【概(gai)要(yao)描(miao)述(shu)】小(xiao)鼠(shu)腹(fu)膜(mo)間皮細(xi)胞公(gong)司(si)正在出售的(de)產(chan)品(pin)：HT-1376膀胱(guang)癌(ai)HELA+LUC人(ren)宮頸癌(ai)細(xi)胞HeLa229人宮(gong)頸癌(ai)細(xi)胞C-4II人宮(gong)頸鱗狀(zhuang)細胞Ect1/E6E7 BSL-1人宮(gong)頸上皮/陰(yin)道(dao)上(shang)皮HCerEpiCs-SV40T人(ren)宮頸上皮細(xi)胞143B/LUC (STR)人骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細胞U-2OS/GFP (STR)人骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細胞143B/RFP (STR)人骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細胞HOS/LUC (STR)人骨(gu)肉(rou)瘤(liu)細胞

本公(gong)司(si)所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科學實驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科學實驗外(wai)的(de)使(shi)用(yong)！

小(xiao)鼠(shu)腹(fu)膜(mo)間皮分(fen)離(li)自(zi)腹(fu)膜(mo)組織(zhi)；腹(fu)膜(mo)是存在(zai)於(yu)高等脊(ji)椎動物腹(fu)腔中(zhong)的(de)壹(yi)層黏膜(mo)，主要(yao)由間皮細(xi)胞構成(cheng)，藉由結締(di)組織(zhi)的(de)支持所形(xing)成的(de)壹(yi)層膜(mo)狀(zhuang)組織(zhi)。腹(fu)膜(mo)包(bao)覆(fu)大部(bu)分(fen)腹(fu)腔內(nei)的(de)器(qi)官(guan)，能(neng)分(fen)泌(mi)黏液(ye)潤濕(shi)臟器的(de)表面，減輕(qing)臟器間(jian)的(de)摩擦。腹(fu)腔臟器的(de)血(xue)液(ye)、淋巴和神(shen)經(jing)組織(zhi)經(jing)由腹(fu)膜(mo)與外(wai)界相(xiang)連(lian)；腹(fu)膜(mo)也具(ju)有吸(xi)收撞(zhuang)擊(ji)保(bao)護(hu)內(nei)臟的(de)效(xiao)果(guo)。腹(fu)膜(mo)（peritoneum）為(wei)全(quan)身面積最(zui)大、配(pei)布最(zui)復雜(za)的(de)漿(jiang)膜(mo)，由皮及(ji)少(shao)量結(jie)締(di)組織(zhi)構(gou)成(cheng)，薄而(er)光滑(hua)，呈半(ban)透(tou)明(ming)狀(zhuang)。襯於(yu)腹(fu)、盆腔壁(bi)內(nei)表面的(de)腹(fu)膜(mo)稱(cheng)為(wei)壁(bi)腹(fu)膜(mo)（parietal-peritoneum）或(huo)腹(fu)壁(bi)薄層；覆(fu)蓋腹(fu)、盆腔器(qi)表面的(de)部(bu)分(fen)稱(cheng)為(wei)臟腹(fu)膜(mo)（visceral-peritoneum）腹(fu)膜(mo)或(huo)腹(fu)膜(mo)臟層。臟腹(fu)膜(mo)與壁(bi)腹(fu)膜(mo)互相(xiang)延(yan)續(xu)、移(yi)行(xing)，共同(tong)圍(wei)成(cheng)不(bu)規則(ze)的(de)潛(qian)在性(xing)腔(qiang)隙，稱(cheng)為(wei)腹(fu)膜(mo)腔（peritoneal-cavity）。腹(fu)膜(mo)腔是臟、壁(bi)兩(liang)層腹(fu)膜(mo)之間(jian)相(xiang)互移(yi)行(xing)圍成(cheng)的(de)潛(qian)在性(xing)間(jian)隙。腹(fu)膜(mo)腔內(nei)有少(shao)量漿(jiang)液(ye)，在臟器活動時(shi)可減少(shao)摩擦。腹(fu)膜(mo)間皮細(xi)胞屬於(yu)上(shang)皮組織(zhi)中(zhong)的(de)單(dan)層扁(bian)平(ping)上(shang)皮，是覆(fu)蓋於(yu)腹(fu)膜(mo)表面的(de)壹(yi)層細(xi)胞。間皮細(xi)胞是構成(cheng)間皮的(de)細(xi)胞，正常大小(xiao)約(yue)為(wei)15-25微(wei)米，細(xi)胞常呈圓形(xing)或(huo)者卵(luan)圓形(xing)。其功用(yong)是提供(gong)潤滑(hua)，使(shi)器官(guan)與(yu)器(qi)官(guan)、器(qi)官(guan)與(yu)胸(xiong)膜(mo)與腹(fu)膜(mo)間都能得到(dao)良好的(de)保(bao)護(hu)，不(bu)會互相(xiang)磨(mo)損(sun)受(shou)傷。而(er)間皮所(suo)生(sheng)產(chan)的(de)潤(run)滑和(he)保護(hu)作(zuo)用(yong)就(jiu)是靠間(jian)皮細(xi)胞所分(fen)泌(mi)的(de)物質來(lai)達成，分(fen)泌(mi)物多半(ban)為(wei)細(xi)胞外基(ji)質、玻(bo)尿酸類(lei)物質。
方法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司(si)實驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)小(xiao)鼠(shu)腹(fu)膜(mo)間皮采(cai)用(yong)混合(he)膠原(yuan)酶消(xiao)化(hua)法(fa)制備而(er)來，細胞總量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司(si)實驗室(shi)分(fen)離(li)的(de)小(xiao)鼠(shu)腹(fu)膜(mo)間皮經(jing)PCK、Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(da)90%以(yi)上(shang)，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原(yuan)體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵母和真(zhen)菌(jun)等。

包(bao)被(bei)條(tiao)件(jian) 鼠(shu)尾膠原(yuan)Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基(ji) 含FBS、生(sheng)長(chang)添(tian)加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率(lv) 每2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生(sheng)長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞形(xing)態 成纖(xian)維(wei)細胞樣

傳(chuan)代(dai)特(te)性(xing) 可傳(chuan)3代(dai)左右(you)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶

培養條件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工作(zuo)

1. 實驗器(qi)材準(zhun)備：準備無(wu)菌(jun)的(de)培(pei)養皿、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管、離(li)心(xin)管、手(shou)術器械等，並進(jin)行高壓滅菌(jun)或(huo)其(qi)他(ta)合(he)適的(de)消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或(huo)購(gou)買合(he)適的(de)培(pei)養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶（如、膠原(yuan)酶等）、胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗等試劑，確(que)保(bao)其無(wu)菌(jun)且(qie)在有(you)效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實驗動物或(huo)組織(zhi)來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實驗需求(qiu)，選擇合(he)適的(de)動物並進行相(xiang)應(ying)的(de)麻醉(zui)或(huo)處死，獲取所需組織(zhi)；或(huo)從已有(you)的(de)組織(zhi)樣本庫(ku)中(zhong)獲(huo)取組織(zhi)。

取材與(yu)處理(li)

1. 取材：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅(xun)速(su)取出目(mu)標(biao)組織(zhi)，盡(jin)量(liang)減少(shao)對(dui)組織(zhi)的(de)損(sun)傷，並去除多余的(de)脂肪、結(jie)締(di)組織(zhi)等非目(mu)的(de)組織(zhi)。

2. 清(qing)洗：將取出的(de)組織(zhi)用(yong)預(yu)冷的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切：將組織(zhi)剪成約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細胞分(fen)離(li)

1. 消(xiao)化(hua)：將剪碎的(de)組織(zhi)塊(kuai)放(fang)入(ru)含(han)有(you)適量消(xiao)化(hua)酶的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床或(huo)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段時(shi)間。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃(huang)離心(xin)管，使(shi)消(xiao)化(hua)更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組織(zhi)塊(kuai)大(da)部(bu)分(fen)被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細胞懸液(ye)或(huo)小(xiao)細(xi)胞團時(shi)，加入含血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過濾與(yu)離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩過濾細(xi)胞懸液(ye)，去除未(wei)消(xiao)化(hua)的(de)組織(zhi)碎片(pian)，然(ran)後(hou)將濾液(ye)以(yi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收集細胞沈澱(dian)。

細胞觀察與檢(jian)測

1. 日常(chang)觀察：每天用(yong)倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細胞的(de)形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、密度等，記(ji)錄細胞的(de)變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發(fa)現(xian)細胞汙(wu)染或(huo)異(yi)常，及(ji)時(shi)采取相(xiang)應(ying)措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計(ji)數(shu)與活力檢(jian)測：在需要(yao)時(shi)，可采(cai)用(yong)臺(tai)盼藍染色等方法對(dui)細胞進行(xing)計(ji)數(shu)和活力檢(jian)測，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)和(he)健(jian)康(kang)狀(zhuang)態。

壹(yi)、取材與(yu)分(fen)離(li)

1. 快速(su)操(cao)作(zuo)

- 組織(zhi)取材後(hou)需立即(ji)處理(li)，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或(huo)非(fei)營(ying)養環境。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消(xiao)化(hua)酶選擇

- 根(gen)據組織(zhi)類(lei)型(xing)選擇消(xiao)化(hua)酶，避(bi)免(mian)過度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細胞損傷。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間需嚴(yan)格(ge)控制(zhi)（通常 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察細胞解離(li)狀(zhuang)態。

二、培(pei)養條件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養基(ji)選擇

- 使(shi)用(yong)含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長(chang)因子的(de)培(pei)養基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分(fen)細(xi)胞需添(tian)加胰島(dao)素(su)、EGF 等。

- 避免(mian)頻(pin)繁(fan)更換培養基(ji)品(pin)牌或(huo)批(pi)次(ci)，減少(shao)細胞適應(ying)壓力。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞貼壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱(ruo)，可能(neng)需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養皿（如膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)、多聚賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時(shi)密度建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯(hui)合(he)會(hui)導(dao)致(zhi)接觸抑(yi)制(zhi)和(he)分(fen)化(hua)。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺(tai)操(cao)作(zuo)，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

- 培養基(ji)中(zhong)可添(tian)加雙抗，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)可能(neng)影(ying)響(xiang)細(xi)胞活性(xing)。

2. 支原(yuan)體(ti)檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測支原(yuan)體(ti)汙(wu)染（如 PCR 法），汙(wu)染後(hou)需及(ji)時(shi)丟棄細胞。

四、狀(zhuang)態監控

1. 日常(chang)觀察

- 每天檢(jian)查細(xi)胞形(xing)態、密度及(ji)培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時(shi)更換(huan)培養基(ji)（通(tong)常每 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常形(xing)態（如細胞變(bian)圓(yuan)、碎片(pian)增(zeng)多）可能(neng)提示(shi)汙(wu)染或(huo)營(ying)養不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代(dai)細(xi)胞分(fen)裂(lie)次(ci)數(shu)有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及(ji)時(shi)凍存(cun)早(zao)期(qi)代(dai)次(ci)細胞。

- 凍存(cun)液(ye)建議(yi)使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存(cun)培(pei)養基(ji)），梯度降溫後(hou)液(ye)氮保(bao)存。