【概要(yao)描(miao)述(shu)】小(xiao)鼠(shu)羊膜間質細(xi)胞公司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：TK6人(ren)成淋巴(ba)細(xi)胞LX-2-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)人肝星狀細(xi)胞CCRF-CEM-Luc熒光(guang)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)人急性淋巴(ba)細(xi)胞A172-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)人膠質母(mu)細胞COLO 205-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)人結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞(bao)RKO-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)人結腸(chang)腺癌(ai)細(xi)胞(bao)DLD-1-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)人結直腸(chang)腺癌(ai)上皮(pi)細胞(bao)HCT-15-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)人結直腸(chang)腺癌(ai)上皮(pi)細胞(bao)Caco-2-Luc熒(ying)光(guang)酶(mei)

本公(gong)司所(suo)有(you)產(chan)品僅(jin)供科(ke)學實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實(shi)驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用！

小(xiao)鼠(shu)羊膜間質分(fen)離自(zi)胎(tai)盤(pan)組織；胎(tai)盤(pan)（placenta）是哺(bu)乳動物妊娠(shen)期間由胚胎(tai)的(de)胚膜和母(mu)體(ti)子宮(gong)內(nei)膜(mo)聯合(he)長(chang)成(cheng)的(de)母子間交換(huan)物(wu)質的(de)過(guo)渡性器(qi)官(guan)，由羊膜、葉(ye)狀絨(rong)毛膜和底蛻(tui)膜構成。胎(tai)兒(er)在子宮(gong)中(zhong)發(fa)育，依(yi)靠(kao)胎(tai)盤(pan)從母體(ti)取得營(ying)養，而雙(shuang)方(fang)保(bao)持(chi)相(xiang)當的(de)獨立(li)性。胎(tai)盤(pan)還產(chan)生(sheng)多(duo)種(zhong)維持妊娠(shen)的(de)激素，是壹(yi)個重要(yao)的(de)內(nei)分(fen)泌器(qi)官(guan)。有(you)些爬行(xing)類和魚類也以胎(tai)生(sheng)方(fang)式繁(fan)殖(zhi)後(hou)代(dai)，胚胎(tai)生(sheng)長(chang)出(chu)壹(yi)些輔助(zhu)結構如(ru)卵(luan)黃囊(nang)、鰓絲等與(yu)母體(ti)組織(zhi)緊密結合(he)，以達到母(mu)子(zi)間(jian)物質的(de)交換(huan)，這(zhe)樣(yang)的(de)結構稱假胎(tai)盤(pan)。羊膜是(shi)胎(tai)盤(pan)的(de)最內(nei)層(ceng)，與眼結(jie)膜(mo)組(zu)織結構相似，含有(you)眼表(biao)上皮(pi)細胞(bao)，包(bao)括結(jie)膜(mo)細(xi)胞和角(jiao)膜上皮(pi)細胞(bao)生(sheng)長(chang)所(suo)需要(yao)的(de)物質，其(qi)光(guang)滑，無(wu)血(xue)管、神(shen)經及(ji)淋巴(ba)，具(ju)有(you)壹(yi)定的(de)彈性；在電鏡下，其(qi)分(fen)為(wei)五層(ceng)：上皮(pi)層(ceng)、基底膜(mo)、致密層(ceng)、纖(xian)維母細(xi)胞層(ceng)和海綿(mian)層(ceng)，羊膜(mo)基底膜(mo)和羊(yang)膜羊膜(mo)基(ji)質層(ceng)含有(you)大量(liang)不同(tong)的(de)膠元，主要(yao)為(wei)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠(jiao)原和纖(xian)維粘連(lian)蛋(dan)白、層(ceng)粘連(lian)蛋(dan)白等成(cheng)份。羊(yang)膜細胞主(zhu)要(yao)由羊(yang)膜上皮(pi)細胞(bao)和羊(yang)膜間充(chong)質細(xi)胞組成(cheng)，均具(ju)有(you)多分(fen)化潛(qian)能，可(ke)轉(zhuan)化為(wei)神(shen)經元，且還有(you)合(he)成、釋(shi)放生(sheng)物(wu)活性物(wu)質和神(shen)經營(ying)養因子的(de)功(gong)能(neng)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公司(si)實驗(yan)室分(fen)離的(de)小(xiao)鼠(shu)羊膜間質采用yi蛋(dan)白酶-膠原酶(mei)聯(lian)合(he)消化法(fa)制備(bei)而來(lai)，細胞(bao)總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測：

公司(si)實驗(yan)室分(fen)離的(de)小(xiao)鼠(shu)羊膜間質經(jing)Vimentin免疫(yi)熒光(guang)鑒(jian)定，純(chun)度(du)可(ke)達90%以上，且不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌(jun)、酵母和真(zhen)菌(jun)等。

培養基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率 每2-3天換(huan)液壹(yi)次

生(sheng)長(chang)特(te)性 貼壁

細胞(bao)形(xing)態 成纖(xian)維細胞(bao)樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特性 可(ke)傳(chuan)3代左(zuo)右

消化液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶

培養條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空氣，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實驗(yan)器(qi)材(cai)準備：準備無(wu)菌(jun)的(de)培養皿、培養瓶(ping)、移(yi)液管、離心管、手(shou)術器(qi)械(xie)等，並進(jin)行(xing)高(gao)壓滅菌(jun)或其他(ta)合(he)適的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑準備：配制或(huo)購(gou)買合(he)適的(de)培養基(ji)、消化酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清、雙(shuang)抗等試劑，確(que)保(bao)其(qi)無(wu)菌(jun)且在有(you)效(xiao)期內(nei)。

3. 實驗(yan)動(dong)物(wu)或組織(zhi)來源(yuan)準備：根據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選擇(ze)合(he)適的(de)動物並進(jin)行(xing)相應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或處(chu)死，獲(huo)取(qu)所(suo)需組(zu)織；或從已(yi)有(you)的(de)組織樣(yang)本庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織(zhi)。

取材(cai)與處(chu)理(li)

1. 取材(cai)：在無(wu)菌(jun)條件(jian)下(xia)，迅(xun)速(su)取(qu)出(chu)目標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少對(dui)組織(zhi)的(de)損傷(shang)，並去除(chu)多(duo)余的(de)脂肪、結締(di)組(zu)織等非目(mu)的(de)組織。

2. 清洗(xi)：將(jiang)取出(chu)的(de)組織用預冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次，以去除(chu)血(xue)液(ye)和雜質。

3. 剪(jian)切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以便後續消化。

細胞(bao)分(fen)離

1. 消化：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的(de)組織塊(kuai)放入含有(you)適量(liang)消化酶(mei)的(de)離心管中(zhong)，在37℃恒溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養箱(xiang)中(zhong)消化壹(yi)段(duan)時間。期(qi)間可(ke)輕輕搖(yao)晃離(li)心管，使(shi)消化更均勻(yun)。

2. 終止消化：當組(zu)織塊(kuai)大(da)部分(fen)被(bei)消化成(cheng)單細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細(xi)胞團時，加入(ru)含血(xue)清的(de)培養基(ji)終止消化。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離(li)心：用細胞篩過(guo)濾(lv)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除(chu)未(wei)消化的(de)組織碎(sui)片，然後(hou)將(jiang)濾(lv)液(ye)以適當的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心，收集(ji)細胞沈澱。

細胞(bao)觀察與檢測

1. 日常觀察(cha)：每天用倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細胞(bao)的(de)形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密度等，記(ji)錄細(xi)胞的(de)變(bian)化情況(kuang)，如(ru)發現(xian)細(xi)胞(bao)汙(wu)染(ran)或(huo)異(yi)常，及時(shi)采取相應措施(shi)。
2. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)與(yu)活(huo)力檢測：在需要(yao)時，可(ke)采用臺盼藍(lan)染(ran)色等方(fang)法(fa)對(dui)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活(huo)力檢測，以了解細胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)情況(kuang)和健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材(cai)與分(fen)離

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組織(zhi)取材後需立(li)即(ji)處(chu)理(li)，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)室溫或(huo)非營(ying)養環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌(jun) PBS 或生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗(xi)組織，去除(chu)血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消化酶(mei)選擇(ze)

- 根據(ju)組(zu)織(zhi)類型選擇(ze)消化酶(mei)，避免(mian)過(guo)度(du)消化導(dao)致細胞損傷(shang)。

- 消化時(shi)間需嚴格控制（通常 10-30 分(fen)鐘），可(ke)通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細胞(bao)解離狀(zhuang)態。

二、培養條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含血(xue)清或(huo)特(te)定生(sheng)長(chang)因子的(de)培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞(bao)需添(tian)加胰島(dao)素、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更換培養基(ji)品牌或批次，減少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓力。

2. 貼壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細胞貼壁能(neng)力較弱(ruo)，可(ke)能需要(yao)包被(bei)培養皿（如(ru)膠原(yuan)蛋(dan)白、多聚(ju)賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密(mi)度(du)建議(yi)控制在 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合(he)會導致接觸(chu)抑制和分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控制

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在超(chao)凈臺操作，使(shi)用壹(yi)次性耗(hao)材(cai)，避(bi)免交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培養基(ji)中(zhong)可(ke)添(tian)加雙(shuang)抗，但長(chang)期(qi)使(shi)用可(ke)能影(ying)響細(xi)胞活性。

2. 支原(yuan)體(ti)檢測

- 定期(qi)檢測支原體(ti)汙(wu)染(ran)（如(ru) PCR 法），汙(wu)染(ran)後(hou)需及(ji)時丟棄(qi)細胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監控

1. 日常觀察(cha)

- 每天(tian)檢查細胞形(xing)態、密度及培養基(ji)顏色，及時(shi)更換培養基(ji)（通常每 2-3 天(tian)換液壹(yi)次）。

- 異常形(xing)態（如(ru)細胞(bao)變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多）可(ke)能提(ti)示汙(wu)染(ran)或(huo)營(ying)養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細胞分(fen)裂次數(shu)有(you)限（壹(yi)般 5-10 代），需及(ji)時凍存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次細胞。

- 凍存(cun)液(ye)建議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或(huo)專(zhuan)用凍存(cun)培養基(ji)），梯(ti)度降溫後(hou)液(ye)氮保存(cun)。