)汙染或營養不(bu)足。

2. 傳代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞分(fen)裂(lie)次數有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代），需及時凍(dong)存(cun)早(zao)期代(dai)次細(xi)胞。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養基(ji)），梯度降溫後液(ye)氮保存。