【概要(yao)描述(shu)】小(xiao)鼠腦膜成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)公司正在(zai)出(chu)售的(de)產品：SAOS-2-LUC人(ren)成(cheng)骨(gu)肉瘤(liu)細(xi)胞(bao)PC-9-Luc-GFP熒(ying)光酶(mei)/GFP標(biao)記的(de)人(ren)肺(fei)癌(ai)細胞(bao)NCI-H1975-Luc-GFP熒(ying)光酶(mei)/GFP標(biao)記的(de)人(ren)肺(fei)腺癌細(xi)胞(bao)OVCAR3-Luc-GFP熒(ying)光酶(mei)/GFP標(biao)記的(de)人(ren)卵(luan)巢(chao)癌細胞(bao)Jeko-1-Luc-GFP熒(ying)光酶(mei)/GFP標(biao)記的(de)人(ren)套(tao)細(xi)胞(bao)HL-60-Luc-GFP熒(ying)光酶(mei)/GFP標(biao)記的(de)人(ren)原(yuan)髓(sui)細胞(bao)B16-F10-Luc-GFP熒(ying)光酶(mei)

小鼠腦膜分(fen)離自(zi)腦膜組織；腦膜是顱骨(gu)與(yu)腦間的隔(ge)膜，壹(yi)共有三層，由外向(xiang)內為硬(ying)腦膜、蛛(zhu)網(wang)膜和(he)軟腦膜。腦膜細(xi)胞(bao)圍(wei)繞(rao)著大(da)腦，參(can)與(yu)中樞神(shen)經(jing)系(xi)統的正(zheng)常(chang)發育(yu)，能(neng)穩定(ding)腦軟膜表(biao)面(mian)的(de)細(xi)胞(bao)外基(ji)質、組織放射狀(zhuang)膠質細胞(bao)網(wang)絡(luo)和(he)小腦皮層(ceng)分(fen)層結構(gou)。
方法簡介：

公司實驗(yan)室(shi)分離的(de)小(xiao)鼠腦膜成(cheng)纖(xian)維(wei)采用yi蛋白酶(mei)-膠原酶(mei)混(hun)合(he)酶(mei)消(xiao)化後差(cha)速(su)貼(tie)壁(bi)制備(bei)而來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢(jian)測(ce)：

公司實驗(yan)室(shi)分離的(de)小(xiao)鼠腦膜成(cheng)纖(xian)維(wei)經(jing)Vimentin免(mian)疫熒(ying)光鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可達90%以(yi)上，且(qie)不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵母和(he)真菌(jun)等。

本(ben)公司所(suo)有產品僅(jin)供(gong)科學(xue)實(shi)驗(yan)，不(bu)做其(qi)他科學(xue)實(shi)驗(yan)外的(de)使(shi)用！

培養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長(chang)添加劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率 每2-3天(tian)換(huan)液壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特(te)性(xing) 貼(tie)壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態(tai) 成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

傳(chuan)代特(te)性(xing) 可傳(chuan)1-2代

消(xiao)化液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養條(tiao)件 氣(qi)相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工作(zuo)

1. 實(shi)驗(yan)器材準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌(jun)的培養皿(min)、培養瓶(ping)、移液管(guan)、離心(xin)管(guan)、手術器械等，並進行(xing)高壓滅(mie)菌(jun)或其(qi)他合(he)適(shi)的(de)消(xiao)毒處理。

2. 試劑(ji)準(zhun)備(bei)：配制(zhi)或購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養基(ji)、消(xiao)化酶(mei)（如、膠原酶(mei)等(deng)）、胎牛血(xue)清、雙抗等(deng)試(shi)劑(ji)，確(que)保(bao)其(qi)無菌(jun)且(qie)在(zai)有(you)效(xiao)期內。

3. 實驗動(dong)物(wu)或組織來(lai)源準(zhun)備(bei)：根據實驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇合(he)適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進行(xing)相應的(de)麻醉或處死，獲取(qu)所(suo)需組織；或從已(yi)有的(de)組織樣本(ben)庫中(zhong)獲取(qu)組織。

取(qu)材(cai)與(yu)處理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌(jun)條(tiao)件下，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標(biao)組織，盡量減少(shao)對(dui)組織的損(sun)傷，並去除多(duo)余的脂肪、結(jie)締(di)組織等非(fei)目的(de)組織。

2. 清洗：將(jiang)取(qu)出(chu)的組織用預(yu)冷(leng)的無菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以去除(chu)血(xue)液和(he)雜質。

3. 剪切：將(jiang)組織剪成約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以便後續消(xiao)化。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化：將(jiang)剪碎的(de)組織塊(kuai)放入含(han)有(you)適(shi)量消(xiao)化酶(mei)的(de)離心(xin)管(guan)中，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段時間。期間可輕輕搖晃(huang)離心(xin)管(guan)，使(shi)消(xiao)化更均(jun)勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化：當(dang)組織塊(kuai)大(da)部分被消(xiao)化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸液或小細(xi)胞(bao)團時(shi)，加入含(han)血(xue)清的培養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。

3. 過濾與(yu)離心(xin)：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸液，去除(chu)未(wei)消(xiao)化的(de)組織碎片(pian)，然後將(jiang)濾(lv)液以適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與檢(jian)測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每天用(yong)倒置顯微(wei)鏡觀(guan)察細胞(bao)的形(xing)態(tai)、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度等，記錄(lu)細(xi)胞(bao)的變(bian)化情(qing)況(kuang)，如發(fa)現(xian)細(xi)胞(bao)汙染或異常(chang)，及時采取(qu)相(xiang)應措(cuo)施。
2. 細胞(bao)計(ji)數與(yu)活力檢(jian)測(ce)：在(zai)需(xu)要時，可采用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方法對(dui)細胞(bao)進行(xing)計(ji)數和(he)活力檢(jian)測(ce)，以了(le)解細胞(bao)的生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健康(kang)狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織取(qu)材(cai)後需(xu)立即(ji)處理，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴露於室(shi)溫或非(fei)營(ying)養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無菌(jun) PBS 或生(sheng)理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組織，去除(chu)血(xue)液、雜質。

2. 消(xiao)化酶(mei)選(xuan)擇

- 根據組織類型(xing)選(xuan)擇消(xiao)化酶(mei)，避免(mian)過度消(xiao)化導(dao)致細(xi)胞(bao)損(sun)傷。

- 消(xiao)化時(shi)間需嚴格(ge)控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可通(tong)過顯微(wei)鏡觀(guan)察細胞(bao)解離狀(zhuang)態(tai)。

二(er)、培養條(tiao)件優化(hua)

1. 培養基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用含(han)血(xue)清或特定(ding)生(sheng)長(chang)因子的培養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需添加胰(yi)島(dao)素、EGF 等(deng)。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更換(huan)培養基(ji)品(pin)牌或批次(ci)，減少(shao)細胞(bao)適(shi)應壓力。

2. 貼壁(bi)與傳(chuan)代

- 原代細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需要(yao)包(bao)被培養皿(min)（如膠原蛋白、多(duo)聚賴(lai)氨酸）。

- 傳(chuan)代時(shi)密度建議(yi)控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致接觸抑(yi)制(zhi)和(he)分化(hua)。

三、汙染控制(zhi)

1. 無菌(jun)操作(zuo)

- 全程在(zai)超凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗材(cai)，避免(mian)交(jiao)叉汙染。

- 培養基(ji)中(zhong)可添加雙(shuang)抗，但(dan)長(chang)期使(shi)用可能(neng)影響細胞(bao)活性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢(jian)測(ce)

- 定(ding)期檢(jian)測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙染（如 PCR 法），汙染後需(xu)及(ji)時丟棄(qi)細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態(tai)監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、密度及培養基(ji)顏(yan)色，及(ji)時更換(huan)培養基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天換(huan)液壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形(xing)態(tai)（如細(xi)胞(bao)變圓(yuan)、碎(sui)片(pian)增多(duo)）可能(neng)提示(shi)汙染或營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳(chuan)代與(yu)凍存

- 原(yuan)代細(xi)胞(bao)分裂(lie)次(ci)數有限（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及時凍存早期代次(ci)細胞(bao)。

- 凍存液建議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或專用(yong)凍存培養基(ji)），梯(ti)度降溫(wen)後液氮保(bao)存(cun)。